一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体‑1的免疫层析检测卡，包括试纸条，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，所述检测线上包被有一株鼠抗人sFlt‑1单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。本发明专利技术所提供的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体‑1的免疫层析检测卡，其可用于血清、血浆和全血的检测，以用于预测子痫前期相关疾病的诊断。

Immunochromatographic detection card for rapid detection of soluble vascular endothelial growth factor receptor-1 in pregnant women and its preparation

The invention relates to an immunochromatographic detection card for rapid detection of soluble vascular endothelial growth factor receptor \u2011 1 in pregnant women, which includes a test strip, including a test strip, the test strip includes a detection line and a quality control line, the detection line is covered with a mouse anti human SFLT \u2011 1 monoclonal antibody, and the quality control line is covered with a Sheep anti rabbit polyclonal antibody. The immunochromatographic detection card for fast detection of soluble vascular endothelial growth factor receptor \u2011 1 in pregnant women provided by the invention can be used for detection of serum, plasma and whole blood, so as to predict the diagnosis of preeclampsia related diseases.

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡及其制备方法
本专利技术属于体外诊断领域，涉及一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡及其制备方法。
技术介绍
VEGFR是受体酪氨酸激酶(RTK)家族成员，含有细胞外配体结合区，具有七个免疫球蛋白(Ig)样结构域，跨膜区段和细胞质结构域内的酪氨酸激酶(TK)结构域。该受体与VEGFR-A，VEGFR-B和PLGF结合，在血管生成和血管发生中起重要作用。在血管内皮细胞，胎盘滋养层细胞和外周血单核细胞中发现该受体的表达。内皮细胞表达三种不同的血管内皮生长因子(VEGF)受体，它们被命名为VEGFR-1(Flt-1)，VEGFR-2(KDR/Flk-1)，VEGFR-3(Flt-4)。已经发现了编码该基因的不同同种型的多种转录物变体。包括全长跨膜受体同种型和缩短的可溶性同种型。Flt-1胞外域剪接后形成可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)，sFlt-1保留了与PLGF、VEGF结合的高亲和力特性，能使PLGF、VEGF的酪氨酸激酶活性丧失，因此认为，sFlt-1是PLGF、VEGF的拮抗剂。sFlt-1与先兆子痫的发作有关。sFlt-1在子痫前期的发病过程中其重要作用，其高表达可降低PLGF、VEGF的表达水平，导致血管生成障碍、内皮细胞损伤，进而影响血管壁的完整性和通透性，出现蛋白尿、水肿和血液浓缩等。体内和体外实验均证实，胎盘组织缺氧后sFlt-1表达水平上升。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的主要目的在于提供一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡及其制备方法。为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，所述检测线上包被有一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述试纸条还包括PVC板，所述PVC板上固定有依次连接的样品垫、标记物垫、包被垫及吸水垫，所述包被垫上依次设有检测线及质控线，所述样品垫和标记物垫连接为一体。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述包被垫靠近检测线的一端连接有标记物垫，靠近质控线的一端连接有吸水垫。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述标记物垫上包被有另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球，所述另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球的摩尔比为1:(0.2～4)。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡还包括用于卡设试纸条的卡壳。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述卡壳包括：底槽，其连接于所述PVC板；上盖，其连接于所述底槽，所述上盖上设置有用于向所述样品垫上加样的加样孔；观察窗，其设置于上盖上并用于检测线和质控线的数据采集。一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡的制备方法，包括以下步骤：1)包被垫的制备：将一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体和羊抗兔多克隆抗体分别包被到硝酸纤维素膜上，干燥备用；2)标记物垫的制备：将另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球混合后，喷涂在玻璃纤维素膜上，干燥备用；3)组装试纸条：在PVC板上粘接包被垫，并在靠近该包被垫上的质控线的一端搭接吸水垫，在靠近该包被垫上的检测线的一端搭接标记物垫及其连接的样品垫；然后将其切成所需宽度的试纸条，之后将该试剂条放入卡壳。