核桃青皮中一种双咖啡酰基成分及其制备工艺和抗炎用途制造技术

本发明专利技术属于农林废弃物及次生代谢活性天然产物应用领域，具体涉及一种文献中从未报道过的双咖啡酰基葡萄糖苷即1，6‑二‑O‑反式咖啡酰基‑3‑O‑没食子酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷及其制备工艺和抗炎用途。它是以胡桃科胡桃属的核桃青皮为原料，经提取萃取和分离而得到。本发明专利技术提出的制备方法具有工艺过程简单、产品抗炎活性显著、过程易于控制、原料成本低等特点。

A dicaffeoyl component in walnut green skin and its preparation technology and anti-inflammatory use

【技术实现步骤摘要】
核桃青皮中一种双咖啡酰基成分及其制备工艺和抗炎用途
本专利技术属于农林废弃物及次生代谢活性天然产物应用领域，具体涉及一种文献中从未报道过的双咖啡酰基葡萄糖苷即1，6-二-O-反式咖啡酰基-3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(1，6-di-O-trans-caffeoyl-3-O-galloyl-β-D-glucopyranoside)及其制备工艺和抗炎用途。
技术介绍
胡桃科(Juglandanceae)胡桃属(Juglans)乔木核桃又称胡桃、羌桃，与扁桃、腰果、榛子并称为世界著名的“四大干果”。核桃堪称干果之“王”，营养价值极高，比如其所含的精氨酸、油酸、抗氧化物质等可有效保护心血管，并可预防冠心病、中风、老年痴呆等疾病。核桃中还含有多种植物甾醇，可降低血液中的胆固醇。此外，核桃还富含纤维素、蛋白质、维生素、矿物质，包括叶酸、维生素E、钾元素、镁元素以及人体必需的ω-3脂肪酸，有助于皮肤健康(童彤，中国果业信息，2017，34(5)：59)。核桃树较适宜种植于气温适中的环境，是一种典型的“山区果树”(郭永生，等，生物技术世界，2013，12：19)。天津地区栽培核桃已有几百年的历史，产地主要在蓟县山区，约有核桃树近百万株，是全国主要产核桃的地区之一。黄花山核桃是天津市蓟县的特产，据《蓟县志》记载，黄花山核桃已有600余年的历史(贾爱军，等，天津农林科技，2019，(01)：28～31+38)。核桃青皮是核桃未成熟的外果皮，核桃收获期间会产生大量的核桃青皮，但是核桃青皮通常会被当作农林废弃物进行处理，导致了极大的资源浪费(Femandez-AgulloA.，etal.，IndustrialCropsandProducts，2013，42：126～132)。核桃青皮又称为青龙衣，在日本、朝鲜及我国作为中药被广泛使用，具有清热解毒、止痛、治疗皮肤疾病等作用，同时对癌症的治疗有一定的功效(LiuJ.X.，etal.，JournalofChromatographyA，2008，1190(1)：80～85；TabarakiR.，etal.，KoreanJournalofChemicalEngineering，2014，31(4)：676～683；季宇彬，等，中草药，2004，35(10)：71～73；周媛媛，等，中医药信息，2010，27(2)：18～20)。对于核桃青皮中的化学成分的研究，现已部分开展，据报道的成分主要有二芳基庚烷、萘醌、黄酮及苯丙素类等(杨炳友，等，中草药，2015，46(4)：481～485)。邱继莹等对核桃青皮75％乙醇提取物的化学成分进行了研究，分离得到15个化合物，分别鉴定为表二氢菜豆酸、4-丁氧基-5，8-二羟基-3，4-二氢-萘酮、4-乙氧基-5，8-二羟基-3，4-二氢萘酮、茸毛香杨梅苷元、多节孢酮、4S-甲氧基-5，8-二羟基-二氢萘酮、4-甲氧基-5-羟基-α-四氢萘酮、胡桃种萘醌、4，5，8-三羟基-1，2，3，4-四氢-α-萘酮、苹果酸-1-单乙酯、苹果酸-1-单丁酯、丁二酸、葡萄糖乙苷、1α，2α，4β-三羟基-1，2，3，4-四氢萘、L-2-O-甲基-手性肌醇，其中表二氢菜豆酸、茸毛香杨梅苷元、L-2-O-甲基-手性肌醇为首次从核桃青皮中分离得到(邱继莹，等，中草药，2017，48(12)：2385～2389)。孙冬雪等从核桃青皮95％甲醇提取物的二氯甲烷萃取部位中分离鉴定出了14个化合物，分别为5-hydroxy-4-methoxy-1-tetralone、4，8-dihydroxy-1-tetralone、4，5-二羟基-α-四氢萘醌、blumenolB、dehydrovomifoliol、megastigm-5-ene-3，9-diol、胡桃宁B、blumenolC、黑麦草内酯、oleraconeB、丁香脂素、松脂醇、香草酸甲酯和异香草酸。其中化合物5-hydroxy-4-methoxy-1-tetralone、blumenolB、dehydrovomifoliol、megastigm-5-ene-3，9-diol、blumenolC、黑麦草内酯、oleraconeB、丁香脂素、松脂醇、香草酸甲酯为首次从青龙衣中分离得到(孙冬雪，等，中国中药杂志，2019，44(11)：2278～2282)。但到目前为止，对核桃青皮化学成分，特别是其抗炎次生代谢化学成分的研究仍不够充分和系统。