一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂、应用方法及筛选方法技术

本发明专利技术涉及污水处理领域，一种蒙特利氏假单胞菌YS‑3菌制剂，采用蒙特利氏假单胞菌YS‑3通过营养培养基制备，所述营养培养基为自牛肉膏蛋白胨培养基、LB营养培养基、以及添加有碳源的无机盐培养基中的任意一种；所述牛肉膏蛋白胨培养基的成分及含量为：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L，pH＝7.0‑8.0；LB营养培养基的成分及含量为：酵母粉5.0g/L、氯化钠10.0g/L、蛋白胨10.0g/L，pH＝7.2‑7.6；无机盐培养基的成分及含量为：硝酸钠10g/L、钼酸钠0.08g/L、七水合硫酸亚铁0.12g/L、七水合硫酸镁0.2g/L、氯化钙0.12g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二胺1g/L，pH＝7.2‑7.6。

A preparation, application and screening method of Pseudomonas Monterey YS-3

The invention relates to the field of sewage treatment, a preparation of Monterey's Pseudomonas ys \u2011 3, which is prepared by using Monterey's Pseudomonas ys \u2011 3 through a nutrition culture medium, the nutrition culture medium is any one of beef extract peptone culture medium, LB nutrition culture medium and organic free salt culture medium added with carbon source; the composition and content of beef extract peptone culture medium are: Beef extract 3G / L, peptone 10g / L, sodium chloride 5g / L, pH = 7.0 \u2011 8.0; ingredients and contents of LB nutrition culture medium: yeast powder 5.0g/l, sodium chloride 10.0g/l, peptone 10.0g/l, pH = 7.2 \u2011 7.6; ingredients and contents of inorganic salt culture medium: sodium nitrate 10g / L, sodium molybdate 0.08g/l, ferrous sulfate 0.12g/l, magnesium sulfate 0.2g/l, calcium chloride 0.12g/l, dihydrogen phosphate 0.12g/l Potassium 1g / L, diamine hydrogen phosphate 1g / L, pH = 7.2-7.6.

【技术实现步骤摘要】
一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂、应用方法及筛选方法
本专利技术涉及污水处理领域，本专利技术是关于蒙特利氏假单胞菌及其应用，具体地说，是关于冬季北方污水处理处理废水中含氮化合物的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3的其相关应用。
技术介绍
近年来，随着人们生活水平的提高以及经济的快速发展，排放到水体中的氮含量日益增加，而污水中氮素的污染也日益严峻。而氮素的治理工作也越来越受到重视。在废水脱氮的众多方法中，生物脱氮技术因其绿色环保、行之有效等特点受到普遍应用。生物脱氮是以反硝化细菌为主，在兼性厌氧条件下，将硝酸盐及亚硝酸盐作为电子受体生成氮气的过程，但在高纬度地区，低温对生物脱氮技术有很大的影响。这是因为亚硝化菌的最佳生长温度为35℃，硝化细菌的最佳温度35～42℃，反硝化细菌的最佳温度是25～35℃。当温度小于10℃时，硝化和反硝化进程受到强烈抑制。而我国北方冬季气温通常低于10℃，低温反硝化成为冬季生物反硝化脱氮的限制因素。因此从环境中分离出能在较低温度下生长、具有反硝化细菌菌株成为强化生物脱氮的关键。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提出一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂，蒙特利氏假单胞菌，用于降解冬天北方污水处理厂出水氮化合物，优选用于降解市政处理废水、养殖废水、制药废水、石化废水、化肥废水、景观水、食品废水、大豆蛋白废水中的氮化合物。本专利技术还提该菌制剂应用及筛选方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：在第一个技术方案中，一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂，采用蒙特利氏假单胞菌YS-3通过营养培养基制备，所述营养培养基为自牛肉膏蛋白胨培养基、LB营养培养基、以及添加有碳源的无机盐培养基中的任意一种；所述牛肉膏蛋白胨培养基的成分及含量为：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L，pH＝7.0-8.0；LB营养培养基的成分及含量为：酵母粉5.0g/L、氯化钠10.0g/L、蛋白胨10.0g/L，pH＝7.2-7.6；无机盐培养基的成分及含量为：硝酸钠10g/L、钼酸钠0.08g/L、七水合硫酸亚铁0.12g/L、七水合硫酸镁0.2g/L、氯化钙0.12g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二胺1g/L，pH＝7.2-7.6。在第二个技术方案中，一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂的应用方法，包括如下步骤：步骤a、将如在第一个技术方案中所述的蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂与待净化污水混合；蒙特利氏假单胞菌添加量为添加量占废水处理体系总体积的1.5％-40％，废水处理体系中的碳氮比为4-15；蒙特利氏假单胞菌或菌制剂与待处理市政污水混合后，混合体系中活菌数为1X105～1X108cell/mL。步骤b、混合后投加三水合乙酸钠0.26-0.92g/L作为碳源，然后放置于5-30℃，优选8℃，160rpm的水浴摇床中反应，反应一定时间后取样，污水pH值为7-9。在第二个技术方案中，作为优选的，在步骤1中，蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂添加量为废水体积的20％-40％，废水处理体系中的碳氮比为8-12。在第二个技术方案中，作为优选的，所述市政处理水的硝态氮浓度为15-30mg/L。在第三个技术方案中，一种蒙特利氏假单胞菌YS-3的筛选方法，包括如下步骤：步骤1、取活性污泥；步骤2、将5g的活性污泥接种至硝态氮体积分数为0.5％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第一菌液；步骤3、吸取步骤2中5％第一菌液转接至硝态氮体积分数为1.5％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第二菌液；步骤4、吸取步骤3中5％的第二菌液转接至硝态氮体积分数为2.0％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第三菌液；步骤5、吸取步骤4中的5％的第三菌液涂布于硝态氮体积分数为2.0％的无机盐固体培养基中，在温度为8℃的培养箱培养3天，获得单菌落；步骤6、挑取步骤5中的单菌落置于离心管中，与体积分数30％的甘油1:1体积混合，制成菌液，并于-80℃超低温冰箱中保存。在第三个技术方案中，作为优选的，在步骤6后进行步骤7，对菌种进行鉴定：取步骤5得到的菌液中获得单菌落提取DNA，并对菌种进行DNA测序，其16SrRNA基因序列如标准测定的蒙特利氏假单胞菌YS-316SrRNA基因序列对比。使用本专利技术的有益效果是：本专利技术的有益效果在于，对市政污水中硝态氮有很好的去除效果，对环境无污染，是优选的除氮选择。附图说明图1为本专利技术实施例2中蒙特利氏假单胞菌YS-3的菌落形态图；图2为本专利技术实施例3中蒙特利氏假单胞菌YS-3及同时筛选得到的HW-1、YS-2分别对市政污水的硝态氮去除情况；图3为本专利技术实施例4提供YS-3菌株的不同碳氮比处理市政处理水的硝态氮去除情况；图4为本专利技术实施例5中蒙特利氏假单胞菌YS-3处理市政污水不同反应时间的硝态氮去除情况；图5为本专利技术实施例6提供YS-3菌株的不同添加量处理市政处理水的硝态氮去除情况。图6为本专利技术实施例6提供YS-3菌株的不同pH处理市政处理水的硝态氮去除情况。具体实施方式为使本技术方案的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式，对本技术方案进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而不是要限制本技术方案的范围。本专利技术的目的之一在于提供一种蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3，蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)。本专利技术的第二目的是提供上述的蒙特利氏假单胞菌YS-3的应用，所述的蒙特利氏假单胞菌YS-3用于降解冬天北方污水处理厂出水氮化合物，优选用于降解市政处理废水、养殖废水、制药废水、石化废水、化肥废水、景观水、食品废水、大豆蛋白废水中的氮化合物。本专利技术提供的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3可以以硝态氮化合物作为唯一氮源进行生长繁殖。优选的，所述的氮化合物为硝态氮和亚硝态氮。优选的，应用蒙特利氏假单胞菌YS-3降解氮化合物可以在好氧环境下进行。也可以在兼氧条件下降解硝态氮化合物。本专利技术提供的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3可以以硝态氮化合物作为唯一氮源进行生长繁殖。一种菌制剂，所述的菌制剂采用上述的蒙特利氏假单胞菌YS-3制备而成，该菌制剂也用于降解氮化合物，同时所述的菌制剂还包括有营养培养基。营养培养基选自牛肉膏蛋白胨培养基、LB营养培养基、以及添加有碳源的无机盐培养基中的任意一种，其中，碳源优选为乙酸钠。牛肉膏蛋白胨培养基的成分及含量为：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L，pH＝7.0-8.0，优选pH＝7.4-7.6。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂，其特征在于：采用蒙特利氏假单胞菌YS-3通过营养培养基制备，所述营养培养基为自牛肉膏蛋白胨培养基、LB营养培养基、以及添加有碳源的无机盐培养基中的任意一种；/n所述牛肉膏蛋白胨培养基的成分及含量为：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L，pH＝7.0-8.0；/nLB营养培养基的成分及含量为：酵母粉5.0g/L、氯化钠10.0g/L、蛋白胨10.0g/L，pH＝7.2-7.6；/n无机盐培养基的成分及含量为：硝酸钠10g/L、钼酸钠0.08g/L、七水合硫酸亚铁0.12g/L、七水合硫酸镁0.2g/L、氯化钙0.12g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二胺1g/L，pH＝7.2-7.6。/n

【技术特征摘要】
1.一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂，其特征在于：采用蒙特利氏假单胞菌YS-3通过营养培养基制备，所述营养培养基为自牛肉膏蛋白胨培养基、LB营养培养基、以及添加有碳源的无机盐培养基中的任意一种；
所述牛肉膏蛋白胨培养基的成分及含量为：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L，pH＝7.0-8.0；
LB营养培养基的成分及含量为：酵母粉5.0g/L、氯化钠10.0g/L、蛋白胨10.0g/L，pH＝7.2-7.6；
无机盐培养基的成分及含量为：硝酸钠10g/L、钼酸钠0.08g/L、七水合硫酸亚铁0.12g/L、七水合硫酸镁0.2g/L、氯化钙0.12g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二胺1g/L，pH＝7.2-7.6。


2.一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂的应用方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤a、将如权利要求1所述的蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂与待净化污水混合；蒙特利氏假单胞菌添加量为添加量占废水处理体系总体积的1.5％-40％，废水处理体系中的碳氮比为4-15；蒙特利氏假单胞菌或菌制剂与待处理市政污水混合后，混合体系中活菌数为1X105～1X108cell/mL。
步骤b、混合后投加三水合乙酸钠0.26-0.92g/L作为碳源，然后放置于5-30℃，优选8℃，160rpm的水浴摇床中反应，反应一定时间后取样，污水pH值为7-9。


3.根据权利要求2所述的蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂的应用方法，其特征在于：在步骤1中，蒙特利氏假单胞菌YS-3菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：董红红，
申请(专利权)人：深圳市长隆科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44