包含免疫调控剂和阳离子脂质体的免疫增强的组合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及免疫增强的组合物，该免疫增强的组合物包含具有新颖结构的免疫应答调节剂，且更具体地，涉及免疫增强的组合物及其用途，其中该免疫增强的组合物包含具有降低的毒性的脂多糖(LPS)类似物，和阳离子脂质体。本发明专利技术克服脂质体的物理化学不稳定性，在产生、转运、和贮存方面是有利的，且提高稳定性，因此作为免疫递送系统是有益的。此外，本发明专利技术包含抗原、免疫应答调节剂、和阳离子脂质体，且因此与仅使用免疫应答调节剂的情况相比，表现出增强的免疫提高的作用。

Immunoenhancer composition containing immunomodulator and cationic liposome and its application

The invention relates to an immune enhancing composition comprising an immune response modulator with novel structure, and more specifically, an immune enhancing composition and its use, wherein the immune enhancing composition comprises a lipopolysaccharide (LPS) analogue with reduced toxicity, and a cationic liposome. The invention overcomes the physical and chemical instability of the liposome, is advantageous in the production, transportation and storage, and improves the stability, so it is beneficial as an immune delivery system. In addition, the present invention includes antigens, immune response modulators, and cationic liposomes, and therefore shows an enhanced immune enhancement effect compared with the case where only immune response modulators are used.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含免疫调控剂和阳离子脂质体的免疫增强的组合物及其用途
本专利技术涉及用于增强免疫的组合物，该组合物包含具有新颖结构的免疫调节剂。更具体地，本专利技术涉及用于增强免疫的组合物及其用途，该组合物包含具有降低的毒性的脂多糖(LPS)的类似物和阳离子脂质体。专利技术背景脂质体具有表现出极好的生物相容性、易于制造、且能够递送水溶性和脂溶性药物的优势，且因此已经积极地对如在体内具有较少副作用的药物递送系统的脂质体进行了研究。当脂质体在水溶液中作为分散相贮存时，因为其系统本身是物理和化学不稳定的，所以常见的脂质体具有导致磷脂的聚集、融合、水解，包封的药物的氧化、渗漏等的缺点。因此，当脂质体贮存很长时间时，脂质体本身的稳定性的缺点需要经确保。为了克服这些缺点，已经积极地进行了研究以通过以细粉形式贮存脂质体以试图克服脂质体的物理化学不稳定性来提高脂质体的稳定性。然而，使用冻干过程以将脂质体转换为细粉。在此类过程中，当仅使用脂质体时，脂质体的稳定性和均质性恶化，且其物理和化学特性因此而变化。结果，不利地，脂质体作为药物递送和其免疫活性的功能恶化，且毒性出现。因此，正在对有利于生产、贮存、和递送的组合物进行研究，同时通过添加冷冻保护剂等以在冷冻干燥期间防止脂质体的变性来最大化脂质体的优点。脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌的外膜的主要组分，且促进各种免疫细胞的活化，特别是固有免疫应答。LPS通过分泌细胞因子，表达共刺激分子和诱导抗原递呈而活化抗原递呈细胞，且它使固有免疫应答与适应性免疫应答关联(AkiraS,UematsuS,TakeuchiO,Cell124:783-801(2006)；SchnareM,BartonGM,HoltAC,TakedaK,AkiraS等NatImmunol2:947-950(2001))。LPS由三个域组成，即两亲性域(脂质A)、核心寡糖(OS)、和O-抗原(或O-抗原性多糖)。已知脂质A在LPS的内毒素活性中起作用且通过各种类型的免疫细胞的TLR4(toll样受体4)信号传导表现出免疫刺激性作用(RaetzCR,WhitfieldC,AnnuRevBiochem71:635-700(2002))。已经靶向表现出降低的毒性的脂质A衍生物用于开发人疫苗免疫佐剂。