【技术实现步骤摘要】
通过生物标记物联检体外评估类风湿性关节炎是否存在的方法
本专利技术属于免疫分析
，具体涉及一种通过生物标记物联检体外评估类风湿性关节炎是否存在的试剂盒及制备方法、使用方法。
技术介绍
生物标志物(Biomarker)是指可以标记系统、器官、组织、细胞及亚细胞结构或功能的改变或可能发生的改变的生化指标，具有非常广泛的用途。类风湿关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎为主要特征,临床表现以慢性多发性关节炎为主的最终可导致关节畸形的系统性自身免疫性疾病。利用生物标志物对RA患者的病程和病情、遗传学背景、表观遗传学等特性做出综合判断，可以实现RA的精准化诊治，提高RA患者的生存质量。因此，如何提高RA炎性关节病变患者的RA阳性的检测准确度是一个迫切的技术问题亟待解决。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种用于通过生物标记物联检体外评估类风湿性关节炎是否存在的方法。该方法通过联合检测血清14-3-3η蛋白、anti-CCP抗体和抗Carp抗体中至少2种的水平，并将检测结果与RA相关联，可以显著提高RA炎性关节病变患者的RA阳性的检测准确度。为此，本专利技术第一方面提供了一种检测类风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物的浓度在制备通过生物化学标记物体外评估类风湿性关节炎(RA)是否存在的试剂中的用途，其包括：a)分别在待测样品中检测生物标记物组中各生物标记物的浓度；b)组合a)所测量的各生物标记物的浓度值，获得生物标记物组中各生物标记物的组合浓...
【技术保护点】
1.检测类风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物的浓度在制备通过生物化学标记物体外评估类风湿性关节炎(RA)是否存在的试剂中的用途，其包括：/na)分别在待测样品中检测生物标记物组中各生物标记物的浓度；/nb)组合a)所测量的各生物标记物的浓度值，获得生物标记物组中各生物标记物的组合浓度值；和/nc)将步骤b)中获得的组合浓度值与RA是否存在相关联，其中与从参照群体测量的相应的生物标记物组中的各标记物的截断组合浓度值相比增加的组合值指示RA的存在；/n其中，所述生物标记物组含有Anti-CCP抗体、14-3-3eta蛋白和Anti-carp抗体中的至少2种，优选为2种。/n
【技术特征摘要】
20180523 CN 20181050377591.检测类风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物的浓度在制备通过生物化学标记物体外评估类风湿性关节炎(RA)是否存在的试剂中的用途，其包括：
a)分别在待测样品中检测生物标记物组中各生物标记物的浓度；
b)组合a)所测量的各生物标记物的浓度值，获得生物标记物组中各生物标记物的组合浓度值；和
c)将步骤b)中获得的组合浓度值与RA是否存在相关联，其中与从参照群体测量的相应的生物标记物组中的各标记物的截断组合浓度值相比增加的组合值指示RA的存在；
其中，所述生物标记物组含有Anti-CCP抗体、14-3-3eta蛋白和Anti-carp抗体中的至少2种，优选为2种。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，将步骤b)的组合浓度值与衍生自除RA阳性患者之外的参考群体的截断值进行比较，所述参考群体包含明显健康者和选自骨关节炎(OA)患者和其他自身免疫性疾病患者的患者。
3.检测类风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物的浓度在制备通过生物化学标记物体外评估类风湿性关节炎(RA)的严重程度的试剂中的用途，包括：
a)分别在待测样品中检测生物标记物组中各生物标记物的浓度；
b)组合a)所测量的各生物标记物的浓度值，获得各生物标记物的组合浓度值；和
c)将步骤b)中获得的组合浓度值与RA的严重程度相关联，其中与从参照群体测量的相应的生物标记物组中各标记物的截断组合浓度值相比增加的组合值指示患者中RA的严重程度；
其中，所述生物标记物组含有Anti-CCP抗体、14-3-3eta蛋白和Anti-carp抗体中的至少2种，优选为2种。
4.检测类风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物的浓度在制备通过生物化学标记物体外区分类风湿性关节炎(RA)与其它自身免疫性疾病的制剂中的用途，其包括：
a)分别在待测样品中检测生物标记物组中各生物标记物的浓度；
b)组合a)所测量的各生物标记物的浓度值，获得各生物标记物的组合浓度值；和
c)从来自步骤b)中获得的组合浓度值区分RA与其它自身免疫性疾病，其中与从参照群体测量的对应的生物标记物组中各标记物的截断组合浓度值相比增加的组合值指示RA的存在；
其中，所述生物标记物组含有Anti-CCP抗体、14-3-3eta蛋白和Anti-carp抗体中的至少2种，优选为2种；优选所述其它自身免疫性疾病包括其他关节疾病；进一步优选所述其它关节疾病是骨关节炎(OA)。
5.类风湿性关节炎(RA)生物标记物组用于制备在体外评估待测样品中类风湿性关节炎(RA)是否存在的试剂中的用途，其中对于类风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物测量的组合浓度值与对于来自参考群体测量的相应的生物标记物组中各标记物的截断组合浓度值相比增加指示RA的存在；
其中，所述生物标记物组含有Anti-CCP抗体、14-3-3eta蛋白和Anti-carp抗体中的至少2种，优选为2种。
6.根据权利要求1-5中任意一项所述的用途，其特征在于，所述生物标记物组包含Anti-CCP抗体、14-3-3eta蛋白和Anti-carp抗体中的至少2种和其他生物标记物，优选为2种和其他生物标记物；优选所述其他生物标记物为RA。
7.根据权利要求1-6中任意一项所述的用途，其特征在于，生物标记物组中各生物标记物的浓度采用非均相和/或均相化学发光免疫检测法进行检测。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，生物标记物组中Anti-CCP抗体的浓度采用非均相化学发光免疫检测法进行检测，14-3-3eta蛋白的浓度采用非均相化学发光免疫检测法进行检测。
9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，生物标记物组中Anti-CCP抗体的浓度采用非均相化学发光免疫检测法进行检测，14-3-3eta蛋白的浓度采用均相化学发光免疫检测法进行检测。
10.根据权利要求8或9所述的用途，其特征在于，采用非均相化学发光免疫检测法检测Anti-CCP抗体的浓度的步骤包括采用非均相化学发光免疫检测法测量Anti-CCP抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的含量。
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，基于Anti-CCP抗体标准工作曲线来确定待测样品中Anti-CCP抗体的含量。
12.根据权利要求10或11所述的用途，其特征在于，所述步骤还包括将所测得的Anti-CCP抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的含量，与正常对照样品、类风湿性关节炎对照样品或来自同一受治疗者的治疗前样品中所述Anti-CCP抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的含量进行比较。
13.根据权利要求10-12中任意一项所述的用途，其特征在于，所述步骤包括将所述样品与包含能够与Anti-CCP抗体的抗原表位结合位点特异性结合形成免疫复合物的第一抗原接触，并进一步与抗免疫复合物抗体接触，所述抗免疫复合物抗体能够特异性识别和结合与第一抗原形成的第一免疫复合物中的抗-CCP抗体，不识别游离的、未结合抗原的抗-CCP抗体。
14.根据权利要求13所述的用途，其特征在于，所述第一抗原直接或间接与固相载体结合，所述抗免疫复合物抗体直接或间接与能够与底物反应或能够催化底物生成的可检测信号的标记物结合。
15.根据权利要求14所述的用途，其特征在于，所述第一抗原与特异性结合配对成员中的一员结合，而所述固相载体与特异性结合配对成员中的另一员结合；优选所述第一抗原与生物素结合，而所述固相载体与链霉亲和素结合。
16.根据权利要求14所述的用途，其特征在于，所述抗免疫复合物抗体与特异性结合配对成员中的一员结合，而所述标记物与特异性结合配对成员中的另一员结合；优选所述抗免疫复合物抗体与生物素结合，而所述标记物与链霉亲和素结合。
17.根据权利要求13-16中任意一项所述的用途，其特征在于，所述第一抗原为瓜氨酸化抗原，优选地，所述第一抗原选自合成的含瓜氨酸的环型肽、含瓜氨酸的线型肽、由至少2个单一含瓜氨酸的肽段合成在一条肽链上形成的多肽、含有至少2个单一含瓜氨酸的肽段的瓜氨酸肽段混合物和瓜氨酸化蛋白。
18.根据权利要求8或9所述的用途，其特征在于，采用均相化学发光免疫检测法生物标记物组中14-3-3eta蛋白的浓度的步骤包括测量14-3-3eta蛋白或其片段或所述14-3-3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物的含量。
19.根据权利要求18所述的用途，其特征在于，基于14-3-3eta蛋白标准工作曲线来确定待测样品中14-3-3eta蛋白的含量。
20.根据权利要求18所述的用途，其特征在于，所述步骤还包括将所测得的14-3-3eta蛋白或其片段或所述14-3-3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物的含量，与正常对照样品、类风湿性关节炎对照样品或来自同一受治疗者的治疗前样品中所述14-3-3eta蛋白或其片段或所述14-3-3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物的含量进行比较。
21.根据权利要求18所述的用途，其特征在于，所述步骤包括将所述样品与包含能够与14-3-3eta蛋白或其片段的至少一种特异表位特异性结合形成免疫复合物的抗体。
22.根据权利要求18-21中任意一项所述的用途，其特征在于，所述抗体包括能够与14-3-3eta蛋白的第一表位特异性结合的第一抗体以及能够与14-3-3eta蛋白的第二表位特异性结合的第二抗体，其中所述第二表位和所述第一表位不相重叠。
23.根据权利要求22所述的用途，其特征在于，所述第一抗体与受体结合，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号。
24.根据权利要求23所述的用途，其特征在于，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。
25.根据权利要求22所述的用途，其特征在于，所述第一抗体和第二抗体分别独立地选自单克隆抗体和/或多克隆抗体，优选单克隆抗体。
26.根据权利要求18所述的用途，其特征在于，所述14-3-3eta蛋白或其片段的氨基酸序列如SEQUENCENO.1所示。
27.根据权利要求26所述的用途，其特征在于，所述表位选自氨基酸片段为14-3-3eta蛋白的序列的相对特异性片段：1-6aa、27-38aa、71-83aa、112-119aa和141-154aa。
28.一种用于基于风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物的浓度通过生物化学标记物体外评估类风湿性关节炎(RA)是否存在的试剂套装，其包括用于检测类风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物浓度的试剂，其中，所述生物标记物组含有Anti-CCP抗体、14-3-3eta蛋白和Anti-carp抗体中的至少2种，优选为2种。
29.一种用于基于风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物的浓度通过生物化学标记物体外评估类风湿性关节炎(RA)的严重程度的试剂套装，其包括用于检测类风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物浓度的试剂，其中，所述生物标记物组含有Anti-CCP抗体、14-3-3eta蛋白和Anti-carp抗体中的至少2种，优选为2种。
30.一种用于基于风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物的浓度通过生物化学标记物体外区分类风湿性关节炎(RA)与其它自身免疫性疾病的试剂套装，其包括用于检测类风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物浓度的试剂，其中，所述生物标记物组含有Anti-CCP抗体、14-3-3eta蛋白和Anti-carp抗体中的至少2种，优选为2种；优选所述其它自身免疫性疾病包括其他关节疾病；进一步优选所述其它关节疾病是骨关节炎(OA)。
31.基于类风湿性关节炎(RA)生物标记物组体外评估待测样品中类风湿性关节炎(RA)是否存在的试剂套装，其中利用非均相化学发光免疫检测法对于类风湿性关节炎(RA)生物标记物组中各生物标记物测量的组合浓度值与对于来自参考群体测量的相应的生物标记物组中各标记物的截断组合浓度值相比增加指示RA的存在；
其中，所述生物标记物组含有Anti-CCP抗体、14-3-3eta蛋白和Anti-carp抗体中的至少2种，优选为2种。
32.根据权利要求28-31所述的试剂套装，其特征在于，所述生物标记物组包含Anti-CCP抗体、14-3-3eta蛋白和Anti-carp抗体中的至少2种和其他生物标记物，优选为2种和其他生物标记物；优选所述其他生物标记物为RA。
33.根据权利要求28-32中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述试剂套装包括采用非均相化学发光免疫检测法检测生物标记物组中Anti-CCP抗体和14-3-3eta蛋白浓度的试剂。
34.根据权利要求33所述的试剂套装，其特征在于，用于检测Anti-CCP抗体的非均相化学发光免疫检测试剂包括：
组分a1，其包含固相载体以及与之直接结合或间接结合的第一抗原，所述第一原能够与抗-CCP抗体的抗原表位结合位点特异性结合；
组分b1，其包含能够与底物反应或能够催化底物生成可检测信号的标记物以及与之直接结合或间接结合的抗免疫复合物抗体，所述抗免疫复合物抗体能够特异性识别和结合与第一抗原形成的第一免疫复合物中的抗-CCP抗体，不识别游离的、未结合抗原的抗-CCP抗体。
35.根据权利要求34所述的试剂套装，其特征在于，所述试剂还包括作为校准品的Anti-CCP抗体纯品，所述校准品被校准品稀释液按照比例梯度稀释成不同浓度的工作校准品溶液。
36.根据权利要求34或35中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述第一抗原与特异性结合配对成员中的一员结合，而所述固相载体与特异性结合配对成员中的另一员结合；优选所述第一抗原与生物素结合，而所述固相载体与链霉亲和素结合。
37.根据权利要求34-36中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述抗免疫复合物抗体与特异性结合配对成员中的一员结合，而所述标记物与特异性结合配对成员中的另一员结合；优选所述抗免疫复合物抗体与生物素结合，而所述标记物与链霉亲和素结合。
38.根据权利要求34-37所述的试剂套装，其特征在于，所述试剂还包括组分c1，底物溶液，所述底物溶液包括A1溶液和B1溶液，优选所述A1溶液为过氧化氢溶液，优选所述B1溶液为...
【专利技术属性】
技术研发人员：饶星，廖智星，刘宇卉，李临，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：科美诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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