一种用于性别鉴定的基因试剂盒及21号染色体综合症辅助鉴定用试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于性别鉴定的基因试剂盒包括两对qPCR引物，如SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4所示。本发明专利技术提供的21号染色体综合症辅助鉴定用试剂盒，包括五对引物，如、SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4所示。本发明专利技术直接提取外周血或羊水穿刺物中的胎儿细胞的基因组DNA进行检测，不经过细胞增殖培养，且单个样本也可以检测，不用凑样，有效降低了成本。

A gene kit for sex identification and a kit for auxiliary identification of chromosome 21 syndrome

【技术实现步骤摘要】
一种用于性别鉴定的基因试剂盒及21号染色体综合症辅助鉴定用试剂盒
本专利技术涉及分子生物医学
，具体涉及一种用于性别鉴定的基因试剂盒及21号染色体综合症辅助鉴定用试剂盒。
技术介绍
在一些特殊情况下，需要进行性别鉴定：(1)如父母的染色体因有遗传疾病，而且是性别遗传，则需要做胎儿性别鉴定的。如有一类遗传病与胎儿性别有关，男性发病，而女性却不发病，这就是X连锁隐性遗传病，如血友病、假性肥大型进行性肌营养不良、蚕豆病、先天性丙种球蛋白血症等。为了切断致病基因的遗传，保障优生则需要做胎儿性别鉴定。(2)对于一些成年人，仅通过外观检查仅能初步鉴定测定对象的外生殖器性别，对于患有性发育异常疾病或进行过手术治疗或变性手术或伪装性别作弊等情况下的测定对象则无法予以全面、科学的评估，如对运动员的性别鉴定。对羊水穿刺物的检测是确证胎儿性别和21号染色体三体的“金标准”，对于成年人可取外周血进行染色体检测，具体的检测技术有核型分析、CMA和基因芯片。但是存在以下不足：(1)检测的材料成本都比较高，据粗略计算，都超过了500元人民币/人份；(2)核型分析检测的时间成本高(至少12天出结果)，细胞在增殖过程中可能发生染色体状况的变化，需要熟练的操作者；(3)CMA和基因芯片检测虽然时间成本相对低，但是存在较多的凑样等待时间，因为出于成本考虑，它们需要凑足芯片要求的最低样本数后，才能进行检测。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：传统的性别鉴定方法存在材料成本和时间成本较高问题，本专利技术提供了解决上述问题的一种用于性别鉴定的基因试剂盒及21号染色体综合症辅助鉴定用试剂盒。本专利技术通过下述技术方案实现：一种用于性别鉴定的基因试剂盒，包括两对qPCR引物，依次如下：CXCR3-X-F：正向引物如SEQIDNO1所示；CXCR3-X-B：反向引物如SEQIDNO2所示；TSPY1-Y-F：正向引物如SEQIDNO3所示；TSPY1-Y-B：反向引物如SEQIDNO4所示。进一步地，所述第一对引物基于X染色体的CXCR3基因设计。进一步地，所述第二対qPCR引物基于Y染色体的TSPY1基因设计。上述一种用于性别鉴定的基因试剂盒使用方法，包括以下步骤：步骤1，基于X染色体上的CXCR3和Y染色体上的TSPY1基因设计两对qPCR引物：CXCR3-X-F：正向引物如SEQIDNO1所示；CXCR3-X-B：反向引物如SEQIDNO2所示；TSPY1-Y-F：正向引物如SEQIDNO3所示；TSPY1-Y-B：反向引物如SEQIDNO4所示；步骤2，从成人外周血或孕妇子宫羊水穿刺物中提取的基因组DNA为模板，分别用上述两对引物，进行SybrGreen的qPCR检测；步骤3，qPCR检测后获得CT值，以CT值计算得到CXCR3基因和TSPY1基因产物的量；步骤4，计算比值CXCR3/TSPY1，比值大于1，被检测成人或胎儿为女性，比值小于1，被检测成人或胎儿为男性。21号染色体综合症辅助鉴定用试剂盒，包括五对引物，依次如下：引物IL10-1#-F：正向引物如SEQIDNO5所示；引物IL10-1#-B：反向引物如SEQIDNO6所示；引物STAT1-2#-F：正向引物如SEQIDNO7所示；引物STAT1-2#-B：反向引物如SEQIDNO8所示；引物Sumo3-21#-F：正向引物如SEQIDNO9所示；引物Sumo3-21#-B：反向引物如SEQIDNO10所示；引物CXCR3-X-F：正向引物如SEQIDNO1所示；引物CXCR3-X-B：反向引物如SEQIDNO2所示；引物TSPY1-Y-F：正向引物如SEQIDNO3所示；引物TSPY1-Y-B：反向引物如SEQIDNO4所示。进一步地，所述引物IL10-1#-F和IL10-1#-B基于1号染色体上的IL10基因设计；所述引物STAT1-2#-F和STAT1-2#-B基于2号染色体上的STAT1基因设计；所述引物Sumo3-21#-F和Sumo3-21#-B基于21号染色体上Sumo3基因设计；引物CXCR3-X-F和CXCR3-X-B基于X染色体的CXCR3基因设计；引物TSPY1-Y-F和TSPY1-Y-B基于Y染色体的TSPY1基因设计。