一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法技术

本发明专利技术属于生物污水处理技术领域，尤其涉及一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法，包括如下步骤：实验菌源样品的预处理；将预处理得到的实验菌源样品接种到液体富集培养基中培养24h，初步得到含有目标降解功能的混合微生物菌悬液；采用逐步提高原水质量浓度的定时定量方法对得到的菌悬液进行驯化筛选，得到对含溴废水降解效率较高的混合微生物菌悬液；采用富集培养法将得到的新鲜菌悬液中各菌株分离出来。本发明专利技术的有益效果是：通过对某盐场含溴废水水质分析，利用含溴废水选择性的驯化，经过对菌群筛选、分离、提纯、培养得到适应某盐场含溴废水的高效降解菌种，对废水实现有效处理，达到工业废水三级排放标准。

An experimental method of screening and culturing high efficient bacteria for bromine wastewater treatment

The invention belongs to the technical field of biological sewage treatment, in particular to a high-efficiency bacteria screening and Cultivation Experimental Method for bromine containing wastewater treatment, which comprises the following steps: pretreatment of the experimental bacteria source sample; inoculation of the experimental bacteria source sample obtained from the pretreatment into the liquid enrichment medium for cultivation for 24 hours to preliminarily obtain the mixed microbial suspension with the target degradation function; gradual improvement of the raw water is adopted The time and quantitative method of mass concentration was used to acclimate and screen the bacterial suspension, and the mixed microbial suspension with high degradation efficiency for bromine wastewater was obtained; the bacterial strains in the fresh bacterial suspension were separated by enrichment culture method. The beneficial effect of the invention is: through the analysis of the water quality of the bromine containing wastewater in a salt field, the selective domestication of the bromine containing wastewater is used, the efficient degradation bacteria adapted to the bromine containing wastewater in a salt field is obtained through the screening, separation, purification and cultivation of the bacteria group, the effective treatment of the wastewater is realized, and the three-level discharge standard of the industrial wastewater is reached.

