一种裸花紫珠药效标准提取物及其制备方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及一种裸花紫珠药效标准提取物及其制备方法。这种裸花紫珠药效标准提取物总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分含量在92％～98％，其中苯丙烯酸类：黄酮类化合物百分含量比值为70±5％：30±10％；苯丙烯酸类：黄酮类化合物数目比值为25～35：8～16。裸花紫珠药效标准提取物的制备方法的步骤依次为用乙醇溶液回流提取、苯乙烯型非极性吸附树脂纯化、乙酸乙酯萃取、制备HPLC分离、真空干燥。本发明专利技术的有益效果：本发明专利技术解决裸花紫珠制剂质量的稳定性和一致性差的问题，制备的裸花紫珠叶药效标准提取物不仅总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分含量高，而且其中的苯丙烯酸类，黄酮类化合物的百分含量比值和化合物数目比值都较稳定。裸花紫珠叶药效标准提取物还具有显著的抗菌、消炎和止血的药效作用。

A pharmacodynamic standard extract of gymnospermum and its preparation method

The invention belongs to the technical field of medicine, in particular to a naked flower Purple Pearl efficacy standard extract and a preparation method thereof. The content of total phenylacrylic acid in the extract of the pharmacodynamic standard of this kind of naked flower purple pearl is 92% - 98%. The ratio of percentage content of phenylacrylic acid: flavonoid is 70 \u00b1 5%: 30 \u00b1 10%; the ratio of number of phenylacrylic acid: flavonoid is 25-35:8-16. The steps of the preparation method of the pharmacodynamic standard extract of nudiflora are as follows: reflux extraction with ethanol solution, purification with styrene type non-polar adsorption resin, extraction with ethyl acetate, preparation of HPLC separation and vacuum drying. Beneficial effect of the invention: the invention solves the problem of poor stability and consistency of the quality of the preparation of Rhododendron nudiflora leaves. The prepared standard extract of the effect of Rhododendron nudiflora leaves not only has high content of total phenylacrylic acid and flavonoid active components, but also has stable ratio of percentage content and number of compounds of phenylacrylic acid and flavonoid compounds. In addition, the extract of the pharmacodynamic standard of gymnospermum leaf also has significant antibacterial, anti-inflammatory and hemostatic effects.

【技术实现步骤摘要】
一种裸花紫珠药效标准提取物及其制备方法
本专利技术属于医药
，具体涉及一种裸花紫珠药效标准提取物及其制备方法。
技术介绍
中药标准提取物是基于改善由中药原料药材质量不稳定带来的诸多中药产品质量问题所提出的一种解决途径，将中药和天然产品的内在差异减到最低水平。中药标准提取物采用现代技术，对传统中药材进行提取加工而得到的一种具有相对明确药效物质基础、严格质量标准的中药产品，可作为中药制剂的原料药。中药药效标准提取物明确药效物质基础，反映原中药材的特定功效持点，且制备工艺稳定、质量可控。中药药效标准提取物保证了中药/植物次生代谢化学组份的稳定和药效药理学的稳定性，更重要的是保证了临床疗效稳定一致。中药/植物药药效标准提取物着眼于全过程的药效物质基础的特有、差异、动态变化和质量的传递性、溯源性，有利于建立中药/植物药全程质量控制及质量溯源体系，像化学原料药和中间体一样，形成中药/植物药原料标准提取物产业，通过这种专业化分工，有利于提高中药/植物药生产经营的规范化和集约化水平。中药药效标准提取物的产生和发展，是中药走向国际市场的需要，是中药现代化和培育新兴产业的需要。裸花紫珠药材是马鞭草科紫珠属裸花紫珠的干燥叶和带叶的嫩枝，是一种常用的海南传统民族药材，因主要生长在海南黎族地区，也被称为黎药。裸花紫珠化学成分主要有苯丙素类、黄酮类、三萜类、二萜类、环烯醚萜类、酚酸类及其苷和甾醇等，具有抗菌止血、消炎解毒、散瘀消肿、祛风祛湿功效、跌打肿痛、风湿肿痛、肺结核咳血、胃肠出血等症。据文献报道，苯丙素苷类和酚苷类成分可能是裸花紫珠止血作用的主要活性成分。其中苯丙素类毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷和连翘酯苷B具有抗炎、抗菌作用；毛蕊花糖苷影响RBL-2H3肥大细胞释放组胺和花生四烯酸，通过阻断AP-1激活抑制脂多糖诱导的一氧化氮合酶的表达，具有抗氧化和抗炎活性；毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷发挥抗炎作用于抑制人血管内皮细胞的ERK和JNK下调IL-1β诱导的细胞粘附分子；异毛蕊花糖苷、毛蕊花糖苷抑制5-脂氧合酶作用，可作为抗过敏、抗炎剂；毛蕊花糖苷、连翘酯苷B抑制对环氧合酶的催化前列腺素生物合成的活性作用；连翘酯苷B通过调节炎性因子预防实验败血症。裸花紫珠总黄酮对表皮伤口易感染菌具有抑菌作用，能明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，具有良好的抗炎作用；从裸花紫珠提取到的5-羟基-3,7,3′,4′-四甲氧基黄酮并发现其具有抗炎作用。已知裸花紫珠中苯丙素类成分的结构均系苯丙烯酸与糖缩合的苷或游离苯丙烯酸咖啡酸与阿魏酸，此外已知裸花紫珠中环烯醚萜类成分的结构其中有半数以上为苯丙烯酸的衍生物。苯丙烯酸类是主治各种炎症、出血和抗菌活性成分，黄酮类为抗炎和抗菌活性成分。裸花紫珠颗粒、裸花紫珠片、裸花紫珠栓、裸花紫珠软胶囊、裸花紫珠分散片五个剂型现有12个药业企业在生产，质量的稳定性和一致性堪忧，本领域亟需一种裸花紫珠药效标准提取物来改善由中药原料药材质量不稳定带来的诸多中药产品质量问题，以保证临床疗效稳定一致。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了解决裸花紫珠制剂质量的稳定性和一致性差，而提供了一种裸花紫珠药效标准提取物及其制备方法。本专利技术提供了一种裸花紫珠药效标准提取物，所述的裸花紫珠药效标准提取物主要由苯丙烯酸衍生物和黄酮类法成分组成，其中总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分含量在92％～98％，苯丙烯酸类：黄酮类化合物百分含量比值为70±5％：30±10％；苯丙烯酸类：黄酮类化合物数目比值为25～35：8～16。一种裸花紫珠药效标准提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)将裸花紫珠药材粉末，用8～20倍量的10％～90％的乙醇水溶液混合，热回流提取次数1～4次，每次提取0.5h～2h，所得提取液合并；(2)合并后的提取液用苯乙烯型非极性吸附树脂纯化，上样量为总苯丙烯酸类、黄酮类5～15mg/g(干树脂)，上样浓度总苯丙烯酸类、黄酮类1～4mg/ml，吸附流速为2～5bv/h，洗脱量为2～5bv/h，洗脱浓度5～95％乙醇，得大孔树脂分离纯化提取物，其中总苯丙烯酸类，黄酮类纯度大于60％；(3)大孔树脂分离纯化后提取物再经水饱和乙酸乙酯萃取1～3次，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物，其中总苯丙烯酸类，黄酮类纯度达到80％以上；(4)乙酸乙酯萃取物再经制备HPLC分离，除去小分子量的大极性成分和极性小的萜类成分，制备HPLC色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，其规格为外径10mm～300mm×柱长250mm～1500mm，填料粒径5μm～50μm，流动相体系甲醇～甲酸水溶液、甲醇～乙酸水溶液、甲醇～磷酸水溶液、乙腈～甲酸水溶液、乙腈～乙酸水溶液、乙腈～磷酸水溶液，梯度洗脱，采用DAD检测器检测，210nm和250～350nm双波长检测，收集总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分洗脱液；(5)总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分洗脱液，减压回收溶剂，65℃真空干燥，得到裸花紫珠叶药效标准提取物，总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分含量在92％～98％。优选的，一种裸花紫珠药效标准提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)将裸花紫珠药材粉末，用10～12倍量的60％～90％的乙醇水溶液混合，热回流提取次数3次，每次提取1h，所得提取液合并；(2)合并后的提取液用AB-8树脂纯化，上样量为总苯丙烯酸类、黄酮类10mg/g(干树脂)，上样浓度总苯丙烯酸类、黄酮类2.942mg/ml，吸附流速为3bv/h，洗脱量为3bv/h，洗脱浓度80％乙醇，得大孔树脂分离纯化提取物，其中总苯丙烯酸类，黄酮类纯度大于60％；(3)大孔树脂分离纯化后提取物再经水饱和乙酸乙酯萃取1～3次，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物中总苯丙烯酸类，黄酮类纯度达到80％以上；(4)乙酸乙酯萃取物再经制备HPLC分离，除去小分子量的大极性成分和极性小的萜类成分，制备HPLC色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，其规格为外径10mm～300mm×柱长250mm～1500mm，填料粒径5μm～50μm，流动相体系甲醇～甲酸水溶液、甲醇～乙酸水溶液、甲醇～磷酸水溶液、乙腈～甲酸水溶液、乙腈～乙酸水溶液、乙腈～磷酸水溶液，梯度洗脱，采用DAD检测器检测，210nm和250～350nm双波长检测，收集总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分洗脱液；(5)总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分洗脱液，减压回收溶剂，65℃真空干燥，得到裸花紫珠叶药效标准提取物。本专利技术中样品检测采用的色谱条件为：Agilent1200型高效液相色谱仪，色谱柱XtimateC18，其规格为外径4.6mm×柱长250mm，填料直径5μm。所用到的流动相A相为纯乙腈，B相为0.1％磷酸水溶液。梯度洗脱，流速为0.8ml/min，检测波长为254nm，柱温为室温，进样量5μL。梯度洗脱程序如下所示：本专利技术的积极进步效果在于：本专利技术解决裸花紫珠制剂质量的稳定性和一致性差的问题，制备的裸花紫珠叶药效标准提取物不仅总苯丙烯酸类，黄酮本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种裸花紫珠药效标准提取物，其特征在于总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分含量在92％～98％，其中苯丙烯酸类：黄酮类化合物百分含量比值为70±5％：30±10％；苯丙烯酸类：黄酮类化合物数目比值为25～35：8～16。/n

