绿原酸在抑制铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达运动中的应用制造技术

本发明专利技术公开了绿原酸在抑制铜绿假单胞菌胞内c‑di‑GMP高表达运动中的应用，并具体提供了抑制方法和绿原酸的浓度。本发明专利技术证明了绿原酸能够抑制铜绿假单胞菌胞内c‑di‑GMP高表达，从而抑制铜绿假单胞菌的运动。通过本发明专利技术能够抑制铜绿假单胞菌的运动，并且为寻找有效干预铜绿假单胞菌的药物作用靶点提供依据。

Application of chlorogenic acid in inhibiting the high expression of c-di-GMP in Pseudomonas aeruginosa

【技术实现步骤摘要】
绿原酸在抑制铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达运动中的应用
本专利技术涉及一种抑制菌类运动的方法，属于微生物

技术介绍
人类诸多感染性疾病的研究表明，致病菌在人体内存在的形式主要是以生物被膜的状态存在，目前研究表明生物被膜对于人体的致病力远远高于浮游菌，国内外研究表明抗生素对于生物被膜的抑制作用所需剂量为对浮游菌抑制作用所需剂量的30-2000倍。研究表明，慢阻肺合并肺内感染患者及肺囊性纤维化化患者肺内长期定植菌常见为铜绿假单胞菌，其中铜绿假单胞菌混合烟曲霉菌感染是最常见的混合感染类型，两者往往以混合生物被膜的形式存在于患者肺内，因而抗炎治疗效果欠佳。铜绿假单胞菌为条件致病菌，是医院内感染的主要病原菌之一。患代谢性疾病、血液病和恶性肿瘤的患者，以及术后或某些治疗后的患者易感染本菌。经常引起术后伤口感染，也可引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎等。本菌引起的感染病灶可导致血行散播，而发生菌血症和败血症。烧伤后感染了铜绿色假单胞菌可造成死亡。本菌普遍存在，而在潮湿环境尤甚。铜绿假单胞菌是存在于人类中最常见的一种假单胞菌，它偶尔可在腋下和肛门生殖道周围的正常皮肤，但除非给服抗生素，在粪中甚为罕见。该菌通常伴随毒力较强的细菌存在于病灶中，但偶尔也可单独引起暴露于外部的组织感染。感染通常发生于医院内，洗涤槽、防腐溶液和贮尿容器中常可发现这种细菌。通过医护人员可将病菌传给病人，特别在灼伤和新生儿重症监护室。是重要的医院内病原菌。在体内铜绿假单胞菌生物被膜感染过程中，其c-di-GMP信号通路是新兴且有前景的研究方向，C-di-GMP目前被认为是细菌生活方式转变的主要调控因子,铜绿假单胞菌的表面附着、运动控制(泳动、集群运动和蹭行运动)以及细胞外基质成分的产生有关。每个过程都在一定程度上由c-di-GMP信号通路控制，它的运动性对于它本身对环境的探索和环境表面的接触到生物被膜的形成有着重要作用，铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达菌株虽然本身运动性不强，但是它容易形成生物被膜，在粘附作用和生物被膜形成作用上有着很强的效应。对临床铜绿假单胞菌感染的防治具有较大的指导意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种绿原酸在抑制铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达运动中的应用以及具体的应用方法，以弥补现有技术的不足。为达到上述目的，本专利技术采取的具体技术方案为：绿原酸在抑制铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达运动中的应用。一种体外绿原酸抑制铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达运动的方法，该方法利用绿原酸进行抑制铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达运动的形成。进一步的，上述绿原酸的浓度为1024-4096μg/mL。进一步地，上述绿原酸的浓度为4096μg/mL。本专利技术的优点和技术效果：本专利技术证明了绿原酸能够抑制铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达，从而抑制铜绿假单胞菌的运动。通过本专利技术能够抑制铜绿假单胞菌的运动，并且为寻找有效干预铜绿假单胞菌的药物作用靶点提供依据。附图说明图1为不同浓度的绿原酸对胞内c-di-GMP高表达铜绿假单胞菌泳动的数据对比图。图2为不同浓度的绿原酸对胞内c-di-GMP高表达铜绿假单胞菌集群运动的数据对比图。图3为不同浓度的绿原酸对胞内c-di-GMP高表达铜绿假单胞菌蹭行运动的数据对比图。图4为不同浓度的绿原酸对胞内c-di-GMP高表达铜绿假单胞菌集群运动的直观结果对比图。图5为不同浓度的绿原酸对胞内c-di-GMP高表达铜绿假单胞菌蹭行运动的直观结果对比图。具体实施方式以下通过具体实施例并结合附图对本专利技术进一步解释和说明。实施例1：干预试验一定浓度4096～1024μg/mL下的绿原酸可以抑制胞内c-di-GMP高表达铜绿假单胞菌菌株(这些菌株是构建的，基因表达稳定，临床上也都存在这些菌株，只是基因表达不稳定)的运动，其运动方式主要有三种，分别是泳动(swimming)、群集(swarming)\、蹭动(twiching)。由图1-图3可以看出，在4096μg/mL时，绿原酸对它的运动性有着很好的抑制作用，也就是说4096μg/mL是最优值，在这个浓度上均能对它的运动性有着很好的抑制效果，在它的这个浓度之下，可以看出没有很明显的抑制作用。(W是低表达菌株的简写)。说明了绿原酸均能抑制这三种运动。实施例2：验证该方法的有效性胞内c-di-GMP高表达铜绿假单胞菌主要的运动方式有三种，分别是泳动(swimming)、集群运动(swarmming)、蹭行运动(twitching)，以下是绿原酸干预详细方案。(1)泳动干预用10ɡ/L胰蛋白胨、5ɡ/L氯化钠、0.3％(wt/vol)琼脂制成培养基，以上培养基中，干预组分别含有浓度为4096μg/mL,2048μg/mL，1024μg/mL绿原酸。用无菌牙签挑起菌落，接种于培养基中间层，置于恒温37℃培养箱，培养24小时后，观察以接种中心蔓延的云雾状区域；(2)集群运动干预用10ɡ/L胰蛋白胨、5ɡ/L氯化钠、0.5％(wt/vol)琼脂制成培养基，以上培养基中，干预组分别含有浓度为4096μg/mL,2048μg/mL，1024μg/mL绿原酸。将隔夜培养后的胞内c-di-GMP低表达铜绿假单胞菌菌株用LB肉汤稀释各菌株至OD600＝0.05，分别用移液枪吸取5μl菌液接种于上述培养基表面，置于恒温37℃培养箱，培养24小时后，观察以接种中心生长蔓延的区域。由图4所示，从左往右的干预浓度为4096μg/mL到1024μg/mL，最右是空白组。在4096μg/mL时，绿原酸对它的运动性有着很好的抑制作用，几乎是完全抑制，也就是说4096μg/mL是最优值，在这个浓度上均能对它的运动性有着很好的抑制效果。(3)蹭行运动干预用10ɡ/L胰蛋白胨、5ɡ/L氯化钠、1％(wt/vol)琼脂、5ɡ/L葡萄糖制成培养基，以上培养基中，干预组分别含有浓度为4096μg/mL,2048μg/mL，1024μg/mL绿原酸。用无菌牙签挑起菌落，接种于培养基底部，置于恒温37℃培养箱，培养24小时后，并轻轻揭去培养皿内琼脂，0.9％生理盐水冲洗培养皿底部未黏附的细菌，1％结晶紫染色10min，无菌双蒸水冲洗，然后观察以细菌接种点为中心形成的区域。如图5所示，从左往右的干预浓度为4096μg/mL到1024μg/mL，最右是空白组。在4096μg/mL时，绿原酸对它的运动性有着很好的抑制作用，几乎是完全抑制，也就是说4096μg/mL是最优值，在这个浓度上均能对它的运动性有着很好的抑制效果。绿原酸可以抑制胞内c-di-GMP高表达铜绿假单胞菌菌株的运动，其运动方式主要有三种，分别是泳动(swimming)、群集(swarming)、蹭动(twiching)。.绿原酸均本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.绿原酸在抑制铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达运动中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.绿原酸在抑制铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达运动中的应用。


2.一种体外绿原酸抑制铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达运动的方法，其特征在于，该方法利用绿原酸进行抑制铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔晋亮，谢杰鹏，李冬梅，王可，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：广西;45