评价中性粒细胞的活性的方法技术

本发明专利技术提供一种利用新的指标来评价中性粒细胞的活性的方法。本发明专利技术的方法是评价中性粒细胞的活性的方法，包括基于根据添加有中性粒细胞刺激剂的生物体试样的髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的测定结果导出的指标，评价中性粒细胞的活性的工序，该指标是从添加中性粒细胞刺激剂的时刻起到髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的峰向上升起的时刻为止的时间。

Methods of evaluating the activity of neutrophils

【技术实现步骤摘要】
评价中性粒细胞的活性的方法
本专利技术涉及评价中性粒细胞的活性的方法。
技术介绍
中性粒细胞对于炎性细胞因子和细菌等表现出趋化性，因而在炎症部位聚集，具有吞噬杀灭细菌等的功能，在生物体防御中发挥着重要的作用。作为中性粒细胞吞噬杀灭细菌等的作用机理，已知活性氧(超氧化物、过氧化氢等)的产生、以及因髓过氧化物酶(MPO)引起的次氯酸的产生等。另一方面，因中性粒细胞的过度的活化而造成的活性氧的产生被指出成为氧化应激的原因，引起细胞或组织的障碍而与多种病症相关(例如参照非专利文献1)。另外，近年来已知从中性粒细胞放出的MPO也参与作为氧化应激的另一原因的脂质的过氧化(例如非专利文献1)。作为评价中性粒细胞的功能等的方法，例如在专利文献1中公开了如下方法：包括使用含有全血的同一试样测定髓过氧化物酶活性和超氧化物产生活性的工序，上述髓过氧化物酶活性的测定、以及上述超氧化物产生活性的测定的至少一种是基于荧光的检测而进行，上述荧光的检测是通过对包含上述试样的试样容器照射从激发光源输出的激发光，利用荧光检测器检测所释放的荧光，并且，上述激发光源和上述荧光检测器是相对于上述试样容器的上述激发光的照射面，配置于同一侧，基于测得的髓过氧化物酶活性和超氧化物产生活性来评价中性粒细胞的活性。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2015-84757号公报非专利文献非专利文献1：生物试样分析,Vol.35,No2,2012年,pp.133～139.
技术实现思路
>专利技术要解决的技术问题中性粒细胞一旦接触细菌和真菌类，就会以由中性粒细胞质膜包裹的方式，吸收至中性粒内形成吞噬体。接着，吞噬体与颗粒融合，颗粒内容物被释放到吞噬体内。通过在细胞膜(吞噬体的膜)上形成的NADPH氧化酶系，产生活性氧(超氧化物、过氧化氢)，杀灭细菌和真菌类。另外，由于颗粒内容物所含的髓过氧化物酶(EC编号1.11.2.2)的酶反应，由过氧化氢(H2O2)和氯离子(Cl-)生成次氯酸(HOCl)(或其卤素等价物)，杀灭细菌和真菌类。在专利文献1所记载的方法中，例如在添加中性粒细胞刺激剂后，对活性氧和次氯酸(或其卤素等价物)进行定量，算出测得的峰面积，由此导出髓过氧化物酶活性和超氧化物产生活性。然后，基于测得的髓过氧化物酶活性和超氧化物产生活性来评价中性粒细胞的活性。另一方面，本专利技术的专利技术人发现，在罹患动脉硬化等疾病、以及过度疲劳等处于被认为中性粒细胞过度活化而面临氧化应激状态的状况的被检验者中，基于专利文献1所记载的方法，在添加中性粒细胞刺激剂后通过活性氧和次氯酸(或其卤素等价物)的定量测得髓过氧化物酶活性和超氧化物产生活性时，直至峰向上升起的时间延长。本专利技术基于该新的见解，其目的在于提供一种利用新的指标来评价中性粒细胞的活性的方法。用于解决技术问题的手段本专利技术提供一种方法，所述方法是评价中性粒细胞的活性的方法，包括基于根据添加有中性粒细胞刺激剂的生物体试样的髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的测定结果导出的指标，评价中性粒细胞的活性的工序，上述指标是从添加上述中性粒细胞刺激剂的时刻起到髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的峰向上升起的时刻为止的时间。本专利技术的评价方法中，将从添加中性粒细胞刺激剂的时刻起、到髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的峰向上升起的时刻为止的时间(以下也称为“指标时间”)作为指标，因而能够评价中性粒细胞的活性。在罹患动脉硬化等疾病、以及过度疲劳等处于被认为中性粒细胞过度活化而面临氧化应激状态的状况的被检验者中，指标时间延长。可以认为这是由于中性粒细胞过度活化，结果对于如下刺激的感受性下降的缘故。因此，本专利技术的评价方法还可以理解为例如评价中性粒细胞的感受性的方法。进行评价的工序可以包括将指标时间与基准值比较，在指标时间大于基准值时，评价为中性粒细胞的感受性下降的步骤。上述生物体试样优选是含有全血的试样。这是因为在含有全血的试样中不需要将中性粒细胞分离，因而操作简便，还能够避免因分离操作而对中性粒细胞造成应激，并且，能够获得包括与血液中所含的各种各样的体液因子等的相互作用在内的更接近生物体内的动态的信息。另外，进行评价的工序除了包括基于指标时间评价中性粒细胞的活性的步骤之外，还可以包括基于髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的峰面积来评价中性粒细胞的活性的步骤。在指标时间延长的被检验者中，有时还同时观察到峰面积减少。因此，通过一并实施基于峰面积的评价，能够多方面地评价中性粒细胞的活性。另外，基于峰面积，还能够一并评价“食”等外源性因素或生物体所具备的抗氧化酶等的炎症防御能力(抗氧化能力或防止氧化应激的能力)。根据本专利技术的评价方法，能够区分例如罹患动脉硬化等疾病、以及过度疲劳等处于被认为中性粒细胞过度活化而面临氧化应激状态的状况的被检验者。因此，本专利技术还提供一种方法，该方法是收集用于判断对象是否罹患因中性粒细胞的过度的活化而造成的伴随氧化应激的疾病、或者是否处于因中性粒细胞的过度的活化而造成的伴随氧化应激的状态的数据的方法，该数据收集方法包括根据添加有中性粒细胞刺激剂的生物体试样的髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的测定结果来导出上述数据的工序，上述数据是从添加上述中性粒细胞刺激剂的时刻起到髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的峰向上升起的时刻为止的时间，上述生物体试样是从上述对象获取的生物体试样。根据本专利技术的专利技术人发现的另外的见解，在例如罹患动脉硬化等疾病、以及过度疲劳等处于被认为中性粒细胞过度活化而面临氧化应激状态的状况的被检验者中，在该状况改善后，与处于该状况时相比，指标时间缩短。因此，本专利技术还提供一种方法，所述方法是收集用于判断对象的因中性粒细胞的过度的活化而造成的伴随氧化应激的疾病或状态的治疗效果的数据的方法，包括根据添加有中性粒细胞刺激剂的生物体试样的髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的测定结果来导出上述数据的工序，上述数据是从添加上述中性粒细胞刺激剂的时刻起到髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的峰向上升起的时刻为止的时间，上述生物体试样是从治疗后的上述对象获取的生物体试样。专利技术效果根据本专利技术，能够提供一种利用新的指标来评价中性粒细胞的活性的方法。本专利技术的评价方法将上述的指标时间作为指标进行评价，因而还能够评价中性粒细胞的感受性。根据本专利技术，还能够例如判断对象是否罹患因中性粒细胞的过度的活化而造成的伴随氧化应激的疾病、或者是否处于因中性粒细胞的过度的活化而造成的伴随氧化应激的状态、以及判断对象的因中性粒细胞的过度的活化而造成的伴随氧化应激的疾病或状态的治疗效果。附图说明图1是表示在试验例1中，使用包含从罹患下肢动脉硬化闭塞症、且实施末梢血管介入治疗的患者采集的全血的生物体试样，测定髓过氧化物酶活性和超氧化物产生活性的结果的曲线图。图2是表示在试验例1中，解析治疗前的超氧化物产生活性的峰面积、髓过氧化物酶活性的峰面积和超氧化物产生活性的指标时间彼此之间的相关关系的结果的曲线图。...

【技术保护点】
1.一种方法，其特征在于：/n所述方法是评价中性粒细胞的活性的方法，/n包括基于根据添加有中性粒细胞刺激剂的生物体试样的髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的测定结果导出的指标，评价中性粒细胞的活性的工序，/n所述指标是从添加所述中性粒细胞刺激剂的时刻起到髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的峰向上升起的时刻为止的时间。/n

【技术特征摘要】
20180611 JP 2018-1111441.一种方法，其特征在于：
所述方法是评价中性粒细胞的活性的方法，
包括基于根据添加有中性粒细胞刺激剂的生物体试样的髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的测定结果导出的指标，评价中性粒细胞的活性的工序，
所述指标是从添加所述中性粒细胞刺激剂的时刻起到髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的峰向上升起的时刻为止的时间。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：
进行所述评价的工序包括将所述时间与基准值比较，在所述时间大于所述基准值时，评价为中性粒细胞的感受性下降的步骤。


3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述生物体试样是含有全血的试样。


4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于：
进行所述评价的工序还包括基于髓过氧化物酶活性或超氧化物产生活性的峰面积评价中性粒细胞的活性的步骤。


5.一种方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：数村公子，竹内康造，
申请(专利权)人：浜松光子学株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP