本发明专利技术提供了一种靶向CD30的嵌合抗原受体CAR‑CD30，所述CAR‑CD30包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。本发明专利技术还提供了一种包括所述CAR‑CD30的嵌合抗原受体T细胞，所述靶向CD30的嵌合抗原受体CAR‑CD30可以专一性地靶向CD30阳性肿瘤细胞，激活T细胞发挥细胞免疫作用，实现T细胞对CD30阳性肿瘤细胞高效且特异性的杀伤，且具有持久的细胞活力和杀伤力，并且对正常细胞不会造成损伤。本发明专利技术还提供了该靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞的制备方法、带该CAR‑CD30编码基因的重组病毒载体等。
Chimeric antigen receptor and chimeric antigen receptor T cells targeting CD30 and their preparation and Application
The invention provides a chimeric antigen receptor car \u2011 CD30 targeting CD30, the car \u2011 CD30 includes an amino acid sequence as shown in SEQ ID No: 1. The invention also provides a chimeric antigen receptor T cell including the car \u2011 CD30, which can specifically target the CD30 positive tumor cells, activate the T cells to play the role of cell immunity, realize the efficient and specific killing of the T cells on the CD30 positive tumor cells, and have lasting cell vitality and lethality, as well as normal fine cells Cells do not cause damage. The invention also provides a preparation method of the chimeric antigen receptor T cell targeting CD30, a recombinant virus vector with the car \u2011 CD30 coding gene, etc.
【技术实现步骤摘要】
靶向CD30的嵌合抗原受体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用
本专利技术涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向CD30的嵌合抗原受体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
恶性肿瘤(癌症)已成为威胁人类生命的元凶，发病率成上升趋势。举例来说，成熟T细胞淋巴瘤(MTCL)是一种罕见的极具侵略性的癌症类型，在过去的几十年里，该病的标准化疗方案一直没有发生变化。CD30蛋白是经典霍奇金淋巴瘤(HL)及系统性间变性大细胞淋巴瘤(sALCL)的明确生物标志物，该蛋白表达于多种类型的非霍奇金淋巴瘤(nHL)及霍奇金淋巴瘤(HL)，可以选择CD30作为肿瘤靶点来进行MTCL的治疗。CAR-T(嵌合抗原受体T细胞)技术是一种新型细胞疗法，它是将经过CAR改造的T细胞回输至人体，激活自身免疫系统，对肿瘤细胞进行杀伤，被认为是目前最有效的恶性肿瘤的治疗方式之一，可弥补诸如抗体药物偶联物等传统疗法的弊端。然而目前还未有靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞的相关研究。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术提供了一种靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30，以及所述靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞。所述靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30可以专一性地靶向CD30阳性肿瘤细胞，激活T细胞发挥细胞免疫作用，实现其对CD30阳性肿瘤细胞高效且特异性的杀伤，且具有持久的细胞活力和杀伤力。本专利技术还提供了一种靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。第一方面，本专利技术提供了一种靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30，所述CAR-CD30包括如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。可选地，所述靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30的编码基因包括如SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。可选地，所述靶向CD30的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:2所示的核苷酸序列，保护范围还应该包括与SEQIDNO:2具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:1。本专利技术第一方面提供的所述CAR-CD30能够特异性识别CD30抗原蛋白，与CD30抗原蛋白发生特异性结合，对肿瘤细胞，特别是表达CD30的实体瘤细胞具有较强的亲和活性及内化活性。第二方面，本专利技术提供了一种靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30，所述CAR-CD30如本专利技术第一方面所述。可选地，所述CAR-CD30包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向CD30的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列。其中，所述“从氨基端到羧基端顺次连接”具体为：所述靶向CD30的单链抗体的氨基酸序列的羧基端与所述胞外铰链区的氨基酸序列的氨基端相连，所述胞外铰链区的氨基酸序列的羧基端与所述跨膜区的氨基酸序列的氨基端相连，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述胞内信号区的氨基酸序列的氨基端相连。本专利技术中，所述单链抗体能特异性识别肿瘤细胞上的CD30蛋白，并与其发生特异性结合，对表达CD30的恶性肿瘤细胞具有较强的亲和活性及内化活性。所述胞外铰链区用于促进所述靶向CD30的单链抗体与肿瘤上的CD30结合。所述跨膜区用于固定所述靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30。所述胞内信号区用于提供T细胞活化的信号，维持T细胞的生存时间和激活T细胞增殖信号通路。其中，所述CAR-CD30中的胞内信号区包括CD27信号区和CD3ζ信号传导结构域。这里，CD3ζ信号区为所述T细胞的胞内信号传导结构域(即，第一信号结构域)，CD27信号区作为所述T细胞的共刺激结构域，在它们的共同作用下，T细胞在识别抗原后被完全活化。特别地，选用如SEQIDNO：10的CD27信号区作为共刺激结构域，可以更好地提升后续T细胞的扩增能力、杀伤活力。其中，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述CD27信号区的氨基酸序列的氨基端相连，所述CD27信号区的氨基酸序列的羧基端与所述CD3ζ信号区的氨基酸序列的氨基端相连。本专利技术第一方面提供的靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30及本专利技术第二方面提供的所述靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)中，所述受体CAR-CD30可供所述T细胞专一性地靶向表达CD30的肿瘤细胞，在CAR-CD30与CD30结合后，所述T细胞的胞内信号区被激活，促进T细胞在患者体内的扩增，并高效且特异性的杀伤CD30阳性肿瘤细胞。第三方面，本专利技术提供了一种重组病毒载体，所述重组病毒载体包括如第一方面所述的靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30的编码基因。可选地，所述CAR-CD30的编码基因包括如SEQIDNO：3所示的核苷酸序列。其中，如SEQIDNO：3所示的核苷酸序列与如SEQIDNO：2所示的核苷酸序列相比，多了下述连接肽的编码基因。所述信号肽的编码基因可以较好地指导所述嵌合抗原受体CAR-CD30表达到细胞表面。可选地，所述重组病毒载体中的病毒载体包括慢病毒载体、腺病毒载体或逆转录病毒载体。本专利技术第四方面提供的制备方法的步骤(1)-(2)示出了所述重组病毒载体的一种制备工艺。进一步可选地，所述病毒载体为慢病毒载体。更进一步可选地，所述慢病毒载体包括pWPXLD载体、pLEX-MCS载体、pSico载体和pCgpV载体中的至少一个。具体的，当所述慢病毒载体为pWPXLD载体时，所得重组病毒载体中，CAR-CD30的编码基因位于pWPXLD载体的BamHⅠ酶切位点和EcoRⅠ酶切位点之间。本专利技术第三方面提供的所述重组病毒载体为一安全可靠的载体工具，可以高效地转移所述CAR-CD30的编码基因。所述重组病毒载体可用于制备携带有所述CAR-CD30编码基因的病毒，及制备靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞，使所述T细胞实现高度组织特异性的表达。第四方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括如第三方面所述的重组病毒载体。可选地，所述宿主细胞可以包括HEK293T细胞、293细胞、293T细胞、293FT细胞、SW480细胞、u87MG细胞、HOS细胞、COS1细胞或COS7细胞等，但不限于此。进一步可选地，所述宿主细胞为HEK293T细胞。本专利技术第四方面提供的所述宿主细胞用于提供将如第二方面所述的重组病毒载体进行组装并制备生成相应病毒的场所，由宿主细胞制备的病毒携带有所述CAR-CD30的遗传信息，具有强侵染性。第五方面，本专利技术提供了一种靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，包括：(1)提供靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30的编码基因，所述CAR-CD30的编码基因包括如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列所对应的核苷酸序列；(2)将所述CAR-CD30的编码基因插入到pWPXLD载体中，得到pWPXLD-CAR-CD30重组质粒；(3)将所述pWPXLD-CAR-CD30重组质粒与本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向CD30的嵌合抗原受体，其特征在于，所述靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。/n
【技术特征摘要】
1.一种靶向CD30的嵌合抗原受体，其特征在于，所述靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30包括如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的靶向CD30的嵌合抗原受体，其特征在于，所述靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30的编码基因包括如SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。
3.一种靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，包括靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30，所述CAR-CD30包括如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。
4.如权利要求3所述的靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述CAR-CD30的氨基酸序列包括如SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。
5.一种重组病毒载体，其特征在于，所述重组病毒载体包括如权利要求1-2任一项所述的靶向CD30的嵌合抗原受体CAR-CD30的编码基因。
6.如权利要求5所述的重组病毒载体，其特征在于，所述CAR-CD30的编码基因包括如SEQIDNO：3所示的核苷酸序列。
7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括如权利要求5-6任一项所述的重组病毒载体。
【专利技术属性】
技术研发人员：万晓春，唐超，
申请(专利权)人：深圳宾德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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