【技术特征摘要】
1.一种裸花紫珠药效标准提取物，其特征在于总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分含量在92％～98％，其中苯丙烯酸类：黄酮类化合物百分含量比值为70±5％：30±10％；苯丙烯酸类：黄酮类化合物数目比值为25～35：8～16。


2.根据权利要求1所述的一种裸花紫珠药效标准提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将裸花紫珠药材粉末，用8～20倍量的10％～90％的乙醇水溶液混合，热回流提取次数1～4次，每次提取0.5h～2h，所得提取液合并；
(2)合并后的提取液用苯乙烯型非极性吸附树脂纯化，上样量为每1g干树脂上样总苯丙烯酸类、黄酮类5～15mg/g，上样浓度总苯丙烯酸类、黄酮类1～4mg/ml，吸附流速为2～5bv/h，洗脱量为2～5bv/h，洗脱浓度5～95％乙醇，得大孔树脂分离纯化提取物；
(3)大孔树脂分离纯化后提取物再经水饱和乙酸乙酯萃取1～3次，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物；
(4)乙酸乙酯萃取物再经制备HPLC分离，除去小分子量的大极性成分和极性小的萜类成分，制备HPLC色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，其规格为外径10mm～300mm×柱长250mm～1500mm，填料粒径5μm～50μm，流动相体系为甲醇～甲酸水溶液或甲醇～乙酸水溶液或甲醇～磷酸水溶液或乙腈～甲酸水溶液或乙腈～乙酸水溶液或乙腈～磷酸水溶液，梯度洗脱，采用DAD检测器检测，210nm和250～350nm双波长检测，收集总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分洗脱液；
(5)总苯丙烯酸类，黄酮类活性成分洗脱液，减压回收溶剂，65℃真空干燥，得到裸花紫珠叶药效标准提取物。
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨扬，陈梁，杨义芳，李小锋，邓杰仁，康兴东，章弘扬，刘厚权，任昭洁，张俊英，
申请(专利权)人：江西普正制药股份有限公司，上海药辰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36