肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒和检测方法技术

本发明专利技术公开一种肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒和检测方法，该方法包括：提取待测样品；利用本发明专利技术提供的肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒对所述待测样品进行检测，获得F2RL3基因的DNA甲基化程度、SHOX2基因的DNA甲基化程度、RASSF1A基因的DNA甲基化程度、ANKRD18B基因的DNA甲基化程度和MPDZ基因的DNA甲基化程度；根据待检的五个基因的DNA甲基化程度，确定待检对象是否为肺癌高危或肺癌患者。实施本发明专利技术，能够联合检测多个肺癌相关DNA甲基化程度，可以明显地提高肺癌早期的检出率，适于大规模推广应用。

【技术实现步骤摘要】
肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒和检测方法
本专利技术涉及疾病早期检测
，尤其涉及一种肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒和检测方法。
技术介绍
DNA甲基化是DNA序列上特定序列(连续的胞嘧啶和鸟嘌呤)上的胞嘧啶有可能被甲基化。甲基化程度的变化会通过改变染色质结构及稳定性、改变转录因子结合活性等方式改变基因的表达情况。一般来说，低甲基化有利于基因的表达，高甲基化会抑制基因的表达。目前有研究证实DNA甲基化的状态与某些肿瘤的发生具有高度的相关性。可通过DNA甲基化来评价肿瘤是否发生，以及治疗措施对肿瘤的疗效。肺癌已经成为人类癌症死亡的主要原因之一。在中国肺癌是发病率最高的癌症，且发病率和死亡率迅速增长。肺癌的发生率和死亡率是所有肿瘤中最高的，但是肺癌却不是诊断的最多的肿瘤，在美国，乳腺肿瘤和前列腺肿瘤有更高的诊断率，原因是可以早期诊断从而可以早期治疗，大大提高了5年生存率(分别为89和99％)，而肺癌的5年生存率才15％。在临床实践中，肺癌早期诊断一直是难点，癌症的早期发现对癌症患者的有效治疗是非常重要的。目前对癌症的诊断主要依据临床症状、影像学检测和组织病理学检查等，但有许多癌症临床症状出现较晚，并且活体取样检测也困难，严重影响了癌症的早期诊断和病人的预后。如果能够利用DNA甲基化对肺癌的发生风险进行评估，无疑是一种简便可行的方法。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒和检测方法，旨在解决现有技术不能利用DNA甲基化对肺癌的发生风险进行评估的技术问题。为实现上述目的，本专利技术提供了一种肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒，所述肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒包括F2RL3基因的DNA甲基化检测试剂、SHOX2基因的DNA甲基化检测试剂、RASSF1A基因的DNA甲基化检测试剂、ANKRD18B基因的DNA甲基化检测试剂和MPDZ基因的DNA甲基化检测试剂，所述肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒还包括PCR反应液、聚合酶、阳性质控品、阴性对照以及DNA修饰液。进一步地，所述PCR反应液包括0.2uM的F2RL3基因的扩增引物对、0.06uM的F2RL3基因的检测探针，0.2uM的RASSF1A基因的扩增引物对、0.06uM的RASSF1A基因的检测探针，0.2uM的SHOX2基因的扩增引物对、0.06uM的SHOX2基因的检测探针，0.2uM的ANKRD18B基因的扩增引物对、0.06uM的ANKRD18B基因的检测探针，0.2uM的MPDZ基因的扩增引物对、0.06uM的MPDZ基因的检测探针，以及0.67uM的β-actin基因的扩增引物对和0.02uM的β-actin基因的检测探针；3.5mM的MgCl2；0.25mM的dNTP。进一步地，所述聚合酶为200U的Taqman聚合酶。进一步地，所述阳性质控品为500个细胞/μL，为非小细胞肺癌HCC827细胞系计数后提取的DNA。进一步地，所述阴性对照为灭菌水。进一步地，所述DNA修饰液为3M亚硫酸氢钠，pH＝5.0。本专利技术还提供一种肺癌早期DNA甲基化标志物检测方法，该方法包括如下步骤：提取待测样品；利用上述的肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒对所述待测样品进行检测，获得F2RL3基因的DNA甲基化程度、SHOX2基因的DNA甲基化程度、RASSF1A基因的DNA甲基化程度、ANKRD18B基因的DNA甲基化程度和MPDZ基因的DNA甲基化程度；根据待检的五个基因的DNA甲基化程度，确定待检对象是否为肺癌高危或肺癌患者。进一步地，所述待测样品来源于含有细胞的样本提取的核酸或含有来源于细胞的核酸的样本。进一步地，所述待测样品是指待检测的核酸样本，其中含有一种核酸或多种核酸，需要检测其中是否存在目标核酸。进一步地，所述探针是指一种具有已知核苷酸序列的单链核酸，该单链核酸具有与目标核酸互补的核苷酸序列结构，该单链核酸与目标核酸形成双链。相较于现有技术，本专利技术所述肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒和检测方法采用上述技术方案，达到了如下技术效果：本专利技术公开的肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒包括五个肺癌相关基因甲基化检测试剂，能够联合检测多个肺癌相关DNA甲基化程度，可以明显地提高肺癌早期的检出率，适于大规模推广应用。附图说明图1是本专利技术肺癌早期DNA甲基化标志物检测方法的流程示意图。本专利技术目的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。具体实施方式为更进一步阐述本专利技术为达成上述目的所采取的技术手段及功效，以下结合附图及较佳实施例，对本专利技术的具体实施方式、结构、特征及其功效进行详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术提供的肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒包括F2RL3基因的DNA甲基化检测试剂、SHOX2基因的DNA甲基化检测试剂、RASSF1A基因的DNA甲基化检测试剂、ANKRD18B基因的DNA甲基化检测试剂和MPDZ基因的DNA甲基化检测试剂。所述肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒还包括PCR反应液、聚合酶、阳性质控品、阴性对照以及DNA修饰液。所述PCR反应液包括0.2uM的F2RL3基因的扩增引物对、0.06uM的F2RL3基因的检测探针，0.2uM的RASSF1A基因的扩增引物对、0.06uM的RASSF1A基因的检测探针，0.2uM的SHOX2基因的扩增引物对、0.06uM的SHOX2基因的检测探针，0.2uM的ANKRD18B基因的扩增引物对、0.06uM的ANKRD18B基因的检测探针，0.2uM的MPDZ基因的扩增引物对、0.06uM的MPDZ基因的检测探针，以及0.67uM的β-actin基因的扩增引物对和0.02uM的β-actin基因的检测探针；3.5mM的MgCl2；0.25mM的dNTP；所述聚合酶为200U的Taqman聚合酶；阳性质控品为500个细胞/μL，为非小细胞肺癌HCC827细胞系计数后提取的DNA；所述阴性对照为灭菌水；所述DNA修饰液为3M亚硫酸氢钠，pH＝5.0。所述F2RL3基因的DNA甲基化检测试剂是针对人F2RL3基因的引物和探针；所述的SHOX2基因的DNA甲基化的检测试剂是针对人SHOX2基因的引物和探针；或所述的RASSF1A基因的DNA甲基化的检测试剂是针对人RASSF1A基因的引物和探针；或所述的ANKRD18B基因的DNA甲基化的检测试剂是针对人ANKRD18B基因的引物和探针；或所述的MPDZ基因的DNA甲基化的检测试剂是针对人MPDZ基因的引物和探针。SHOX2(shortstaturehomeobox2)基因是矮小同源盒基因家族的一员，其核苷酸序列可以与GenBank登录号：NC_000003的序列基本相同。其基因表达调控与器官发育密切相关。研究本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒，其特征在于，所述肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒包括F2RL3基因的DNA甲基化检测试剂、SHOX2基因的DNA甲基化检测试剂、RASSF1A基因的DNA甲基化检测试剂、ANKRD18B基因的DNA甲基化检测试剂和MPDZ基因的DNA甲基化检测试剂，所述肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒还包括PCR反应液、聚合酶、阳性质控品、阴性对照以及DNA修饰液。/n