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述表面活化的荧光乳胶微球通过以下步骤制得：1)取表面活性剂加入0.1～0.5mol/L，pH值为8～10的硼酸-硼砂缓冲溶液(包含0.5wt％～3wt％的PEG2000)中，再加入二甲基甲酰胺、N,N’-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌反应；2)取表面带有羧基的荧光乳胶微球的分散液，以硼酸-硼砂缓冲溶液(包含0.5wt％～3wt％的PEG2000)调pH至8～10后，加入到步骤1)所得的产物中，在25℃下搅拌反应1～5h，反应完毕后，离心去除上清液，得到表面活化的荧光乳胶微球，用硼酸-硼砂缓冲溶液复溶备用。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述表面活性剂包含有N，N'-双月桂酰基乙二胺二丙烯酸钠、聚乙二醇单月硅酸酯、十二烷基苯磺酸盐和月桂酰谷氨酸盐，四者的重量比为(0.5～6):(4～9):(0.8～3):(5～14)；所述表面活性剂与所述氨基表面的荧光乳胶微球的重量比为(0.5～120):1。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球通过以下步骤制得：取表面活化的荧光乳胶微球加入碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)中室温搅拌2～6h，然后加入另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体，室温下搅拌1～4h，再加入10～50mgBSA封闭液，继续搅拌1～4h；在2～8℃下，按照11000r/min的转速离心30min，除去上清液；最后，用0.01M～0.5M的磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.4)将固体沉淀物复溶，再加入Proclin300在4℃下保存待用。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述表面活化的荧光乳胶微球与另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体的质量比例为1：(0.01～4)。本专利技术的有益效果：1、本专利技术所提供的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其可用于血清、血浆和全血的检测，以用于预测子痫前期相关疾病的诊断；2、本专利技术所提供的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其样本用量小，检测在5～20min之内即可完成，线性检测范围为10pg/mL～10000pg/mL，极大地提高了检测效率；3、本专利技术所提供的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其灵敏度高、稳定性强、线性范围宽，具有优异的准确性和精密度；4、本专利技术所提供的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，在样本采集后，无需长时间等待，即可进行样本检测，操作简单，样本处理时间短，降低了时间成本，适用于临床快速诊断检测；5、本专利技术所提供的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其通过采用表面活化的荧光乳胶微球，克服了市面上荧光染料灵敏度差和湿式荧光微球稳定性差的缺陷，能够保证颗粒间的相对距离不易团聚，无需缓冲液，加入待测样本后能即刻复溶并顺利层析。附图说明图1为本专利技术所提供的快速检测孕妇sFlt-1的免疫层析试纸条示意图；图2A为本专利技术所提供的快速检测孕妇sFlt-1的免疫层析检测卡中一种上盖的内部结构本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，其特征在于，所述检测线上包被有一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，其特征在于，所述检测线上包被有一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。


2.如权利要求1所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其特征在于，所述试纸条还包括PVC板，所述PVC板上固定有依次连接的样品垫、标记物垫、包被垫及吸水垫，所述包被垫上依次设有检测线及质控线，所述样品垫和标记物垫连接为一体。


3.如权利要求2所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其特征在于，所述包被垫靠近检测线的一端连接有标记物垫，靠近质控线的一端连接有吸水垫。


4.如权利要求3所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其特征在于，所述标记物垫上包被有另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球，所述另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球的摩尔比为1:0.2～4。


5.如权利要求4所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其特征在于，所述快速检测可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡还包括用于卡设试纸条的卡壳。


6.如权利要求5所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其特征在于，所述卡壳包括：
底槽，其连接于所述PVC板；
上盖，其连接于所述底槽，所述上盖上设置有用于向所述样品垫上加样的加样孔；
观察窗，其设置于上盖上并用于检测线和质控线的数据采集。


7.一种权利要求1-6任一项所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)包被垫的制备：将一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体和羊抗兔多克隆抗体分别包被到硝酸纤维素膜上，干燥备用；
2)标记物垫的制备：将另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体标记的表...

【专利技术属性】
技术研发人员：林斯，张衡，韩艳华，
申请(专利权)人：天津华科泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12