本专利技术利用有机溶剂提取萃取和色谱分离手段从核桃青皮中制备得到一种新的且具有显著抗炎活性的双反式咖啡酰基葡萄糖苷化合物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有显著抗炎活性的双咖啡酰基葡萄糖苷即1，6-二-O-反式咖啡酰基-3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(该化合物对应的英文名为1，6-di-O-trans-caffeoyl-3-O-galloyl-β-D-glucopyranoside)。本专利技术的另一个目的是提供从胡桃科胡桃属核桃树的青皮中制备1，6-二-O-反式咖啡酰基-3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷的方法。本专利技术的第三个目的是提供1，6-二-O-反式咖啡酰基-3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷的抗炎活性功效用途。本专利技术的技术方案概述如下：下述结构式的化合物：从桃青皮中制备1，6-二-O-反式咖啡酰基-3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷的方法，包括如下步骤：(1)取洗净、阴干并粉碎过60目筛的核桃青皮，按质量比为1∶1～1∶5加入体积百分浓度为70％～85％的丙酮水溶液，常温提取或加热提取或微波辅助提取1～5次，每次0.5～72小时，过滤，滤液减压浓缩至原体积的2％～8％，得粗提物；(2)加入粗提物质量1～4倍的水，搅拌，加入粗提物质量2～5倍的正己烷萃取1～4次，分离掉正己烷层，向剩余水层中加入粗提物质量2～5倍的乙酸乙酯萃取1～4次，分离乙酸乙酯层和水层，向剩余水层中加入粗提物质量2～5倍的石油醚萃取1～4次，分离石油醚层和最后水层，将石油醚层减压浓缩得石油醚萃取物；(3)石油醚萃取物经硅胶柱层析和凝胶柱层析之至少一种并配合大孔树脂D101真空柱层析制备得到1，6-二-O-反式咖啡酰基-3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷。上述制备工艺中，所用的的核桃青皮植物原料为胡桃科胡桃属中任何一种核桃树的核桃青皮。实验证实本专利技术的化合物分子式为C31H28O16，化学名为1，6-二-O-反式咖啡酰基-3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷，该化合物对应的英文名为1，6-di-O-trans-caffeoyl-3-O-galloyl-β-D-glucopyranoside。该化合物为白色无定型粉末，其熔点为190～192℃，旋光度为PositiveFAB-MSm/z[M+H]+为657，m/z[M+Na]+为679，m/z[M+K]+为695。实验证实RAW264.7巨噬细胞经LPS诱导后，1，6-二-O-反式咖啡酰基-3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双咖啡酰基葡萄糖苷即1，6-二-O-反式咖啡酰基-3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法，其特征是按顺序包括如下步骤：/n(1)取洗净、阴干并粉碎过60目筛的核桃青皮，按质量比为1∶1～1∶5加入体积百分浓度为70％～85％的丙酮水溶液，常温提取或加热提取或微波辅助提取1～5次，每次0.5～72小时，过滤，滤液减压浓缩至原体积的2％～8％，得粗提物；/n(2)加入粗提物质量1～4倍的水，搅拌，加入粗提物质量2～5倍的正己烷萃取1～4次，分离掉正己烷层，向剩余水层中加入粗提物质量2～5倍的乙酸乙酯萃取1～4次，分离乙酸乙酯层和水层，向剩余水层中加入粗提物质量2～5倍的石油醚萃取1～4次，分离石油醚层和最后水层，将石油醚层减压浓缩得石油醚萃取物；/n(3)石油醚萃取物经硅胶柱层析和凝胶柱层析之至少一种并配合大孔树脂D101真空柱层析制备得到1，6-二-O-反式咖啡酰基-3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷。/n

【技术特征摘要】
1.一种双咖啡酰基葡萄糖苷即1，6-二-O-反式咖啡酰基-3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法，其特征是按顺序包括如下步骤：
(1)取洗净、阴干并粉碎过60目筛的核桃青皮，按质量比为1∶1～1∶5加入体积百分浓度为70％～85％的丙酮水溶液，常温提取或加热提取或微波辅助提取1～5次，每次0.5～72小时，过滤，滤液减压浓缩至原体积的2％～8％，得粗提物；
(2)加入粗提物质量1～4倍的水，搅拌，加入粗提物质量2～5倍的正己烷萃取1～4次，分离掉正己烷层，...

【专利技术属性】
技术研发人员：司传领，韩笑，刘坤，许家云，刘慰，张淑亚，陈佳宁，张筱仪，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12