A method for producing photosensitive cells is disclosed. A cell group including photoreceptor cells and its use are also disclosed.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗视网膜疾病的感光细胞
技术介绍
本公开内容涉及从多能干细胞生产感光细胞的方法。视网膜疾病通常由于有丝分裂后神经元细胞的丢失导致失明。视网膜疾病包括视杆细胞或视锥细胞营养不良、视网膜变性、色素性视网膜炎、糖尿病性视网膜病、黄斑变性、勒伯尔先天性黑蒙和斯特格氏病。在大多数视网膜变性中,细胞丢失主要发生在外核层,其中包含了视杆和视锥感光细胞。随着有丝分裂后神经元细胞群的丢失,需要外源性来源的新细胞替代感光细胞。感光细胞的潜在替代来源包括干细胞。早期的研究纳入了使用小鼠细胞、小鼠干细胞或异源性的视网膜祖细胞群作为替代丢失的感光细胞的可能细胞来源。这些早期研究描述了从出生后第1天小鼠的视网膜移植感光细胞前体细胞,在体外从小鼠胚胎干细胞产生视网膜前体细胞,从出生后第1天小鼠的视网膜产生视网膜祖细胞,在视网膜变性RCS大鼠模型中植入骨髓间充质干细胞,从HI人胚胎干细胞系生产视网膜祖细胞,包括神经节细胞、无长突细胞、其中所有细胞中的0.01%表达S-视蛋白或视紫红质的感光细胞、双极细胞和水平细胞(Lamba等Proc.Natl.Acad.Sci.10(34):12769-12774,2006)以及从人成纤维细胞诱导诱导的多能干细胞(iPS)以产生视网膜祖细胞(Lamba等PLoSONE5(l):e8763.doi:10.1371/journal.pone.0008763)。然而,需要更有效地产生可用于细胞疗法的可移植感光细胞的新方法。更具体地,需要能够产生能够有效地生产视杆和视锥感光细胞的感光细胞祖细胞的方法。本公开解决了 ...
【技术保护点】
1.一种产生感光细胞的方法,其包括(a)在引起感光细胞的条件下,在含有烟酰胺的培养基中培养干细胞。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170208 US 62/456,1551.一种产生感光细胞的方法,其包括(a)在引起感光细胞的条件下,在含有烟酰胺的培养基中培养干细胞。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述培养基包含至少0.5mM烟酰胺。
3.根据权利要求1所述的方法,其还包括(b)在包含选自以下的至少一种试剂或试剂的组合的培养基中培养步骤(a)中产生的细胞:GSK3抑制剂、Wnt抑制剂、bFGF、HSA或IGF。
4.根据权利要求3所述的方法,其还包括在步骤(b)的所述培养之后分离感光细胞。
5.根据权利要求3所述的方法,其还包括在步骤(b)的所述培养之后扩增所述细胞。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法,其中步骤(a)的所述培养是在非贴壁条件下进行。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法,其中步骤(b)的所述培养是在非贴壁条件下进行。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其中步骤(b)的所述培养基包含以下中的一种或多种:
(i)烟酰胺和Wnt抑制剂;
(ii)烟酰胺和bFGF;
(iii)烟酰胺和IGF;
(iv)烟酰胺、IGF和GSK3抑制剂;
(v)烟酰胺、bFGF和Wnt抑制剂;
(vi)烟酰胺、Wnt抑制剂和HSA;
(vii)烟酰胺、bFGF和HSA;
(viii)烟酰胺、bFGF、Wnt抑制剂和HSA;或
(ix)烟酰胺和HSA。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其中步骤(a)的所述培养至少进行3天。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法,其中步骤(b)的所述培养至少进行1周。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法,其中步骤(b)的所述培养基基本上不含激活素A。
12.根据权利要求1-10中任一项所述的方法,其中步骤(b)的所述培养基基本上不含TGFβ超家族成员。
13.根据权利要求1-10中任一项所述的方法,在不存在所述TGFβ超家族成员的情况下进行,其允许分化成所述感光细胞。
14.根据权利要求1-11中任一项所述的方法,其中在步骤(a)的所述培养之前,将所述干细胞在饲养细胞条件培养基中培养。
15.根据权利要求1-11中任一项所述的方法,其中在步骤(a)的所述培养之前,将所述干细胞在层粘连蛋白上的无饲养细胞系统中培养。
16.根据权利要求3所述的方法,其还包括在步骤(b)之后冻存所述感光细胞。
17.根据权利要求16所述的方法,其中所述冻存在选自以下的培养基中进行:90%人血清/10%DMSO、CryoStor10%、CryoStor5%、CryoStor2%、StemCellbanker和PrimeFreezIS。
18.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其中所述干细胞包括人胚胎干细胞(ESC)或诱导的多能干细胞(iPSC)。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法,其中步骤(a)的所述培养基基本上不含Wnt抑制剂、bFGF、HSA、IGF和/或GSK3抑制剂。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法,其中所述GSK3抑制剂包括CHIR。
21.根据权利要求1-19中任一项所述的方法,其中所述Wnt抑制剂包括endo-IWRl。
22.根据权利要求6或7所述的方法,其中所述非...
【专利技术属性】
技术研发人员:B·E·鲁比诺夫,M·戈尔什坦,H·坎纳,A·奥伯伦斯基,E·班宁,
申请(专利权)人:哈达西特医疗研究服务和开发有限公司,
类型:发明
国别省市:以色列;IL
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