【技术实现步骤摘要】
一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法
本专利技术属于生物污水处理
，尤其涉及一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法。
技术介绍
目前我国工业废水排放总量已超过250亿吨，且具有成分复杂、高COD、高含盐量、毒性大及难降解等特点。溴及其化合物作为原料被广泛用于阻燃剂、净水剂、杀虫剂、染料等的制造过程当中，并广泛应用于石油化工、医药加工、喷涂印染、垃圾处理等行业。在促进工业生产的过程当中，也产生了大量的高浓度、难降解的含溴有机废水。含溴废水的处理对整个水处理系统起到至关重要的作用，对整个系统能否连续、稳定的运行、后期系统维护及整个项目的投资成本均有重要影响。工业废水处理常用方法包括物理处理法、化学处理法、物理化学处理法和生物处理法，生物处理法包括厌氧法和好氧法。生物处理法相比其他处理方法，具有工艺成熟、处理效果好且稳定，投资运营成本低等优点，在国内外受到十分广泛的应用。然而针对一些特殊的化工生产废水，例如天津某盐场来水含溴量大、导致COD含量偏高，且伴随较大的含盐量，pH呈酸性，易对设备造成严重腐蚀，并对整个系统的正常运行及水质达标造成影响，投资成本大。采用生物处理方法时为了能够最大程度的处理此类废水，需要驯化、筛选出针对废水的高效降解COD的菌种，从而需要寻求一种筛选高效降解菌种的方法。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术提供一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法，通过对某盐场含溴废水水质分析，利用含溴废水选择性的驯化，经过对菌群筛选、分离、提纯、培养得到适应某盐场含溴废水的高效降解菌种，对废水实现有效处理，达到工业废水三级排放标准。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法，其特征在于包括如下步骤：(1)实验菌源样品的预处理：即曝气池中活性污泥的预处理；(2)菌种的富集培养：将步骤(1)预处理得到的实验菌源样品接种到液体富集培养基中培养24h，初步得到含有目标降解功能的混合微生物菌悬液。(3)菌种的驯化筛选：采用逐步提高原水质量浓度的定时定量方法对步骤(2)得到的菌悬液进行驯化筛选，得到对含溴废水降解效率较高的混合微生物菌悬液；(4)菌株的纯化分离：采用富集培养法对步骤(3)菌悬液菌群进行分离，将步骤(3)得到的菌悬液制成浓度梯度为10-1的稀释菌悬液，接种在原水与无菌水混合而成的培养基中，并在37℃的恒温摇床中培养一个周期，如此反复驯化培养5个周期后，进行菌株分离，得到目标群。步骤(1)中，菌库中菌源的预处理过程为：从冷冻菌库中取出细菌样品，在30℃恒温箱中保存，备用；步骤(1)中，曝气池中活性污泥的预处理过程为：采集曝气池中的活性污泥到容器中，在活性污泥中加入浓度为0.02％的焦磷酸钠和玻璃珠，打破活性污泥中的菌胶团解絮，解絮后的菌悬液离心分离后取菌源沉淀备用；优选地，解絮后的菌悬液在30℃，150r/min的恒温摇床中振荡30min充分混匀后，再在6000r/min的转速下离心10min，弃上清液，得到混合均匀的菌源沉淀，备用。步骤(3)中菌种的驯化和筛选过程为：取步骤(2)得到的菌悬液接种到选择培养基中生长培养一个周期，再取新鲜菌悬液接种到下一级含原水浓度较高的新的选择培养基中驯化培养一个周期，新的选择培养基中原水浓度逐渐递增，如此反复驯化培养10个周期后，得到对含溴废水降解效率较高的混合微生物菌悬液。步骤(3)中菌种的驯化和筛选过程为：将1ml步骤(2)得到的菌悬液，接种到150ml由原水、无菌水、LB培养基组成的选择培养基中生长4天，再用移液枪取0.5ml新鲜菌悬液接种到下一级含原水浓度较高的新的选择培养基中驯化培养一个周期，新的选择培养基中原水浓度逐渐递增，如此反复驯化培养10个周期后，得到对含溴废水降解效率较高的混合微生物菌悬液。步骤(3)菌种的驯化和筛选的培养条件是：在恒温摇床内进行好氧振荡培养，恒温摇床转速150r/min，温度35℃。步骤(4)中，当选择培养基中的原水培养基增加到100mL时，采用富集培养法将选择培养基中的各菌株分离出来，具体为：在无菌操作条件下，移取1ml步骤(3)驯化筛选后的新鲜菌悬液到10ml已灭菌的EP管中，再加入9ml的无菌水，振荡、混合均匀，制成浓度梯度为10-1的稀释菌液；取上述稀释菌液0.2ml，接种在50ml的原水与50ml无菌水混合而成的培养基中，并放入37℃的恒温摇床，培养4天，再取得到的新鲜菌液0.2ml，接种在50ml的原水与50ml无菌水混合而成的新培养基中，放入37℃的恒温摇床培养4天，如此反复驯化培养5个周期后，进行菌株分离，得到目标菌群。还包括菌群的保种，将分离完成后的单一菌株接种至确定未染菌的LB固体培养基上，菌液用甘油封存在-20℃下以备用，保种的菌种每两个月需更新一次，以保持菌株的活性。所述步骤(3)中设置对照组，对照组的选择培养基组成为LB液体培养基50ml、无菌水100ml。液体富集培养基各组成成分及重量含量为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、无菌水1000g；LB液体培养基各成分及重量含量为：氯化钠10g、酵母提纯物10g、蛋白胨5g、无菌水1000g；LB固体培养基各成分及重量含量为：氯化钠10g、酵母提纯物10g、蛋白胨5g、无菌水1000g，琼脂15～20g，pH7.2-7.6，0.56kg/cm2，112.6℃灭菌30min；原水培养基为盐场废水水样，直接取该废水水样使用，不进行过滤。本专利技术的有益效果是：一、本专利技术的实验方法主要是利用不同种类的微生物其生长繁殖对环境和营养的要求不同，如温度、pH值、渗透压、氧气、碳源、氮源等，通过人为控制微生物生长的条件，使之利于某类或某种微生物生长，而不利于其他种类微生物的生存，以达到使目的菌种占优势，从而达到快速分离纯化的目的，进而得到所需菌种；二、本专利技术通过对某盐场含溴废水水质分析、对菌群进行含溴废水选择性的驯化，经过对菌群筛选、分离、提纯、培养得到适应某盐场含溴废水的高效降解菌种，对废水实现有效处理，满足了生化后出水水质达到工业废水三级排放标准(COD小于500ppm)，为工程改造施工提供可靠的参考；三、本专利技术的实验方法环保、简单、可靠且适用性强，可用于不同废水菌种的筛选实验；通过此方法筛选出了针对含溴废水的高效降解菌种，生物处理方法中加入此类高效降解菌种能够确保含溴废水处理达标，解决了含溴废水的污染问题和难降解问题；为某盐场现有的生化设施工程改造提供了可靠的参考依据。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术的具体实施方式做出说明。本专利技术的实验方法主要是利用不同种类的微生物其生长繁殖对环境和营养的要求不同，如温度、pH值、渗透压、氧气、碳源、氮源等，通过人为控制微生物生长的条件，使之利于某类或某种微生物生长，而不利于其他种类微生物的生存，以达到使目的菌种占优势，从而达到快速分离纯化的目的。本专利技术的方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法，其特征在于包括如下步骤：/n(1)实验菌源样品的预处理：将曝气池中活性污泥进行预处理；/n(2)菌种的富集培养：将步骤(1)预处理得到的实验菌源样品接种到液体富集培养基中培养24h，初步得到含有目标降解功能的混合微生物菌悬液；/n(3)菌种的驯化筛选：采用逐步提高原水质量浓度的定时定量方法对步骤(2)得到的菌悬液进行驯化筛选，得到对含溴废水降解效率较高的混合微生物菌悬液；/n(4)菌群的纯化分离：采用富集培养法对步骤(3)菌悬液各菌株进行分离，将步骤(3)得到的菌悬液制成浓度梯度为10

