【技术实现步骤摘要】
一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法
本专利技术涉及一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法,属于生物工程
技术介绍
:转录水平的基因表达调控需要严谨调控的启动子,同时要求启动子具有可诱导、可放大。现有基因表达调控系统诱导剂价格昂贵且需要特定培养基成分很难用于大规模发酵。将代谢途径基因中的氨基酸密码子替换成其稀有形式,氨基酸缺乏条件下基因不表达,外源补加对应氨基酸可实现该基因表达。利用稀有密码子进行基因表达调控拥有诸多优势。首先,实现基因翻译水平更加精准的调控,减少泄露表达。其次,稀有密码子对基因表达的调控只作用于含有此密码子的基因中,不会干扰到其他基因的表达和影响菌体的正常生长;而诱导物是氨基酸相对廉价易得,对细胞无毒害作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法,利用密码子偏好性和tRNA氨酰化水平的差异,在翻译水平上,简单有效地通过补加氨基酸实现基因表达调控,为代谢工程的基因表达调控提供新的方法。按照本专利技术提供的技术方案,一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法,采用以下方法步骤:1.需要确定所用菌株和所需调控的基因,确定所用菌株的密码子偏好性。2.根据氨基酸密码子偏好性和调控基因序列,确定选用的氨基酸和其稀有密码子,将所需调控基因中的相应氨基酸的密码子替换为对应的稀有密码子,使用PCR方法重新人工合成此序列。3.将步骤2中人工合成的基因序列与质粒载体连接,将连接产物化 ...
【技术保护点】
1.一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法,其是通过生物对密码子的偏好性,胞内翻译过程中个别密码子利用频率和其对应的tRNA在宿主胞内浓度较低,将代谢途径基因中的氨基酸密码子替换成其稀有形式,实现翻译水平的基因表达调控。/n
【技术特征摘要】
1.一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法,其是通过生物对密码子的偏好性,胞内翻译过程中个别密码子利用频率和其对应的tRNA在宿主胞内浓度较低,将代谢途径基因中的氨基酸密码子替换成其稀有形式,实现翻译水平的基因表达调控。
2.根据权利要求所述一种利用稀有密码子在翻译水平调控基因表达的方法,其特征在于采用如下步骤:
A.需要确定所用菌株和所需调控的基因,确定所用菌株的密码子偏好性。
B.根据氨基酸密码子偏好性和调控基因序列,确定选用的氨基酸和其稀有密码子,将所需调控基因中的相应氨基酸的密码子替换为对应的稀有密码子,使用PCR方法重新人工合成此序列;
C.将步骤2中人工合成的基因序列与质粒载体连接,将连接产物化转至感受态细胞中,经过PCR验证,挑选正确的单菌落,保存菌...
【专利技术属性】
技术研发人员:霍毅欣,郑博,王宁,
申请(专利权)人:北京理工大学,
类型:发明
国别省市:北京;11
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