一种哲罗鲑三倍体苗种的制备方法技术

本发明专利技术提供一种哲罗鲑三倍体苗种的制备方法，包括三倍体热休克诱导，在二倍体受精卵受精后15min，将该受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入26‑27℃水浴中热处理15min；再放入17℃水浴中过渡1min；受精卵孵化，将经所述三倍体热休克诱导的受精卵置于7‑9℃孵化水温的容器中进行孵化。该方法30‑40天可得到哲罗鲑三倍体仔鱼，孵化期间受精卵发眼率为80％以上，孵化率70％以上，三倍体率达到90％以上。本发明专利技术方法有效缓解了由于性成熟后生长速度降低、肥满度降低、亲鱼繁殖后死亡率高等问题，提高了抗病力，适于生产制作生鱼片的大规格鱼，具有成本低，易操作等优点，具有较好的市场价值。

A preparation method of triploid seedlings of zhelo salmon

The invention provides a preparation method of triploid seedlings of zhelo salmon, which includes triploid heat shock induction, 15 minutes after fertilization of diploid fertilized egg, putting the fertilized egg in a 17 \u2103 water bath for 1 minute transition, then putting it in a 26 \u2011 27 \u2103 water bath for 15 minutes heat treatment, then putting it in a 17 \u2103 water bath for 1 minute transition, hatching the fertilized egg, hatching the fertilized egg induced by the triploid heat shock at 7 \u2011 9 \u2103 Incubation is carried out in a container with water temperature. During the hatching period, the hatching rate of fertilized eggs was more than 80%, the hatching rate was more than 70%, and the triploid rate was more than 90%. The method of the invention effectively alleviates the problems of low growth speed after sexual maturity, low degree of plumpness and high mortality after parent fish reproduction, improves the disease resistance, is suitable for producing large-scale fish slices, has the advantages of low cost, easy operation, etc., and has better market value.