单磷酰脂质A(MPL)是从明尼苏达沙门氏菌(Salmonellaminnesota)粗菌株中分离的LPS的无毒性衍生物。此外，铝盐和MPL的组合已被批准作为用于抗HBV(乙型肝炎病毒)和HPV(人乳头瘤病毒)的疫苗的免疫佐剂。自20世纪50年代以来，已知LPS具有抗癌作用，但由于毒性能够导致因败血症而死亡(即使在纳克(ng)水平的污染的情况下)，其尚未适合使用。因此，已经稳步地进行了研究以降低LPS的毒性且已经成功地降低了LPS的毒性，特别是通过去除多糖链或脂质A的脱酰作用(KatzSS等,JBiolChem.Dec17；274(51):36579-841999)。特别地，通过去除LPS的多糖链获得的，通过脂质A的磷酸化作用获得的MPL已经开发为无LPS毒性的免疫抗癌药剂，但已知其作用是不足的。作为努力开发能够表现出极好的免疫刺激活性同时降低毒性(其已经是通过使用常规LPS引起的问题)的LPS类似物，且克服脂质体的物理和化学不稳定性的结果，本专利技术人发现了具有降低的毒性的具有新颖结构的EG-免疫调节剂(EG-IM)，该降低的毒性通过分离和纯化来自从人肠中发现的大肠杆菌(E.coli)菌株的不具有O-抗原位点的LOS，并使其脱酰而获得，且鉴定出含有该免疫调节剂和阳离子脂质体的疫苗组合物表现出极好的免疫刺激活性。基于该发现，已经完成了本专利技术。技术问题因此，本专利技术的一个目的是提供用于增强免疫的组合物，该组合物包含：(a)由下式1表示的免疫调节剂；和(b)阳离子脂质体：式1其中Glc是葡萄糖，GlcN是葡糖胺，HEP是庚糖，KDO是2-酮-3-脱氧-辛酸，GlcNAc是N-乙酰葡糖胺，且A至F是磷酸盐可结合的位置。本专利技术的另一目的是提供疫苗组合物，该疫苗组合物包含(a)抗原和(b)作为活性成分的用于增强免疫的组合物。本专利技术的另一目的是提供用于制备用于增强免疫的组合物的方法，该方法包括：(a)制备含有由式1表示的免疫调节剂的溶液：(b)在有机溶剂中溶解脂质以制备脂质混合的溶液；(c)使步骤(b)的脂质混合的溶液冻干以去除该有机溶剂；且(d)使在步骤(c)中获得的物质再水合，然后使该物质与步骤(a)的溶液混合，从而形成用于增强免疫的组合物。本专利技术的另一目的是提供用于制备疫苗组合物的方法，该方法包括：(a)制备含有由式1表示的免疫调节剂的溶液；(b)在有机溶剂中溶解脂质以制备脂质混合的溶液；(c)使步骤(b)的脂质混合的溶液冻干以去除该有机溶剂；(d)使在步骤(c)中获得的物质再水合，从而形成脂质体；且(e)添加步骤(a)的溶液和抗原至步骤(d)的脂质体，随后再次冻干。技术方案为了实现上述目的，本专利技术提供了用于增强免疫的组合物，该组合物包含：(a)由下列式1表示的免疫调节剂；和(b)阳离子脂质体：式1其中Glc是葡萄糖，GlcN是葡糖胺，HEP是庚糖，KDO是2-酮-3-脱氧-辛酸，GlcNAc是N-乙酰葡糖胺，且A至F是磷酸盐可结合的位置。本专利技术还提供疫苗组合物，该疫苗组合物包含：(a)抗原和(b)作为活性成分的用于增强免疫的组合物。本专利技术还提供用于制备用于增强免疫的组合物的方，该方法包括：(a)制备含有由式1表示的免疫调节剂的溶液；(b)在有机溶剂中溶解脂质以制备脂质混合的溶液；(c)使步骤(b)的脂质混合的溶液冻干以去除该有机溶剂；且(d)使在步骤(c)中获得的物质再水合，然后使该物质与步骤(a)的溶液混合，从而形成用于增强免疫的组合物。本专利技术还提供用于制备疫苗组合物的方法，该方法包括：(a)制备含有由式1表示的免疫调节剂的溶液；(b)在有机溶剂中溶解脂质以制备脂质混合的溶液；(c)使步骤(b)的脂质混合的溶液冻干以去除该有机溶剂；(d)使在步骤(c)中获得的物质再水合，从而形成脂质体；且(e)添加步骤(a)的溶液和抗原至步骤(d)的脂质体，随后再次冻干。本专利技术还提供用于预防免疫疾病的方法，该方法包括用由式1表示的免疫调节剂治疗患者，和该免疫调节剂用于预防免疫疾病的用途。附图简述图1A显示通过电泳和银染鉴定经提取的LOS的结果，且图1B显示指示EG-IM的大小降低的结果，基于当用碱处理LOS时通过降解脂质A提取的LOS，其中M表示标记物，泳道1表示脱酰作用前的LOS，且泳道2表示免疫调节剂(EG-IM)。图2显示根据本专利技术的EG-免疫调节剂(EG-IM)的结构，其中Glc是葡萄糖，GlcN是葡糖胺，HEP是庚糖，KDO是2-酮-3-脱氧-辛酸，GlcNAc是N-乙酰葡糖胺，且A至F是磷酸可结合的位置。图3是显示脂质溶解步骤中脂质体大小分布的图表，且图4是显示使糖脂和脂质体简单地混合的步本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于增强免疫的组合物，其包含：/n(a)由下列式1表示的免疫调节剂：/n式1/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20161031 KR 10-2016-0142703;20170824 KR 10-2017-011.一种用于增强免疫的组合物，其包含：
(a)由下列式1表示的免疫调节剂：
式1



