一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的带节茎段外植体经愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖、克服玻璃化现象、不定根诱导、驯化移栽。本发明专利技术方法解决了传统獐牙菜属植物有性繁殖过程中变异过大，而无性繁殖极易出现的玻璃化现象等问题，且成本低、时间短、繁殖系数可观、质量和成活率高。

An artificial and efficient propagation method of Swertia mussotii

The invention discloses an artificial high-efficiency propagation method of Swertia mussotii, which comprises the steps of: inducing callus, generating and proliferating clustered buds of basal stem, overcoming vitrification, inducing adventitious roots, domesticating and transplanting the explants with segmented stem after disinfection and sterilization. The method solves the problems of vitrification in the process of sexual reproduction of traditional Swertia plants, which is easy to occur in asexual reproduction, and has the advantages of low cost, short time, considerable reproduction coefficient, high quality and survival rate.

【技术实现步骤摘要】
一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法
本专利技术涉及中草药繁殖技术，尤其涉及一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法。
技术介绍
贵州獐牙菜SwertiakouitchensisFranch.为龙胆科(Gentianaceae)獐牙菜属(Swertia)1-2年生草本。贵州獐牙菜在我国中西部地区被广泛用作民间治疗肝炎的草药，具有清热解毒、利胆退黄、小儿高热、口干渐热、喉咙肿痛、蛇咬伤，主要用于黄疸性肝炎、痈疽疔疮，同时对胆囊炎也有较显著疗效。现代研究表明，贵州獐牙菜中含有体外抗乙型病毒性肝炎的成分，而乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒(HBV)感染的危害人类健康的严重疾病，感染人口众多并能引发多种严重的并发症。全球约有3.5亿HBV感染者，每年因HBV感染引起的死亡人数超过60万。我国是乙型肝炎的高发区，HBV感染患者超过1.2亿。目前临床上使用的抗HBV药物主要为乙肝疫苗、干扰素和核苷类似物，但这些药物远不能满足临床上的需要。通过传统中草药来寻找高效低毒抗HBV药物是一个重要的研究课题，贵州獐牙菜展示了其广阔的开发利用前景。由于贵州獐牙菜主产区的生态环境日趋恶化，加之人为地过度采挖，野生种群及个体数量急剧锐减，其资源已远远不能满足国内外市场需求。贵州獐牙菜通常以其种子为繁殖单位。但种子萌发率低，种子苗生长缓慢且生物量较小、后代变异大，并受到萌发季节的限制，难以进行规模化、标准化(基因型背景一致)种植和高药效品种的大面积推广。因此，需要寻求一种新的成本低、时间短、质量和成活率高，且能将优良性状固定下来的高效人工繁殖方法来扩大贵州獐牙菜种苗的繁殖量，进行其高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，以解决贵州獐牙菜通常以其种子为繁殖单位，存在种子萌发率低，种子苗生长缓慢且生物量较小、后代变异大，并受到萌发季节的限制，难以进行规模化、标准化(基因型背景一致)种植，高药效品种难以大面积推广的问题。为了解决以上技术问题，本专利技术采用以下技术方案：一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的带节茎段外植体经愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖、克服玻璃化现象、不定根诱导、驯化移栽。进一步地，所述的贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，包括以下步骤：(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形的健壮植株，取其茎尖下茎段；(2)将1步骤的带节茎段进行消毒处理；(3)腋芽萌发、愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖同步培养：将经过2步骤消毒灭菌好的带节茎段为材料，接入下列培养基A中，所述A培养基，包括以下原料：MS培养液玉米素ZT6-苄胺基嘌呤6-BA萘乙酸NAA蔗糖琼脂粉控制光照度、温度、光照时间的条件下进行愈伤组织和腋芽萌发诱导；(4)优化培养：在3步骤培养基A中继代增殖3代时，将步骤3中培养的增殖苗转入下列培养基B中，所述B培养基，包括以下原料：B5培养液玉米素ZT6-苄胺基嘌呤6-BA萘乙酸NAA蔗糖琼脂粉控制光照度、温度、光照时间的条件下进行增殖培养；(5)将增殖芽丛按生长周期轮流接入3和4步骤培养基中，在保持增殖系数的同时又有效抑制了玻璃化苗的发生，此后，培养基A和培养基B轮流使用；(6)取5步骤丛芽中的健壮主苗接种于下列培养基C中，所述C培养基，包括以下原料：1/2MS培养液萘乙酸蔗糖琼脂粉控制光照度、温度、光照时间的条件下获得苗壮根粗的生根苗；(7)炼苗和移栽。进一步地，步骤1中所述带节茎段进行消毒处理的方法为：先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再放到流水下冲洗2h后，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒60s，再用质量百分比为0.1％的HgCl2灭菌8min，最后用无菌水冲洗6次后放在无菌滤纸上吸干表面水分，最终得到消毒灭菌处理的外植体。进一步地，步骤3中所述A培养基，包括以下原料：MS培养液进一步地，所述A培养基的pH值为5.4-5.8。进一步地，步骤4中所述B培养基，包括以下原料：B5培养液进一步地，所述B培养基的pH值为5.4-5.8。进一步地，步骤6中所述C培养基，包括以下原料：1/2MS培养液萘乙酸0.5-1.0mg/L蔗糖30000mg/L琼脂粉4800mg/L。进一步地，所述C培养基的pH值为5.4-5.8。进一步地，步骤7中炼苗和移栽的方法如下：取6步骤的生根苗，连培养瓶一起置于室温下炼苗，打开瓶盖，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入多菌灵溶液中消毒后，移栽至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，即得移栽苗。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术利用组织培养技术，可进行周年工厂化连续生产，生产效率高，克服了传统繁殖方式无法周年进行生产的难点。2、本专利技术增殖速度快，增殖系数大，以基茎丛生芽为中间繁殖体，属直接器官发生，变异小，且30-40d为一个培养周期，繁殖系数达15.0以上。3、本专利技术解决了贵州獐牙菜快速繁殖中易出现的玻璃化现象，提高了种苗质量。4、本专利技术使所有种苗保持同一基因型背景，易于标准化、工厂化操作，解决了传统种子繁殖后代分离大、性状不稳定而导致的种苗品质不一的难题。5、本专利技术对贵州獐牙菜快速繁殖体系进行了优化，在同一培养基中，可同时进行愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖培养，简化了培养程序；整个快速繁殖过程只需3种培养基就解决了从愈伤组织、基茎丛生芽发生和增殖、克服玻璃化现象以及生根问题，利于安排生产计划。6、本专利技术的方法为保护其野生资源和发展人工种植奠定技术基础，同时将优良性状固定下来，可提供基因型背景一致的优质种苗以满足大面积推广种植的需求。附图说明图1为愈伤组织、丛生芽发生和增殖培养各个生长阶段的图；其中图1-A为愈伤组织开始分化出丛生芽图；图1-B为基部丛生芽图；图1-C为丛生芽迅速增殖图；图1-D为A、B培养基交替使用生长的丛生芽图。图2为玻璃化现象的改善图；其中图2-A为玻璃化苗；图2-B为A、B培养基交替使用生长的丛生芽图。图3为生根苗和炼苗图；其中图3-A为洗净的生根苗图；图3-B为保温保湿培养图；图3-C为移栽苗图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，包括以下步骤：1、外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的带节茎段外植体经愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖、克服玻璃化现象、不定根诱导、驯化移栽。/n

