一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法技术

本发明专利技术提供一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的叶片外植体接种于培养基中，进行愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖、生根诱导、炼苗移栽。本发明专利技术对西番莲杂交种种苗的生产工艺进行了优化调整，同步进行愈伤组织生长、丛芽发生和丛芽增殖，简化了组培过程，3个培养过程同时在一个培养基中进行，大大提高了繁殖效率。此外，本发明专利技术解决了西番莲属植物组织培养过程中易发生的植株黄化、落叶等现象，且成本低、周期短、质量和成活率高。

A high efficient artificial seedling raising method of high quality hybrid of Passiflora

The invention provides an efficient artificial seedling raising method of Passiflora high-quality hybrid, which comprises the steps of: inoculating the sterilized leaf explants into the culture medium, inducing callus, generating and proliferating cluster buds, inducing rooting and transplanting refined seedlings. The invention optimizes and adjusts the production process of hybrid seed and seedling of Passiflora, synchronously carries out callus growth, cluster bud generation and cluster bud proliferation, simplifies the tissue culture process, and simultaneously carries out three culture processes in one culture medium, greatly improving the propagation efficiency. In addition, the invention solves the phenomena of plant yellowing and defoliation which are easy to occur in the tissue culture process of Passiflora, and has the advantages of low cost, short cycle, high quality and survival rate.

【技术实现步骤摘要】
一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法。
技术介绍
西番莲(PassifloracoeruleaL.)，又名百香果、鸡蛋果、巴西果，为西番莲科(Passifloraceae)西番莲属(Passiflora)多年生草质到半木质藤本攀缘性热带及亚热带植物；原产于南美洲巴西至阿根廷一带，我国主要分布于台湾、广东、福建、广西、浙江、四川、云南等省区。西番莲四季常青，花色艳丽，花瓣5枚，淡绿色，外副花冠裂片丝状，内副花冠流苏状，其果实为浆果卵圆球形至近圆球形，熟时橙黄色或黄色，耐贮运，口感好，具“果汁之王”的美誉。西番莲为异花授粉植物，自然群体中具有高度的异质性。西番莲传统上主要以种子和扦插方式进行繁殖，种子实生苗存在萌发率低、缓苗期较长、成活率低、性状分离大、健壮度不高等问题；而扦插苗亦存在周期长和成活率低等问题，且长期无性繁殖容易造成病毒积累，致使西番莲种性退化，品种质量下降，产量逐年降低。这些不利因素制约了西番莲种植业和加工业的发展，使我国西番莲在国际上毫无市场竞争力。云南西双版纳曼飞龙农场在以本地紫色种(P.edulisS.)为父本，台湾黄色种(P.edulisF.)为母本的杂交F1代中，筛选出抗病性强、具自交亲和性、果实紫红色、座果率达70％以上，且果汁香味浓烈、甜度高等特点的杂交种(尚未申请新品种)；但该品种具很大的不稳定性，无法以有性生殖的方法固定上述优良性状。西番莲各品种的组织培养报道很多，但在繁殖系数和周期、瓶苗黄化及落叶、移栽成活率及较高成本方面仍存在一些问题，使组培苗的整体应用仍处于较低水平。因此，需要寻求一种新的成本低、时间短、质量和成活率高，无黄化落叶且能将优良性状固定下来的无性繁殖方法来扩大西番莲尤其是优质杂交种种苗的繁殖量，进行高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决上述现有繁殖技术存在的缺陷，提供一种能够提高西番莲优质杂交种快速繁殖效率的方法，该方法为固定杂交优质品种性状、发展人工种植奠定了技术基础。通过本专利技术，可提供基因型背景一致的优质种苗以满足人工种植的需求。为了解决以上技术问题，本专利技术采用以下技术方案：一种西番莲优质杂交种的高效率人工快繁新方法，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的叶片外植体接种于培养基中，进行愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖、生根诱导、炼苗移栽。进一步地，所述的西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，包括以下步骤：(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形果的健壮杂交F1代植株，取其当年生叶片；(2)将1步骤的叶片进行消毒处理；(3)愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖：将经过2步骤消毒灭菌好的叶片为材料，以平放的方式接入下列培养基A中，所述A培养基，包括以下原料：OM基本培养液6-苄胺基嘌呤(6-BA)吲哚丁酸(IBA)激动素(KT)蔗糖琼脂粉控制光照度、温度、光照时间的条件下进行愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖；(4)优化培养：在步骤3培养基中继代增殖3代后，将步骤3中培养的增殖苗转入下列培养基B中，所述B培养基，包括以下原料：改良的OM基本培养液6-苄胺基嘌呤(6-BA)吲哚丁酸(IBA)激动素(KT)蔗糖琼脂粉控制光照度、温度、光照时间的条件下进行优化培养；(5)将增殖芽丛按生长周期轮流接入3和4步骤培养基中，在保持增殖系数的同时又有效抑制了玻璃化苗的发生，其中，培养基A和培养基B轮流使用，在本步骤中可大量繁殖至生产所需的种苗基数；(6)取5步骤丛芽中的健壮主苗接种于下列培养基C中，所述C培养基，包括以下原料：OM基本培养液吲哚丁酸(IBA)蔗糖琼脂粉控制光照度、温度、光照时间的条件下进行培养，即可获得苗壮根粗的生根苗；(7)炼苗和移栽：取步骤6中的生根植株置于室温下炼苗，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入多菌灵溶液中消毒，后移栽至经消毒的沙土基质中保温保湿培养，即得移栽苗。进一步地，步骤2中所述叶片进行消毒处理的方法为：用自来水清洗表面灰尘和杂物，再用10％洗衣粉溶液浸泡10min并轻微震荡搅动后流水冲洗30min，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒15s，再用质量百分比为0.1％的HgCl2灭菌4min，最后无菌水冲洗5-6次，每次不低于3min，在整个消毒过程中充分摇动器皿。进一步地，步骤3中所述A培养基，包括以下原料：OM(Olivemedium)基本培养液：大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L进一步地，所述A培养基的pH值为5.6-5.8。进一步地，步骤4中所述B培养基，包括以下原料：改良的OM基本培养液：将铁盐成份增加为原来的2.0倍，其余成分不变其中OM(Olivemedium)基本培养液如下：大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L进一步地，所述B培养基的pH值为5.6-5.8。进一步地，步骤6中所述C培养基，包括以下原料：OM基本培养液大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L铁盐：7水合硫酸亚本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种西番莲优质杂交种的高效率人工快繁新方法，其特征在于，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的叶片外植体接种于培养基中，进行愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖、生根诱导、炼苗移栽。/n

