本发明专利技术公开了一种基因Glu525的制备方法及其用途。是将Pseudoalteromonas carrageenovora ASY5接种至人工海水培养基中，培养后提取菌株基因组DNA；再以该菌株基因组DNA为模板，SEQ ID NO:3和4为上下游引物，进行扩增得到所述基因Glu525。基因Glu525和/或含有基因Glu525的载体用于制备低聚异麦芽糖的用途。
Preparation and application of gene glu525
The invention discloses a preparation method and application of gene glu525. Pseudoalteromonas carrageenovora asy5 was inoculated into the artificial seawater culture medium, and the genomic DNA of the strain was extracted after culture; then the genomic DNA of the strain was used as the template, SEQ ID No: 3 and 4 as the upstream and downstream primers, and the gene glu525 was amplified. Gene glu525 and / or vector containing gene glu525 for the preparation of Isomaltooligosaccharide.
【技术实现步骤摘要】
基因Glu525的制备方法和用途
本专利技术涉及基因领域，尤其涉及基因Glu525的制备方法和用途。
技术介绍
α-葡糖苷酶在自然界广泛分布，又称葡糖糖基转移酶和葡萄糖转苷酶，它可以从低聚糖类底物的非还原末端切开α-1，4糖苷键，释放出葡萄糖，大多数还可将游离出的葡萄糖残基转移到另一糖类底物形成α-1，6糖苷键，从而得到非发酵性的低聚异麦芽糖或糖酯、糖肽等。α-葡萄糖苷酶广泛分布，几乎存在于所有生物体内，在人类的糖原降解和动物，植物以及微生物的糖代谢中具有重要的生理功能。目前，α-葡萄糖苷酶已广泛应用于基础和开发研究领域，主要包括生产淀粉水解、酒精发酵、代谢机理研究、食品成分分析和医学诊断等方面。α-葡萄糖苷酶同时具有水解和转苷两种活性，不同的α-葡萄糖苷酶所表现出的这两种活性具有较大的差异.在低聚异麦芽糖生产中，针对不同生产目的，如对低聚异麦芽糖产品不同成分、不同浓度、不同纯度等的要求，需要选择具有不同转苷活性或水解活性的酶。目前关于α-葡萄糖苷酶的研究主要集中在酶基因的克隆及高效表达方面，而针对酶的性质研究及转苷应用分析报道较少，且产α–葡萄糖苷酶较高的微生物主要是黑曲霉。有鉴于此，本专利技术人研究并克隆得到了一条来源于食鹿角菜假交替单胞菌的基因Glu525，并将其在大肠杆菌中表达，制得一种可用于高效制备低聚异麦芽糖的基因Glu525。本案由此而生。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高效制备低聚异麦芽糖的基因Glu525及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术提供一种基因Glu525的制备方法，其特征在于，从海水中制备得到。进一步，将PseudoalteromonascarrageenovoraASY5接种至人工海水培养基中，培养后提取菌株基因组DNA；再以该菌株基因组DNA为模板，SEQIDNO:3和4为上下游引物，进行扩增得到所述基因Glu525。进一步，所述扩增的程序为：95℃，5min；94℃，15s；55℃，15s，72℃，1min，30次循环，最后72℃，10min。进一步，所述人工海水培养基的配置方法为，将牛肉浸膏和胰蛋白胨在蒸馏水中溶解后用NaOH调pH至7.8，加热煮沸10min，冷却后再次加NaOH调pH至7.3，然后和人工海水混合，灭菌即可；其中牛肉浸膏、胰蛋白胨、蒸馏水、人工海水的用量比例为：10g：10g：250mL：750mL；所述人工海水为NaCl、KCl、CaCl2、MgCl2·6H2O、NaHCO3、MgSO4·7H2O和蒸馏水组成，其中NaCl、KCl、CaCl2、MgCl2·6H2O、NaHCO3、MgSO4·7H2O和蒸馏水的用量比例为：37.51g：1.03g：1.61g：6.4g：0.15g：4.67g：1000mL。本专利技术还保护基因Glu525和/或含有基因Glu525的载体用于制备低聚异麦芽糖的用途。进一步，在制备低聚异麦芽糖时，添加含有基因Glu525和/或含有基因Glu525的载体，通过控制反应时间，得到不同的低聚异麦芽糖。进一步，所述反应时间为2-4h时，得到的主要是潘糖；当反应时间为5-8h时，得到的主要是异麦芽糖；当反应时间为16-22h时，得到的主要是异麦芽三糖。本专利技术通过设计特异性引物，获得基因Glu525的DNA序列(如SEQIDNO:1所示)，该基因编码区长2412bp，编码803个氨基酸，其中1-21个氨基酸为信号肽，理论分子量为87.88kDa。