一种猫乳叶片组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种猫乳叶片组培方法，以猫乳的叶片进行组织培养，而不是传统的采用植物的茎作为外殖体，能够提高猫乳叶片组织培养繁殖技术。本试验主要研究不同种类不同浓度的生长素结合对猫乳叶片出愈率的影响，研究得出最适合猫乳叶片的组培条件，猫乳的组培繁殖研究对于猫乳的推广与应用具有重要的意义。

A method of tissue culture of cat milk leaves

The invention discloses a tissue culture method of cat milk leaves, which uses the leaves of cat milk for tissue culture, instead of using the stems of plants as Exophytes, and can improve the tissue culture and propagation technology of cat milk leaves. This experiment mainly studies the effect of different kinds and concentrations of auxin combination on the healing rate of cat milk leaves, and studies the most suitable tissue culture conditions for cat milk leaves. The research on tissue culture and reproduction of cat milk is of great significance for the promotion and application of cat milk.

【技术实现步骤摘要】
一种猫乳叶片组织培养方法
本专利技术公开了一种农业植物繁殖方法，具体涉及植物猫乳的叶片组织培养方法。
技术介绍
猫乳(RhamnellafrangulodesMaxim.Weberb)属于鼠李科猫乳属，猫乳又称长叶绿柴、鼠矢枣、七里头，落叶灌木或小乔木。猫乳的生长环境比较阴凉，耐阴耐旱，喜欢在松散，排水良好的土壤，温暖潮湿的环境中，绝大部分生长在海拔1100m以下的山坡及道路两旁。猫乳是具有观赏性植物，它的果实是核果，形状似圆柱形，叶柄很短；5-18朵腋生聚伞花序，5月至7月开花；花瓣长圆形，短茎，先端全缘；花盘薄，肉质，附着在萼管内；果实颜色鲜艳外形可爱，果实的颜色由黄色变为红色或者橘红色，通过阳光照晒后变为黑色或紫黑色。猫乳果实生长周期较长在生长期的大多数时间里整棵树红色与黄色相间，通过绿色枝叶的映衬下非常美丽，到深秋季节的时候叶色变为金黄色，是秋季观叶的优良树种。猫乳树形独特，多枝多叶，适应环境能力强，比较耐阴，是园林绿化和庭院常见的见习树种，为植物群落创造良好的条件。猫乳作为药用茶叶，开发前景广阔，在植物扦插上该植物有研究且扦插成活率低。裴小娜在《西藏猫乳化学成分及抗风湿性关节炎活性研究》中提到猫乳植物还具有一定的药用价值。猫乳的主要用途是当作药材，对疥疮、疲劳等症状的治疗有一定的疗效，同样还具有补脾益肾的作用。猫乳的植物外皮还可以作为绿色染料。在江苏省丘陵山区地带的百姓采集猫乳的植物幼嫩枝叶制作野茶，经过冲泡的野茶色泽碧绿，经过长时间的泡制颜色不发生改变，隔夜的茶水仍然入口清香，受到很多饮用者的喜欢。猫乳属的植物有9个品种，产东亚，我国主要分布于西南部至中部，国内外的研究只对猫乳和西藏猫乳2个品种进行了研究。目前对西藏猫乳的研究主要是在化学成分和和药用价值方面，甄月惠等研究人员在《猫乳在北方园林中的应用前景》一文中提到对猫乳进行探索，研究的内容只是对猫乳植物的生长习性和栽培管理的方法进行阐述。愈伤组织是一种极其敏感细胞团，当它受到刺激后，植物周围具有可持续和剧烈分裂的细胞，是组织培养中的形态结构，接种的外植体培养在一段时间内形成愈伤组织碎片。陈淑仪在《诱导胡萝卜愈伤组织实验的探究》中提到：愈伤组织的形成可以是植物的任何器官且必须是活的薄壁细胞。《胡萝卜愈伤组织建立中的几个问题探讨》中作者胡蓉认为其发生顺序为：外植体经激素诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞增殖为薄壁组织而形成愈伤组织。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术提供一种猫乳树的组培方法，不同于以往的采用茎作为外殖体，本专利技术是研发了一种方法，以猫乳叶片进行组织培养繁殖。技术方案：本专利技术所述的猫乳叶片组织培养方法，是考察不同种类不同浓度的生长素结合对猫乳叶片出愈率的影响，讨论出最适合猫乳叶片的组培条件。猫乳叶片组培方法，包括如下步骤：(1)获取5-6月份新鲜的猫乳叶片；(2)用毛刷刷去叶片表面上的柔毛得到预处理后的猫乳材料；(3)将预处理后的猫乳材料进行表面消毒；(4)将消毒好的植物叶片在无菌环境下用剪刀切去四周的伤口部分并剪成块状，接种到启动培养基上，最后将接过苗的启动培养基放置于培养室中培养；培养室温度设定为20-30℃，光照时间设定为12-14h/d，光照强度设定为1800-2200lx。