【技术特征摘要】
1.一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)实验菌源样品的预处理：将曝气池中活性污泥进行预处理；
(2)菌种的富集培养：将步骤(1)预处理得到的实验菌源样品接种到液体富集培养基中培养24h，初步得到含有目标降解功能的混合微生物菌悬液；
(3)菌种的驯化筛选：采用逐步提高原水质量浓度的定时定量方法对步骤(2)得到的菌悬液进行驯化筛选，得到对含溴废水降解效率较高的混合微生物菌悬液；
(4)菌群的纯化分离：采用富集培养法对步骤(3)菌悬液各菌株进行分离，将步骤(3)得到的菌悬液制成浓度梯度为10-1的稀释菌悬液，接种在原水与无菌水混合而成的培养基中，并在37℃的恒温摇床中培养一个周期，如此反复驯化培养5个周期后，进行菌株分离，得到目标菌群。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
步骤(1)中，曝气池中活性污泥的预处理过程为：采集曝气池中的活性污泥到容器中，在活性污泥中加入浓度为0.02％的焦磷酸钠和玻璃珠，打破活性污泥中的菌胶团解絮，解絮后的菌悬液离心分离后取菌源沉淀备用；
优选地，解絮后的菌悬液在30℃，150r/min的恒温摇床中振荡30min充分混匀后，再在6000r/min的转速下离心10min，弃上清液，得到混合均匀的菌源沉淀，备用。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中菌种的驯化和筛选过程为：取步骤(2)得到的菌悬液接种到选择培养基中生长培养一个周期，再取新鲜菌悬液接种到下一级含原水浓度较高的新的选择培养基中驯化培养一个周期，新的选择培养基中原水浓度逐渐递增，如此反复驯化培养10个周期后，得到对含溴废水降解效率较高的混合微生物菌悬液。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(3)中菌种的驯化和筛选过程为：将1ml步骤(2)得到的菌悬液，接种到150ml由原水、无菌水、LB液体培养基组成的选择培养基中生长4天，再用移液枪取0.5ml新鲜菌悬液接种到下一级含原水浓度较高的新的选择培养基中驯化培养一个周期，新的选择培养基中原水浓度逐渐递增，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘笑天，王绍明，赵娜，
申请(专利权)人：天津亿利科能源科技发展股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12