上述21号染色体综合症辅助鉴定用试剂盒的使用方法，包括以下步骤：步骤1，基于1号染色体上的IL10基因、2号染色体上的STAT1基因、21号染色体上Sumo3基因、X染色体上的CXCR3和Y染色体上的TSPY1基因设计引物SEQIDNO5、SEQIDNO6、SEQIDNO7、SEQIDNO8、SEQIDNO9、SEQIDNO10、SEQIDNO1、SEQIDNO2、SEQIDNO3和SEQIDNO4；步骤2，从成人外周血或孕妇子宫羊水穿刺物中提取的基因组DNA为模板，分别用上述引物，进行SybrGreen的qPCR检测；步骤3，qPCR检测后获得CT值，以CT值计算得到IL10基因、STAT1基因、Sumo3基因、CXCR3和TSPY1基因产物的量。进一步地，还包括步骤4，对步骤3获得的IL10基因、STAT1基因、Sumo3基因、CXCR3和TSPY1基因产物的量进行二次处理用于辅助鉴定21号染色体综合症。本专利技术具有如下的优点和有益效果：本专利技术针对外周血或羊水穿刺物，提供了一种新的性别鉴定和辅助21号染色体三体鉴定的试剂盒及相应的使用方法，是基于使用SybrGreen的定量PCR(qPCR)改进获得，具有如下优势：(1)直接提取外周血或羊水穿刺物中的胎儿细胞的基因组DNA进行检测，不经过细胞增殖培养，节约了时间；(2)单个样本也可以检测，不用凑样，无凑样等待时间；(3)结果判定只需根据事前设定好的阈值进行比较，客观性好，操作方便；(4)最后，本专利技术提供的试剂盒及其使用方法是用于辅助核型分析、CMA和基因芯片检测进行判断，不是取代核型分析、CMA和基因芯片方法，而是对核型分析、CMA和基因芯片方法的补充。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本专利技术作进一步的详细说明，本专利技术的示意性实施方式及其说明仅用于解释本专利技术，并不作为对本专利技术的限定。实施例1本实施例提供一种用于性别鉴定的基因试剂盒及其使用方法：(一)用于性别鉴定的基因试剂盒，包括两对qPCR引物，依次如下：CXCR3-X-F：正向引物如SEQIDNO1所示；CXCR3-X-B：反向引物如SEQIDNO2所示；TSPY1-Y-F：正向引物如SEQIDNO3所示；TSPY1-Y-B：反向引物如SEQIDNO4所示。引物CXCR3-X-F和引物CXCR3-X-B是基于X染色体的CXCR3基因设计；引物TSPY1-Y-F和引物TSPY1-Y-B基于Y染色体的TSPY1基因设计。(二)上述的用于性别鉴定的基因试剂盒使用方法，包括以下步骤：步骤1，基于X染色体上的CXCR3和Y染色体上的TSPY1基因设计两对qPCR引物：CXCR3-X-F：正向引物如SEQIDNO1所示；CXCR3-X-B：反向引物如SEQIDNO2所示；TSPY1-Y-F：正向引物如SEQIDNO3所示；TSPY1-Y-B：反向引物如SEQIDNO4所示；步骤2，从成人外周血或孕本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于性别鉴定的基因试剂盒，其特征在于，包括两对qPCR引物，依次如下：CXCR3‑X‑F：正向引物如SEQ ID NO 1所示；CXCR3‑X‑B：反向引物如SEQ ID NO 2所示；TSPY1‑Y‑F：正向引物如SEQ ID NO 3所示；TSPY1‑Y‑B：反向引物如SEQ ID NO 4所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于性别鉴定的基因试剂盒，其特征在于，包括两对qPCR引物，依次如下：CXCR3-X-F：正向引物如SEQIDNO1所示；CXCR3-X-B：反向引物如SEQIDNO2所示；TSPY1-Y-F：正向引物如SEQIDNO3所示；TSPY1-Y-B：反向引物如SEQIDNO4所示。2.根据权利要求1所述的一种用于性别鉴定的基因试剂盒，其特征在于，所述第一对引物基于X染色体的CXCR3基因设计。3.根据权利要求1所述的一种用于性别鉴定的基因试剂盒，其特征在于，所述第二対qPCR引物基于Y染色体的TSPY1基因设计。4.根据权利要求1所述的一种用于性别鉴定的基因试剂盒使用方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，基于X染色体上的CXCR3和Y染色体上的TSPY1基因设计两对qPCR引物：CXCR3-X-F：正向引物如SEQIDNO1所示；CXCR3-X-B：反向引物如SEQIDNO2所示；TSPY1-Y-F：正向引物如SEQIDNO3所示；TSPY1-Y-B：反向引物如SEQIDNO4所示；步骤2，从成人外周血或孕妇子宫羊水穿刺物中提取的基因组DNA为模板，分别用上述两对引物，进行SybrGreen的qPCR检测；步骤3，qPCR检测后获得CT值，以CT值计算得到CXCR3基因和TSPY1基因产物的量；步骤4，计算比值CXCR3/TSPY1，若比值大于1，判断被检测成人或胎儿为女性；若比值小于1，判断被检测成人或胎儿为男性。5.21号染色体综合症辅助鉴定用试剂盒，其特征在于，包括五对引物，依次如下：引物IL10-1#-F：正向引物如SEQIDNO5所示；引物IL10-1#-B：反向引物如SEQIDNO6所示；引物STAT1-2#-F：正向引物如SEQIDNO7所示；引物STAT1-2#-B：反向引物如SEQIDNO8所示；引物Sumo3-21#-F：正向引物如SEQIDNO9所示；引物Sumo3-21#-B：反向引物如SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：万谦，向俊蓓，刘绵学，王锐锋，
申请(专利权)人：成都新生命霍普医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51