步骤(3)中所述表面消毒是先使用酒精消毒，接着用氯化汞消毒。步骤(4)中启动培养基是以MS培养基为基础培养基，并含有萘乙酸和含有6-苄氨基嘌呤。所述MS培养基中糖的浓度为25-35g/L；琼脂的浓度5-9g/L；培养基粉的浓度4-5g/L；PH值为6.8-7.2。所述萘乙酸浓度为0.05-0.15mg/L，6-苄氨基嘌呤浓度为1.0-11.0mg/L。所述启动培养基配制完经高压灭菌锅110-125℃灭菌，灭菌时间设定为30-40min。有益效果：本专利技术以猫乳的叶片进行组织培养，而不是传统的采用植物的茎作为外殖体，能够提高猫乳叶片组织培养繁殖技术。本专利技术通过研究不同种类不同浓度的生长素结合对猫乳叶片出愈率的影响，公开了最适合猫乳叶片的组培条件，对猫乳的组培繁殖研究以及猫乳的推广与应用具有重要的意义。附图说明图1是初代培养形成愈伤组织；图2是初代培养分化出芽。具体实施方式实施例1(1)材料材料是一年生枝条上长出的中部叶片，采集材料大部分在江苏农林职业技术学院农博园中剪取。(2)方法2.1叶片的采集猫乳植物在冬季处于休眠期，叶片不生长，进行组织培养试验要等到次年5-6月份，猫乳长出新叶片的时候，再剪取当年生叶片进行组培试验。2.2材料预处理在五月中旬至六月中旬的中午12点，截取猫乳枝条上健壮无病害的叶片外植体，在采集地用毛刷刷去叶片表面上的柔毛，外植体采集时，要注意所选材料的准确，采集结束后，要及时进行消毒并接入培养基中，防止叶片长时间失水干枯。2.3表面消毒猫乳植物的外植体采集要提前一周进行农药喷洒，将采集来的猫乳材料进行修剪，去掉不需要的部分，然后将叶片进行消毒灭菌。先将叶片放入配好的洗衣粉中浸泡20min，其次流水下冲洗1h，用滤纸吸干，放在多菌灵和链霉素配置的溶液中。分别是1克多菌灵定容到1000ml水中，浸泡25分钟，0.3克链霉素定容到1000ml水中，浸泡30min，每次浸泡结束后要用无菌水将外植体表面的药剂冲洗干净，防止有残留物影响实验效果。其次对猫乳外植体进行消毒处理，在浓度为75％酒精、0.1％氯化汞不变的情况下，设定不同的处理时间分别是3.5min、4(3+1)min、5(1+4)min。处理方式为：在装有浓度为75％的酒精中浸泡30s，用无菌水冲洗3遍，接着将浸泡好的叶片放入浓度为0.1％的升汞中，时间为上述设定的时间，每次浸泡时应不断摇动，让叶片接触均匀，浸泡结束后同样要用无菌水冲洗3遍。其中，4(3+1)min表示先是氯化汞3min然后无菌水冲洗，然后再1min氯化汞；5(1+4)min表示先是氯化汞1min然后无菌水冲洗，然后再4min氯化汞。2.4启动培养基的配制MS培养基中，各成分的标准为：糖的浓度为30g/L；琼脂的浓度7.5g/L；培养基粉的浓度4.74g/L；PH值控制在6.8-7.2。将高压灭菌锅调温按钮调到121℃，灭菌时间设定为30min。实验中所涉及到的两种激素，萘乙酸NAA是细胞生长激素，6-苄氨基嘌呤6-BA是细胞分裂素，这两种激素对愈伤组织的诱导产生很大影响。根据不同的浓度配比的NAA和6-BA，设计出6种实验浓度，具体见表2。2.5初代培养接种外植体时，接种室和超洁净工作台的灭菌工作尤其重要，要进行紫外线照射30min，时间结束后，应该关闭紫外灯才可以进入，进入无菌操作室里穿工作服，脸部要带口罩以及穿鞋套和头套。将消毒好的植物叶片拿入无菌操作室，在接种室里首先要对双手进行消毒，试剂选用的是浓度75％的酒精，要全面本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猫乳叶片组培方法，其特征在于包括如下步骤：/n(1)获取5-6月份新鲜的猫乳叶片；/n(2)用毛刷刷去叶片表面上的柔毛得到预处理后的猫乳材料；/n(3)将预处理后的猫乳材料进行表面消毒；/n(4)将消毒好的植物叶片在无菌环境下用剪刀切去四周的伤口部分并剪成块状，接种到启动培养基上，最后将接过苗的启动培养基放置于培养室中培养；培养室温度设定为20-30℃，光照时间设定为12-14h/d，光照强度设定为1800-2200lx。/n

【技术特征摘要】
1.一种猫乳叶片组培方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)获取5-6月份新鲜的猫乳叶片；
(2)用毛刷刷去叶片表面上的柔毛得到预处理后的猫乳材料；
(3)将预处理后的猫乳材料进行表面消毒；
(4)将消毒好的植物叶片在无菌环境下用剪刀切去四周的伤口部分并剪成块状，接种到启动培养基上，最后将接过苗的启动培养基放置于培养室中培养；培养室温度设定为20-30℃，光照时间设定为12-14h/d，光照强度设定为1800-2200lx。


2.根据权利要求1所述猫乳叶片组培方法，其特征在于步骤(3)中所述表面消毒是先使用酒精消毒，接着用氯化汞消毒。


3.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓桠，刘春风，周余华，吴茜，王红梅，
申请(专利权)人：江苏农林职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32