The invention discloses a T-lymphocyte combined with an immune checkpoint blocker, which is prepared by separating and amplifying the T-lymphocyte in vitro, and combining with the immune checkpoint blocker and the activated antibody in vitro. By combining the immune checkpoint blocker with T-lymphocyte, the immune checkpoint blocker can enter the host's immune system rapidly with T-lymphocyte. The artificial combination of the immune checkpoint blocker on the surface of T-lymphocyte can quickly and effectively make up for the deficiency of the immune checkpoint blocker secreted by T-lymphocyte in the natural state. The T-lymphocyte combined with the immunocheckpoint blocker of the invention can effectively inhibit the growth of tumor cells and reduce the recurrence and metastasis of cancer after being transported back to the host. When the T-lymphocyte of the invention is used for anti-tumor, there is no need to know the tumor related antigen, and the process is simple and easy compared with the traditional adoptive transfer cell therapy.
【技术实现步骤摘要】
结合有免疫检查点阻断剂的T淋巴细胞及其在制备抗肿瘤药物中的应用
本专利技术属于生物
,具体涉及一种结合有免疫检查点阻断剂的T淋巴细胞及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
虽然目前人类的医学技术水平已取得较大进步和发展,但是恶性肿瘤仍是威胁人类健康的重大疾病之一。近年来,肿瘤免疫治疗已逐渐成为研究热点,并取得了较大的成果。过继细胞转移(adoptivecelltransfer,ACT)疗法是肿瘤免疫治疗的热点研究领域之一。过继细胞转移疗法是指通过采集宿主自身的免疫细胞,经体外培养扩增或是为了增强其靶向性而进一步修饰处理后,将其重新输回宿主体内以提高肿瘤细胞的免疫原性和对效应细胞杀伤的敏感性。肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltratinglymphocytes,TILs)是过继细胞转移疗法中的一种重要的治疗细胞,使用患者自体肿瘤浸润淋巴细胞的癌症免疫疗法已显示在难治性转移性黑素瘤中介导持久的完全反应。TILs是存在于肿瘤微环境的T淋巴细胞,能够识别肿瘤相关抗原,包括新生肿瘤抗原(neoantigen),因此具有高度特异的抗肿瘤反应和低毒性。然而,使用TILs进行抗肿瘤治疗中的主要限制因素之一是复杂的TILs制造过程。该过程需要在高剂量白介素-2(IL-2)存在下,从消化的肿瘤碎片或单细胞悬浮液的多孔培养物;经过初始培养3-5周后,通过将TILs样品与自体肿瘤细胞共培养来测试不同孔中TILs的肿瘤反应性;然后才能选择具有肿瘤反应性的样品用于大规模二级多克隆扩增,过程非常繁琐 ...
【技术保护点】
1.一种结合有免疫检查点阻断剂的T淋巴细胞,其特征在于,所述免疫检查点阻断剂结合于T淋巴细胞的表面。/n
【技术特征摘要】
1.一种结合有免疫检查点阻断剂的T淋巴细胞,其特征在于,所述免疫检查点阻断剂结合于T淋巴细胞的表面。
2.根据权利要求1所述的结合有免疫检查点阻断剂的T淋巴细胞,其特征在于,所述T淋巴细胞为肿瘤浸润淋巴细胞。
3.根据权利要求2所述的结合有免疫检查点阻断剂的T淋巴细胞,其特征在于,所述免疫检查点阻断剂为PD-1抗体、LAG-3抗体、TIM-3抗体、TIGIT抗体、CTLA-4抗体和VISTA抗体中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的结合有免疫检查点阻断剂的T淋巴细胞,其特征在于,在所述T淋巴细胞上还结合有激动型抗体,所述激动型抗体选自OX40抗体、4-1BB抗体、ICOS抗体和GITR抗体中的至少一种。
5.根据权利要求2-4中任一项所述的结合有免疫检查点阻断剂的T淋巴细胞,其特征在于,所述肿瘤浸润淋巴细胞按照如下方法制备:
(1)切下肿瘤组织块,去除脂肪等其他组织,置于含双抗的PBS缓冲液中浸泡5分钟。
(2)将步骤(1)得到的肿瘤组织块通过全自动组织处理器处理后,收集细胞悬液并过滤后收集;
(3)将步骤(2)得到的细胞悬液中加入红细胞裂解液,孵育后加入PBS终止裂解,离心处理,弃上清,以PBS洗涤细胞后,用PBS重悬;
(4)将步骤(3)获得的肿瘤浸润淋巴细胞计数,用荧光标记CD3和PD-1的流式抗体染色,用PBS洗涤,离心处理弃上清,重悬于PBS中;进行CD3+PD-1+子集的分选;
(5)向步骤(4)获得的肿瘤浸润淋巴细胞中加入经辐照的鼠PBMC、人白介素-2和可溶性CD3抗体,刺激淋巴细胞增殖。
6.权利要求2或3所述的结合有免疫检查点阻断剂的T淋巴细胞...
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