【技术特征摘要】
1.一种西番莲优质杂交种的高效率人工快繁新方法，其特征在于，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的叶片外植体接种于培养基中，进行愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖、生根诱导、炼苗移栽。


2.根据权利要求1所述的西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形果的健壮杂交F1代植株，取其当年生叶片；
(2)将1步骤的叶片进行消毒处理；
(3)愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖：将经过2步骤消毒灭菌好的叶片为材料，以平放的方式接入下列培养基A中，所述A培养基，包括以下原料：
OM基本培养液
6-苄胺基嘌呤(6-BA)
吲哚丁酸(IBA)
激动素(KT)
蔗糖
琼脂粉
控制光照度、温度、光照时间的条件下进行愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖；
(4)优化培养：在步骤3培养基中继代增殖3代后，将步骤3中培养的增殖苗转入下列培养基B中，所述B培养基，包括以下原料：
改良的OM基本培养液
6-苄胺基嘌呤(6-BA)
吲哚丁酸(IBA)
激动素(KT)
蔗糖
琼脂粉
控制光照度、温度、光照时间的条件下进行优化培养；
(5)将增殖芽丛按生长周期轮流接入3和4步骤培养基中，在保持增殖系数的同时又有效抑制了植株黄化落叶的现象。其中，培养基A和培养基B轮流使用，在本步骤中可大量繁殖至生产所需的种苗基数；
(6)取5步骤丛芽中的健壮主苗接种于下列培养基C中，所述C培养基，包括以下原料：
OM基本培养液
吲哚丁酸(IBA)
蔗糖
琼脂粉
控制光照度、温度、光照时间的条件下进行培养，即可获得苗壮根粗的生根苗；
(7)炼苗和移栽：取步骤6中的生根植株置于室温下炼苗，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入多菌灵溶液中消毒，后移栽至经消毒的沙土基质中保温保湿培养，即得移栽苗。


3.根据权利要求2所述的西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，其特征在于，步骤2中所述叶片进行消毒处理的方法为：用自来水清洗表面灰尘和杂物，再用10％洗衣粉溶液浸泡10min并轻微震荡搅动后流水冲洗30min，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒15s，再用质量百分比为0.1％的HgCl2灭菌4min，最后无菌水冲洗5-6次，每次不低于3min，在整个消毒过程中充分摇动器皿。


4.根据权利要求2所述的西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，其特征在于，步骤3中所述A培养基，包括以下原料：
OM(Olivemedium)基本培养液：
大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L
钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L
铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L
有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄衡宇，徐福荣，
申请(专利权)人：云南中医药大学，
类型：发明
国别省市：云南;53