其中Glc是葡萄糖，GlcN是葡糖胺，HEP是庚糖，KDO是2-酮-3-脱氧-辛酸，GlcNAc是N-乙酰葡糖胺，且A至F是磷酸盐可结合的位置；和
(b)阳离子脂质体。


2.根据权利要求1的组合物，其中每个磷酸盐在选自下组的位置处结合：式1的AB、AC、AD、AE、AF、BC、BD、BE、BF、CD、CE、CF、DE、DF、EF、ABC、ABD、ABE、ABF、ACD、ACE、ACF、ADE、ADF、AEF、BCD、BCE、BCF、BDE、BDF、BEF、CDE、CDF、CEF、DEF、ABCD、ABCE、ABCF、ABDE、ABDF、ABEF、ACDE、ACDF、ADEF、BCDE、BCDF、BCEF、BDEF、CDEF、ABCDE、ABCEF和ABCDEF。


3.根据权利要求1的组合物，其中该阳离子脂质体是选自下组的阳离子脂质体：二甲基双二十八烷基溴化铵(DDA)、1,2-二油酰基-3-三甲胺丙烷(DOTAP)、3β-[N-(N′,N′-二甲基胺乙基)氨基甲酰基]胆固醇(DC-Chol)、1,2-二油酰基氧基-3-二甲胺丙烷(DODAP)、1,2-二-O-十八烯基-3-三甲胺丙烷(DOTMA)、1,2-二肉豆蔻烯酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(14:1乙基PC)、1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(16:0-18:1乙基PC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(18:1乙基PC)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(18:0乙基PC)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(16:0乙基PC)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(14:0乙基PC)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(12:0乙基PC)、N1-[2-((1S)-1-[(3-氨基丙基)氨基]-4-[二(3-氨基-丙基)氨基]丁基酰胺)乙基]-3,4-二[油酰基氧基]-苯甲酰胺(MVL5)、1,2-二肉豆蔻酰-3-二甲胺丙烷(14:0DAP)、1,2-二棕榈酰基-3-二甲胺丙烷(16:0DAP)、1,2-二硬脂酰基-3-二甲胺丙烷(18:0DAP)、N-(4-苄氧羰基)-N,N-二甲基-2,3-双(油酰基氧基)丙烷-1-铵(DOBAQ)、1,2-硬脂酰-3-三甲胺丙烷(18:0TAP)、1,2-二棕榈酰基-3-三甲胺丙烷(16:0TA)、1,2-二肉豆蔻酰-3-三甲胺丙烷(14:0TAP)和N4-胆甾醇基-精胺(GL67)。


4.根据权利要求3的组合物，其中该阳离子脂质体进一步包含选自下组的中性脂质：1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱(DMPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DLPC)、磷酯酰丝氨酸(PS)、磷酸乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷酸(PA)、和磷脂酰胆碱(PC)。


5.一种疫苗组合物，其包含：
(a)抗原；和
(b)根据权利要求1的用于增强免疫的组合物，作为活性成分。


6.根据权利要求5的疫苗组合物，其中该抗原选自下组：肽、蛋白、核酸、糖、病原体、减毒的病原体、灭活的病原体、病毒、病毒样颗粒(VLP)、细胞或细胞片段。


7.根据权利要求5的疫苗组合物，其中该抗原选自下组：寨卡病毒的抗原、日本脑炎病毒的抗原、结核分支杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)的抗原、百日咳的抗原、水痘-带状疱疹病毒的抗原、流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenza...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵良济，金光成，李奈暻，朴神爱，
申请(专利权)人：艾金株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR