纤溶酶可切割的抗不溶性纤维蛋白的抗体与药物的偶联物制造技术

本发明专利技术涉及抗体药物偶联物(ADC)以及包含该偶联物的用于治疗癌症的组合物。本发明专利技术提供在针对不溶性纤维蛋白的特异性抗体与药物的ADC中，连接抗体与药物的接头具有纤溶酶切割序列的ADC以及包含该ADC的用于治疗癌症的药物组合物。

Plasmin cleavable anti insoluble fibrin antibody and drug conjugate

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】纤溶酶可切割的抗不溶性纤维蛋白的抗体与药物的偶联物
本专利技术涉及抗体药物偶联物及包含该偶联物的用于治疗癌症的组合物。
技术介绍
已经明确，如果存在血管发生损伤、血液与受伤血管壁、血管内皮下组织接触、组织因子向血中流入，则使凝血反应开始，血液中的纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，纤维蛋白的网以坚固的止血栓形式将伤口硬化。很早之前已经提示了血液凝固与癌症存在密切的关系(记载于1800年代的法国的外科医生陶瑟(Trousseau)的“在胃癌患者中的基于四肢的血栓的水肿”)。根据最近的临床流行病学数据也明确了以胰腺癌、胃癌、脑瘤为首，在几乎所有的癌症中，由凝固亢奋造成的血栓症的频率与健康人相比显著更高(非专利文献1)。另外，认为在癌症组织的内部中也伴随凝固异常，不溶性纤维蛋白的蓄积、凝固坏死、血管生成与癌症的发展一起反复发生。与前体的纤维蛋白原在活体中广泛可见不同，不溶性纤维蛋白在正常生理条件下的组织中并不存在。对不溶性纤维蛋白而言，通过向血管外漏出而活化的凝血酶对纤维蛋白原进行切割，由此使纤维蛋白单体形成，该纤维蛋白单体发生聚合、交联而使纤维蛋白纤维形成而由此产生。因此，不溶性纤维蛋白在出血、炎症等病理性的状态的组织中特异性存在，在发生了癌症、心肌梗死、脑梗死等伴随凝固的病情时形成。因此，不溶性纤维蛋白为该血栓相关疾病的标记分子，特别是可以说在没有心肌梗死、脑梗死等脑心血管疾病的情况下的癌症组织中存在的不溶性纤维蛋白正是癌症特异性的分子。在这样的技术性背景下，提出了针对不溶性纤维蛋白的特异性的抗体及使用了该抗体的抗体药物偶联物(ADC)(专利文献1)。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2014/133093
技术实现思路
本专利技术人开发了在针对不溶性纤维蛋白的特异性抗体和与药物的ADC中，连接抗体与药物的接头具有纤溶酶切割序列的ADC。本专利技术人发现：得到的ADC被递送至不溶性纤维蛋白，及在被递送的部位被纤溶酶切割，在该处将药物放出。进一步，本专利技术人发现，使用肿瘤模型动物，得到的ADC能够靶向肿瘤周围的不溶性纤维蛋白的蓄积部位，且在该处放出药物，发挥针对肿瘤的抗癌作用。另外，本专利技术人获得了新的不溶性纤维蛋白特异性的抗体。本专利技术是基于以上见解的专利技术。即，根据本专利技术，提供以下专利技术。(1)抗体-药物偶联物(ADC)，其中，抗体为结合纤维蛋白的抗体，其对于不溶性纤维蛋白的亲和性比对于纤维蛋白原的亲和性更高，药物为细胞毒性剂，抗体与药物以能够被纤溶酶切割的方式利用具有纤溶酶切割位点的接头连接。(2)上述(1)所述的ADC，其中，接头具有缬氨酸-亮氨酸-赖氨酸的肽序列作为纤溶酶切割位点。(3)用于治疗癌症的药物组合物，其包含上述(1)或(2)所述的ADC。(4)上述(3)所述的药物组合物，其中，癌为浸润性癌。(5)结合纤维蛋白的抗体，或与该抗体竞争结合纤维蛋白的抗体，或它们的抗原结合片段，所述结合纤维蛋白的抗体具备：具有SEQIDNO：1所示的CDR1、SEQIDNO：2所示的CDR2和SEQIDNO：3所示的CDR3的重链可变区，和具有SEQIDNO：5所示的CDR1、SEQIDNO：6所示的CDR2和SEQIDNO：7所示的CDR3的轻链可变区。(6)结合纤维蛋白的抗体或其抗原结合片段，所述抗体具有SEQIDNO：4所示的重链可变区和SEQIDNO：8所示的轻链可变区。(7)结合纤维蛋白的抗体，或与该抗体竞争结合纤维蛋白的抗体，或它们的抗原结合片段，所述结合纤维蛋白的抗体具备：具有SEQIDNO：9所示的CDR1、SEQIDNO：10所示的CDR2和SEQIDNO：11所示的CDR3的重链可变区，和具有SEQIDNO：13所示的CDR1、SEQIDNO：14所示的CDR2和SEQIDNO：15所示的CDR3的轻链可变区。(8)结合纤维蛋白的抗体或其抗原结合片段，所述抗体具有SEQIDNO：12所示的重链可变区和SEQIDNO：16所示的轻链可变区。(9)上述(1)或(2)所述的ADC，其中，抗体为上述(5)～(8)中任一项所述的抗体。(10)药物组合物，其包含上述(9)所述的ADC。(11)上述(10)所述的药物组合物，其用于治疗癌症。附图说明[图1]图1示出根据本专利技术得到的抗体为不溶性纤维蛋白特异性抗体。[图2]图2示出根据本专利技术得到的不溶性纤维蛋白特异性单克隆抗体蓄积于肿瘤形成部。[图3]图3示出根据本专利技术制备的抗体药物偶联物的特别是药物部位及接头部位。[图4]图4示出使用了根据本专利技术制备的抗体药物偶联物的在体外的抗癌作用的验证结果。[图5]图5示出根据本专利技术制备的抗体药物偶联物的相对于胰腺癌自然产生模型的Kaplan-Meier曲线。[图6A]图6A示出根据本专利技术制备的抗体药物偶联物相对于皮下移植肿瘤小鼠的肿瘤体积的增加的抑制效果。[图6B]图6B示出图6A中观察的小鼠的体重的经时变化。[图7]图7示出不具有含有纤溶酶切割位点的纤溶酶接头和纤溶酶切割位点，取而代之具有含有组织蛋白酶切割位点的组织蛋白酶接头的ADC的细胞增殖抑制作用。[图8]图8示出根据本专利技术制备的抗体药物偶联物的推定的作用机制。专利技术详述在本专利技术中，“对象”指哺乳动物，具体可以为人。在本说明书中，“处理”以包括治疗(治疗性处理)和预防(预防性处理)的含义使用。在本说明书中，“治疗”是指疾病或障碍的治疗、治愈、防止，或缓解的改善，或疾病或障碍的发展速度的降低。在本说明书中，“预防”是指使疾病或者病情的发病的可能性降低，或使疾病或者病情的发病推迟。在本说明书中，“疾病”是指治疗有用的症状。在本说明书中，“癌”是指恶性肿瘤。在本说明书中，“抗体”是指免疫球蛋白，包括多克隆抗体及单克隆抗体。优选的抗体为单克隆抗体。抗体的来源没有特别限定，可列举例如：非人动物的抗体、非人哺乳动物的抗体及人抗体。另外，抗体也可以为嵌合抗体、人化抗体或人抗体。另外，抗体可以为双特异性抗体。在本说明书中，“治疗的有效量”是指用于处理(预防或治疗)疾病、状态而有效的药品的量。治疗的有效量的药品能够使疾病或状态的病情的恶化速度降低，使上述病情的恶化停止，将上述病情改善，将上述病情治愈，或抑制上述病情的发病或发展。在本说明书中，“不溶性纤维蛋白”是指利用第XIII因子进行交联而成的纤维蛋白。在活体中，例如在发生出血时，纤维蛋白原由于凝血酶的作用而被转换为纤维蛋白单体，纤维蛋白原单体进行聚合而使难溶性的纤维蛋白聚合物形成。纤维蛋白聚合物利用第XIII因子而交联，成为不溶性纤维蛋白。在本说明书中，“不溶性纤维蛋白特异性的抗体”是指与不溶性纤维蛋白结合的抗体，具有与对于纤维蛋白原相比，对于不溶性纤维蛋白更高的亲和性的抗体。这样的不溶性的纤维蛋白特本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗体-药物偶联物(ADC)，其中，/n抗体为结合纤维蛋白的抗体，其对于不溶性纤维蛋白的亲和性比对于纤维蛋白原的亲和性更高，/n药物为细胞毒性剂，/n抗体与药物以能够被纤溶酶切割的方式利用具有纤溶酶切割位点的接头连接。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170502 JP 2017-0916391.抗体-药物偶联物(ADC)，其中，
抗体为结合纤维蛋白的抗体，其对于不溶性纤维蛋白的亲和性比对于纤维蛋白原的亲和性更高，
药物为细胞毒性剂，
抗体与药物以能够被纤溶酶切割的方式利用具有纤溶酶切割位点的接头连接。


2.根据权利要求1所述的ADC，其中，接头具有缬氨酸-亮氨酸-赖氨酸的肽序列作为纤溶酶切割位点。


3.用于治疗癌症的药物组合物，其包含权利要求1或2所述的ADC。


4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中，癌为浸润性癌。


5.结合纤维蛋白的抗体，其具有重链可变区和轻链可变区，
所述重链可变区具有SEQIDNO：1所示的CDR1、SEQIDNO：2所示的CDR2和SEQIDNO：3所示的CDR3，和
所述轻链可变区具有SEQIDNO：5所示的CDR1、SEQIDNO：6所示的CDR2和SEQIDNO：7所示的CDR3，
或与该抗体竞争结合纤维蛋白的抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：松村保广，真锅史乃，渊上弥史，
申请(专利权)人：国立研究开发法人国立癌症研究中心，株式会社凛研究所，
类型：发明
国别省市：日本;JP