大肠杆菌重组表达获得的基因Glu525具有较高酶活性，该酶可以在转苷反应中先水解一部分麦芽糖生成葡萄糖；再将葡萄糖以α-1,6糖苷键转移到麦芽糖分子上，生成潘糖；随着反应时间延长,该酶再水解麦芽糖分子和潘糖分子上的α-1,4糖苷键生成葡萄糖和异麦芽糖；当葡萄糖以α-1,6糖苷键转移到其它异麦芽糖分子上时,形成异麦芽三糖等，可以同时满足几种低聚异麦芽糖的生成需要，并且有着比较高的生成率。其DNA序列如SEQIDNO：1所示：ATGAAAAAATATAACCTTATAACTGCCTCACTCTTAACATTAGGCTTAACTGCCTGTGGTGCACAAAACACAAGCACAGATAATAAAAATACCGCTGCACAGGTTAAATCAGCACCTGGCGCACCTGGTGTAGAGCCATTTTGGGCTTATGCAGGTAAAACAGGGATTGGCACGTCTTACGAGCAATACCAAAAAGGCCAATACAGTGATTCAGCTGCAACGGGCGATGTATCTAAGGTGTGGTTTTCAATTGCTAAAGGCATGATCACCGAAACCATGTTTGGGCTTATCCACCAAGCGCAGATTAAAGACATGCAGTTTGTTGTTACAGGTAAAGACTTTACCGTAACCGAAGCTGATGAATTAGATGTCACCATAGATTACTTATACAAAGATGCGCAAGGGCGCCCACTTTCGCTTGCCTACAAAGTAACAAGCACTGATAAACAAGGGCGCTTTAGCCTAGAAAAACACATATTTACCGACCCAGATGGGCAAACATTATTTGTTCGCAGTGTGTTTAACACTGAACTTGAAGGGTTAAAAGCTTATGTTGTTGTAAACCCTTACATAAATAATAACGGATTAGGTGACTTTGCTAAAACGACAGAGCAAGGGCTTGTGGCATGGGAAGACGATAACTATTTATCACTTCAATCAGCAACCCCTTTTAAAGCTAAAACAGTAGGTTTTACAGGTGAAAGCGATGGTATTAATGCACTTAAAACAACTCAAGCGCTAAACACTCATTATACAAATACTGGCGAAGCTGCAGGTAACGTAAGCATGTTGGCTGAGCTTGGCGAAATAAGCGCTAACACCACCTTCGATGTAGCACTTAGTTTTGGTAAAACACAGCAGCAAAGTATACAACAAGGCGAGCAAAGCTTAGCAAAAGGCTATCAAGCAGTGCTTGATCACTATAACGGTAAAGGTGAAGCGCTCGGCTGGCAAGATTACCTTCAAAGCCTTAAACCACTTAATACCATGGTTGAGCAAACCGCCGATAACGGAAAGCTTTTATACACCAGTGCCATGGTTTTAAAGGCACAAGAAGATAAAACCAATGCCGGTGCGCTTATTGCGTCATTGTCAAACCCTTGGGGCGAAACCGTATCTGCTAAAGAAGGCTCAACCGGTTATAAAGCGGTATGGGTGCGCGATTTTTACCAAGTAGCCATGGCATTTATGGCGCTCGGCGATACCGCCACCGCAAAAACAGCATTCGAATACCTTGAAAAAGTACAAGTAAACAGCAAAACACCGGGTAATAAAGG本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.基因Glu525的制备方法，其特征在于，从海水中制备得到。/n
【技术特征摘要】
1.基因Glu525的制备方法，其特征在于，从海水中制备得到。
2.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，将PseudoalteromonascarrageenovoraASY5接种至人工海水培养基中，培养后提取菌株基因组DNA；再以该菌株基因组DNA为模板，SEQIDNO:3和4为上下游引物，进行扩增得到所述基因Glu525。
3.如权利要2所述制备方法，其特征在于，所述扩增的程序为：95℃，5min；94℃，15s；55℃，15s，72℃，1min，30次循环，最后72℃，10min。
4.如权利要2所述制备方法，其特征在于，所述人工海水培养基的配置方法为，将牛肉浸膏和胰蛋白胨在蒸馏水中溶解后用NaOH调pH至7.8，加热煮沸10min，冷却后再次加NaOH调pH至7.3，然后和人工海水混合，灭菌即可；其中牛肉浸膏、胰蛋白胨、蒸馏水、人工海水的用量比例为：10g：1...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖安风，焦超，汪驰，张永辉，杨秋明，肖琼，翁慧芬，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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