【技术特征摘要】
1.一种肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒，其特征在于，所述肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒包括F2RL3基因的DNA甲基化检测试剂、SHOX2基因的DNA甲基化检测试剂、RASSF1A基因的DNA甲基化检测试剂、ANKRD18B基因的DNA甲基化检测试剂和MPDZ基因的DNA甲基化检测试剂，所述肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒还包括PCR反应液、聚合酶、阳性质控品、阴性对照以及DNA修饰液。


2.如权利要求1所述的肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒，其特征在于，所述PCR反应液包括0.2uM的F2RL3基因的扩增引物对、0.06uM的F2RL3基因的检测探针，0.2uM的RASSF1A基因的扩增引物对、0.06uM的RASSF1A基因的检测探针，0.2uM的SHOX2基因的扩增引物对、0.06uM的SHOX2基因的检测探针，0.2uM的ANKRD18B基因的扩增引物对、0.06uM的ANKRD18B基因的检测探针，0.2uM的MPDZ基因的扩增引物对、0.06uM的MPDZ基因的检测探针，以及0.67uM的β-actin基因的扩增引物对和0.02uM的β-actin基因的检测探针；3.5mM的MgCl2；0.25mM的dNTP。


3.如权利要求1所述的肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒，其特征在于，所述聚合酶为200U的Taqman聚合酶。


4.如权利要求1所述的肺癌早期DNA甲基化标志物检测试纸盒，其特征在于，所述阳性质控品为500个细胞/μL，为非小细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈琦，梁昊原，谷东风，
申请(专利权)人：深圳市圣必智科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44