【技术实现步骤摘要】
一种哲罗鲑三倍体苗种的制备方法
本专利技术涉及哲罗鲑育种
，具体涉及一种哲罗鲑三倍体苗种的制备方法。
技术介绍
哲罗鲑(Huchotaimen)又名哲罗鱼，属鲑形目，鲑科，哲罗鱼属，是世界名贵濒危冷水性鱼类，主要分布在亚洲北部地区，在我国主要分布于东北部的黑龙江、鸭绿江、图们江和新疆的额尔齐斯河等水域，目前野外种群数量极为稀少，具有重要的保护和经济价值。哲罗鲑亲鱼有埋卵和护巢的习性，产卵后亲鱼大量死亡，尤以雄鱼为更多。由于性情凶猛，雌雄性别特征不明显，人工繁殖技术较难掌握。养殖大规格三倍体哲罗鲑，可以提高鱼肉比率，适于加工生鱼片，并缓解了性腺发育成熟后亲鱼产后死亡的问题。哲罗鲑三倍体诱导技术国内外尚未见报道。
技术实现思路
由于长期以来哲罗鲑受精卵的死亡率较高，且难以提高发眼率、孵化率和三倍体率。在大量实验研究的基础上，本专利技术的专利技术人意外的发现，在优化哲罗鲑二倍体受精卵的热处理时间及温度的情况下，进一步将经热处理15min后的受精卵再放入17℃水浴中过渡1min，能够显著地降低受精卵的死亡率，并且还提高了发眼率、孵化率和三倍体率。具体而言，本专利技术提供一种哲罗鲑三倍体苗种的制备方法，包括：三倍体热休克诱导的步骤，该步骤包括在二倍体受精卵受精后15min，将该受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入26-27℃水浴中热处理15min；再放入17℃水浴中过渡1min；以及受精卵孵化的步骤，该步骤包括将经所述三倍体热休克诱导的受精卵置于7-9℃孵化水温的容器中进行孵化。较佳地，所述三倍体热休克诱导的步骤包括在二倍体受精卵受精后15min，将该受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入26.5℃水浴中热处理15min；再放入17℃水浴中过渡1min。实验发现，采用该诱导方法可使受精卵2h死亡率下降至3.6％以下，发眼率提高至81％，孵化率提高至72％，三倍体率提高至91％，综合评分达85分。具体地，所述三倍体热休克诱导的步骤详述如下：受精后15min，将受精卵放入直径15cm的不锈钢吊漏中，先在水温17℃的水浴锅中过渡1min，再放入26-27℃(优选26.5℃)的电子恒温水槽中，轻轻上下晃动漏网，使受精卵尽快与周围水温相一致。热处理15min后将受精卵先在水温17℃的水浴锅中过渡1min，再放入7-9℃孵化水温的容器中静置，2h检出死卵，统计死亡率，再放入7-9℃孵化水温的容器中，进入正常孵化。不锈钢吊漏为上盖封闭的厨房用具卤水蓝，四周均匀分布直径2mm的充孔，要求内壁光滑。水浴锅为实验室常规加热容器，控温范围1-99℃，误差≦0.5℃，灵敏度0.2℃。电子恒温水槽设有循环泵，使水体流动，控制温度范围5-99℃，误差≦0.5℃，灵敏度0.1℃。温度设定时用高精度温度计校准。当水温低于26.5℃，处理时间少于20min的情况下，受精卵热休克处理前后，在17℃水中过渡1min，可减少温差过大对卵的刺激，2h死亡率可以控制在5％以下。受精后15min，在26.5℃水浴中热处理15min，三倍体率可达91％。进一步地，本专利技术可采用孵化桶+平列槽结合的受精卵孵化方法，受精卵发眼前用孵化桶孵化，发眼后移入到平列槽。具体地，受精卵孵化方法详述如下：可采用虹鳟常规孵化方法。受精卵发眼前用孵化桶孵化，发眼后移入到平列槽。孵化桶为市售无毒塑料桶，内部装置参见虹鳟鱼孵化桶，规格10L桶装卵4-5万粒。平列槽为食品级树脂材料制作，外侧大槽规格为300cm×45cm×27cm，内部配套5个小槽，小槽底部和出水侧面为孔径2mm微孔板，具体结构参照虹鳟鱼孵化。孵化期控制水温7-10℃，溶解氧＞6mg/L。发眼前每周用50ppm甲醛流水消毒1h。整个孵化期积温需要260-280度·日，孵化期大约30-40天。孵化期用蓄水箱调节水温在7-10℃，避免水温浮动过大。定期用甲醛药物消毒，控制水霉菌滋生，孵化率可达70％以上。进一步地，本专利技术提供的哲罗鲑三倍体苗种的制备方法，还包括在受精后2h剔除死卵，然后再进行孵化。由于热处理对卵有一定的伤害，2h死亡率是检验诱导温度的重要指标。另外，若不赐除死卵直接孵化，则会因死卵滋生水霉而影响正常卵的孵化，降低孵化率。进一步地，本专利技术提供的哲罗鲑三倍体苗种的制备方法，还包括亲鱼培育的步骤。该步骤通过建立营养强化和温度刺激为主的生殖调控体系，可以促进亲鱼在人工条件下性腺发育成熟。具体地，所述亲鱼培育的步骤详述如下：亲鱼越冬前一个生长季节就进行亲鱼挑选和培育。培育水温要求在14～17℃，水中溶解氧要求在6mg/L以上，每天按1.5％投饵率投喂鲑鳟鱼亲鱼专用饲料(饲料中蛋白质含量应高于40％，10种必需氨基酸应保持平衡)，每10天按5％～8％投饵率投喂一次鲜活鱼饵。冬季在2-4℃水温条件下越冬至少60天以上，越冬期间每两天按0.3％投饵率投喂亲鱼饲料，每10天按5％投饵率投喂一次鲜活鱼饵。春季水温升到6～7℃，水中溶解氧要求在8mg/L以上，每天按0.5％投饵率投喂亲鱼饲料，每天按3％～5％投饵率投喂一次鲜活鱼饵，进行产卵前的强化培育，20天左右就可以进行人工繁殖。为促进性腺发育和控制集中产量，用不同温度的地下水或山泉水进行勾兑，调节水温。亲鱼培育需在流水条件下进行。亲鱼年龄：雌鱼6+龄以上，雄鱼5+龄以上；亲鱼规格：雄亲鱼3000g以上，雌亲鱼3500g以上。雌雄鱼数量配比1:1。进一步地，本专利技术提供的哲罗鲑三倍体苗种的制备方法，还包括获得二倍体受精卵的步骤。本专利技术将性腺发育成熟的亲鱼经注射人工激素催产，干法受精获得普通二倍体受精卵。由于哲罗鲑亲鱼可能存在性腺发育不同步的现象，常规方法采取的单次药物催产效果不理想。为解决该问题，本专利技术调整催产方法，改为采用两次药物催产，通过第一次低剂量的催熟使雌雄亲鱼性腺发育趋于同步。另外，由于哲罗鲑亲鱼体型较大，人工催产过程中不宜掌控。本专利技术在采卵时采用0.03％乙二醇苯醚对亲鱼进行麻醉。与常规方法相比，本专利技术方法减少了亲鱼在挤卵过程中的应激反应，不仅提高了亲鱼产后存活率，而且降低了人工挤卵对卵的损伤。与常规方法精卵混合操作不同的是，本专利技术滤掉采卵产生的体腔液(例如用漏网)，并进一步控制雌雄比为1:3受精，这样可以显著地提高受精率。为了进一步延长精子持续活力时间，本专利技术还配制了0.6％的NaCl稀释液，在授精过程中将哲罗鲑精液置于该稀释液中在室温下暂时保存，这样短时间内可以减少精子能量损失，不会影响其活力，这对于提高受精率十分必要。具体地，所述获得二倍体受精卵的步骤详述如下：人工催产，催产剂为鱼用促排卵素2号(LHRH-A2)和马来酸地欧酮(DOM)。采用胸鳍基部2次注射法，第1次注射时间为产前1个月，水温6℃，雌鱼注射LHRH-A2，剂量1ug/kg，起到催熟作用；第2次注射，雌鱼LHRH-A25ug/kg+DOM5mg/kg；雄鱼剂量减半。激素剂量视性腺发育程度和水温适当调整。效应期7-10天。采卵时用0.03％本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种哲罗鲑三倍体苗种的制备方法，其特征在于，包括：/n三倍体热休克诱导的步骤，包括在二倍体受精卵受精后15min，将该受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入26-27℃水浴中热处理15min；再放入17℃水浴中过渡1min；以及/n受精卵孵化的步骤，包括将经所述三倍体热休克诱导的受精卵置于7-9℃孵化水温的容器中进行孵化。/n

