一种诱导龟足腺介幼虫附着变态的方法技术

本发明专利技术涉及一种诱导龟足腺介幼虫附着变态的方法。该方法首先按照烯虫酯：二甲基亚砜为1：35～50（w/v）的重量体积比含有烯虫酯的诱变剂并制成初始诱导海水。将腺介幼虫移入初始诱导海水中浸泡诱导18‑24h。4、18‑24h之后，每间隔18h微水流抽出三分之一的初始诱导海水，之后添加含有烯虫酯在0.5‑5mg新鲜诱导海水，如此循环，经4‑6d腺介幼虫完成附着变态。本发明专利技术配制的诱变剂应用的于腺介幼虫附着变态是一种未见报道的诱导龟足腺介幼虫附着变态的全新方法。本发明专利技术操作简单，成本低廉，作用稳定，诱导效果显著，与对照组相比，4天变态率可达64%以上，6天变态率可达71.25%以上。

A method of inducing attachment metamorphosis of glandular larva

The invention relates to a method for inducing the attachment metamorphosis of the larvae of the glandular gland of the tortoise foot. In this method, the initial induced seawater was prepared according to the weight volume ratio of Diniconazole: DMSO of 1:35-50 (w / V). The larvae were immersed in seawater for 18-24 hours. 4. After 18 \u2011 24 hours, one third of the initial induced seawater was extracted by micro water flow every 18 hours, and then 0.5 \u2011 5mg fresh induced seawater was added with dinoflagellate. After 4 \u2011 6 days of circulation, the larvae of adeno-mediated metamorphosis was completed. The mutagen prepared by the invention is applied to the attachment metamorphosis of glandular larva, which is a new method for inducing the attachment metamorphosis of glandular larva of glandula glandularis which has not been reported. The invention has the advantages of simple operation, low cost, stable effect and significant induction effect. Compared with the control group, the metamorphosis rate in 4 days can reach over 64%, and the metamorphosis rate in 6 days can reach over 71.25%.

【技术实现步骤摘要】
一种诱导龟足腺介幼虫附着变态的方法
本专利技术涉及利用烯虫酯(CAS:40596-69-8)水产养殖的
，具体涉及一种诱导龟足腺介幼虫附着变态的方法
技术介绍
龟足(CapitulummitellaLinnaeus)是一种具有较高经济价值和发展前景的海水养殖品种，隶属于节肢动物门、甲壳亚门、蔓足下纲、围胸总目、有柄目、铠茗荷亚目、指茗荷科(Pollicipidae)龟足属(Capitulum)。龟足俗称笔架、佛手、狗爪螺等，一般栖居在海浪剧烈冲击水流通畅的中、高潮区的岩石缝隙中，常见于群生簇状分布或与鳞笠藤壶、刺巨藤壶等伴生粘附于岩石或其它物体表面。由于受到栖息环境的制约，龟足种群规模较小且大小个体混杂，幼体常附着在成体柄部；采捕时均将成簇个体挖出，大量未达到食用规格的幼体也被带走，使种群资源受到极大破坏；撬砸等采挖行为也容易破坏岩礁生境，同时岩礁上的作业对采捕者而言也极具危险性。为了合理开发和保护龟足资源，有必要对龟足进行人工育苗和增养殖研究，这样，可大大减少对野生资源的采捕，控制对环境的过度开发，从而有效保护福建特色的海产品资源和海岸生态环境。指茗荷科的另一属指茗荷属(Pollicipe)具有很大的经济价值。在西班牙、葡萄牙P.polymerus和P.pollicipes更是被视为美味佳肴，作为一种巨大经济价值的渔业资源被高度开发利用，有着广阔的商业需求和很高的市场价格，目前每公斤的价格可高达200欧元。由于过度的开发利用，出于保护的需要，西班牙等国均限制其开采量。蔓足类的生活史通常要经过营浮游生活的6期无节幼体、不摄食的腺介幼虫、固着的稚体和成体几个发育阶段。腺介幼虫是蔓足类发育过程中的一个重要阶段，唯一的作用是选择适宜附着的基质并完成变态。在腺介幼虫附着变态过程中，腺介幼虫的游泳足快速划动，以规律性的“步伐”在基质表面行走，通过第一触角探测附着基质，分泌临时胶体形成足迹；如果基质条件适宜，腺介幼虫则分泌永久胶体附着，进而变态为稚体，个体进入固着生活阶段。蔓足类浮游的腺介幼虫在附着变态过程中，其形态结构及生活习性发生了剧烈变化。如果腺介幼虫不能完成附着变态，随着营养物质的耗尽，最终走向死亡。无柄蔓足类藤壶是最主要的海洋污损生物，国外以纹藤壶(Amphibalanusamphitrite)为模型生物对藤壶的附着变态机制进行了多年研究，希望能开发出干扰其附着变态的高效、绿色的防污剂。经济有柄蔓足类(指茗荷属和龟足属)与无柄蔓足类藤壶分属于不同的目，它们的形态和生活方式存在很大的差异。有柄类龟足分泌的粘胶剂借助于柄的基部固着在基质上，无柄类藤壶分泌的粘胶剂则通过整个底盘固着在基质上。无柄类藤壶在人工条件下腺介幼虫易于附着变态，而有柄类(龟足属和指茗荷属)对生态的要求特殊，在人工条件下腺介幼虫难以完成附着变态。对经济有柄蔓足类而言，腺介幼虫在室内完成附着变态是人工育苗的关键；对污损无柄蔓足类来说，干扰其附着变态是防除的关键。虽然目前实验室实现从龟足卵的人工孵化、无节幼虫的培养、最后能够大规模培养出腺介幼虫，但要实现龟足的人工育苗，必须突破在人工条件下诱导龟足腺介幼虫附着变态的难题。龟足腺介幼虫人工条件下的附着变态是在室内完成其生活史的必经过程，也是实现龟足人工育苗的核心问题，因此需要筛选出能够有效诱导龟足腺介幼虫附着变态的方法或制剂。保幼激素及类似物是最重要的一类昆虫激素,具有调控昆虫生长、发育、变态和生殖等的生理功能，同样能调控虾蟹等甲壳类的生长发育。虽然近年对保幼激素的作用分子机制进行了大量研究，但远未彻底揭示保幼激素的作用机理。由于保幼激素及类似物种类繁多，且具有多种生理调节功能；昆虫和甲壳类的种类多样，且同一物种不同的发育阶段、药物的浓度、作用的时机等都会影响激素的效应。因此，某一激素针对某一物种的作用往往是不同的。中国专利(专利号201510183853.8)公开了《一种利用保幼激素-Ⅲ诱导龟足金星幼虫附着变态的方法》。在此工作的基础上，再次筛选出以保幼激素类似物烯虫酯为主要成份的诱变剂。
技术实现思路
根据我们的研究结果，本专利技术以烯虫酯为主要作用成份配制成龟足腺介幼虫附着变态的制剂；该制剂使用方法简单，使用后腺介幼虫的变态率可达到48％以上，获得的稚体能够正常生长发育成为成体。为了实现上述目标，本专利技术采取的技术方案为：1、龟足腺介幼虫附着变态的诱变剂的配制：按照烯虫酯：二甲基亚砜为1：35～50(w/v)的重量体积比例将烯虫酯溶于二甲基亚砜中，加乙醇配制成含有烯虫酯1～1.5mg/mL的诱变剂，4℃条件下低温保存。2、使用前将诱变剂加入到海水中配制成含有烯虫酯在0.5-5mg的初始诱导海水。所述的初始诱导海水，水温为23-25℃，盐度为25-30‰，pH7.8-8.1。3、培养收集腺介幼虫，将腺介幼虫移入初始诱导海水中浸泡诱导18-24h。4、18-24h之后，每间隔18h微水流抽出三分之一的初始诱导海水，之后添加含有烯虫酯在0.5-5mg新鲜诱导海水，如此循环，经4-6d腺介幼虫完成附着变态。所述的新鲜诱导海水，水温为28-32℃，盐度为30-35‰，pH7.8-8.1。所述的微水流抽出，控制抽水时间3-6小时之内完成。所述的微水流抽出，抽取时采用100目筛网包覆抽水口，防止腺介幼虫流失。所述的烯虫酯，型号为CAS:40596-69-8，购置于试剂公司。采用本专利技术方法进行了4天诱导组合6天诱导组每组4批次的试验，并在同等试验条件实验过程下设立了4批次不含有烯虫酯诱变剂对照试验，记录龟足腺介幼虫附着变态数据如下：从上表可以看出，本专利技术设计的4天实验组4批次腺介幼虫附着变态的变态率平均数可达到56％，最高为64％，获得的稚体继续培育能够正常生长发育成为成体，而实验组变态率平均数仅为25.25％，大大低于实验组。本专利技术设计的6天实验组4批次腺介幼虫附着变态的变态率平均数可达到71.25％，最高为83％，获得的稚体继续培育能够正常生长发育成为成体，而实验组变态率平均数仅为27.25％，大大低于实验组。本专利技术已连续3年在多批次的龟足腺介幼虫中进行诱导，均达到良好的效果。本专利技术配制的诱变剂应用的于腺介幼虫附着变态、设计的分温段诱导海水、微水流技术，控制处理时间和诱导时机，是一种未见报道的诱导龟足腺介幼虫附着变态的全新方法。本专利技术操作简单，成本低廉，作用稳定，诱导效果显著，与对照组相比，4天变态率可达64％以上，6天变态率可达71.25％以上。具体实施方式以下实施例方式对本专利技术做进一步的说明。实施例11、龟足腺介幼虫附着变态的诱变剂的配制：按照烯虫酯：二甲基亚砜为1：35(w/v)的重量体积比例将烯虫酯溶于二甲基亚砜中，加乙醇配制成含有烯虫酯1mg/mL的诱变剂。2、将诱变剂加入到海水中配制成含有烯虫酯在0.5mg的初始诱导海水。本实施例所述的初始诱导海水，水温为23-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱导龟足腺介幼虫附着变态的方法，其特征是：/n1）龟足腺介幼虫附着变态的诱变剂的配制：/n按照烯虫酯：二甲基亚砜为1：35～50（w/v）的重量体积比例将烯虫酯溶于二甲基亚砜中，加乙醇配制成含有烯虫酯1～1.5mg/mL的诱变剂，4℃条件下低温保存；/n2）使用前将诱变剂加入到海水中配制成含有烯虫酯在0.5-5mg的初始诱导海水；/n3）培养收集腺介幼虫，将腺介幼虫移入初始诱导海水中浸泡诱导18-24h；/n4）18-24h之后，每间隔18h微水流抽出三分之一的初始诱导海水，之后添加含有烯虫酯在0.5-5mg新鲜诱导海水，如此循环，经4-6d腺介幼虫完成附着变态。/n

【技术特征摘要】
1.一种诱导龟足腺介幼虫附着变态的方法，其特征是：
1）龟足腺介幼虫附着变态的诱变剂的配制：
按照烯虫酯：二甲基亚砜为1：35～50（w/v）的重量体积比例将烯虫酯溶于二甲基亚砜中，加乙醇配制成含有烯虫酯1～1.5mg/mL的诱变剂，4℃条件下低温保存；
2）使用前将诱变剂加入到海水中配制成含有烯虫酯在0.5-5mg的初始诱导海水；
3）培养收集腺介幼虫，将腺介幼虫移入初始诱导海水中浸泡诱导18-24h；
4）18-24h之后，每间隔18h微水流抽出三分之一的初始诱导海水，之后添加含有烯虫酯在0.5-5mg新鲜诱导海水，如此循环，经4-6d腺介幼虫完成附着变态。


2.根据权利要求1所述的一种烯...

【专利技术属性】
技术研发人员：林岗，饶小珍，郑怡，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：福建;35