【技术特征摘要】
1.一种贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的带节茎段外植体经愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖、克服玻璃化现象、不定根诱导、驯化移栽。


2.根据权利要求1所述的贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形的健壮植株，取其茎尖下茎段；
(2)将1步骤的带节茎段进行消毒处理；
(3)腋芽萌发、愈伤组织诱导、基茎丛生芽发生和增殖同步培养：将经过2步骤消毒灭菌好的带节茎段为材料，接入下列培养基A中，所述A培养基，包括以下原料：
MS培养液
玉米素ZT
6-苄胺基嘌呤6-BA
萘乙酸NAA
蔗糖
琼脂粉
控制光照度、温度、光照时间的条件下进行愈伤组织和腋芽萌发诱导；
(4)优化培养：在3步骤培养基A中继代增殖3代时，将步骤3中培养的增殖苗转入下列培养基B中，所述B培养基，包括以下原料：
B5培养液
玉米素ZT
6-苄胺基嘌呤6-BA
萘乙酸NAA
蔗糖
琼脂粉
控制光照度、温度、光照时间的条件下进行增殖培养；
(5)将增殖芽丛按生长周期轮流接入3和4步骤培养基中，在保持增殖系数的同时又有效抑制了玻璃化苗的发生，此后，培养基A和培养基B轮流使用；
(6)取5步骤丛芽中的健壮主苗接种于下列培养基C中，所述C培养基，包括以下原料：
1/2MS培养液
萘乙酸
蔗糖
琼脂粉
控制光照度、温度、光照时间的条件下获得苗壮根粗的生根苗；
(7)炼苗和移栽。


3.根据权利要求1所述贵州獐牙菜的人工高效繁殖方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐福荣，黄衡宇，
申请(专利权)人：云南中医药大学，
类型：发明
国别省市：云南;53