【技术特征摘要】
1.一种哲罗鲑三倍体苗种的制备方法，其特征在于，包括：
三倍体热休克诱导的步骤，包括在二倍体受精卵受精后15min，将该受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入26-27℃水浴中热处理15min；再放入17℃水浴中过渡1min；以及
受精卵孵化的步骤，包括将经所述三倍体热休克诱导的受精卵置于7-9℃孵化水温的容器中进行孵化。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述三倍体热休克诱导的步骤包括在二倍体受精卵受精后15min，将该受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入26.5℃水浴中热处理15min；再放入17℃水浴中过渡1min；或者，
所述三倍体热休克诱导的步骤包括在二倍体受精卵受精后15min，将该受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入26℃水浴中热处理15min；再放入17℃水浴中过渡1min；或者，
所述三倍体热休克诱导的步骤包括在二倍体受精卵受精后15min，将该受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入27℃水浴中热处理15min；再放入17℃水浴中过渡1min。


3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，还包括在受精后2h剔除死卵，然后再进行孵化。


4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，还包括亲鱼培育的步骤；其中，所述培育的水温要求在14～17℃，水中溶解氧要求在6mg/L以上，每天按1.5％投饵率投喂鲑鳟鱼亲鱼专用饲料，每10天按5％～8％投饵率投喂一次鲜活鱼饵；冬季在2-4℃水温条件下越冬至少60天以上，越冬期间每两天按0.3％投饵率投喂亲鱼饲料，每10天按5％投饵率投喂一次鲜活鱼...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏凯，陈春山，马龙，耿琰，郑伟，
申请(专利权)人：北京市水生野生动植物救护中心，
类型：发明
国别省市：北京;11