针对CD127的抗体和多肽制造技术

本发明专利技术涉及可用于治疗和诊断应用的靶向CD127(IL7受体的α链)的抗体的领域，以及特别提供针对CD127(特别是人CD127)的人源化单克隆抗体、其治疗用途和诊断应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对CD127的抗体和多肽
本专利技术涉及可用于治疗和诊断应用的靶向CD127(IL7受体的α链)的多肽或抗体领域，以及特别提供针对CD127(特别是人CD127)的人源化单克隆抗体、其治疗用途和诊断应用。
技术介绍
白细胞介素7(IL-7)受体的α链(或亚基)被称为CD127或p90IL-7R或IL-7Rα或IL-7Rα(有时也称为IL-7Rα)。
技术实现思路
在一个具体方面，本文提供的抗体(特别是单克隆抗体)针对人细胞上表达的人IL-7受体的α链。在一个具体方面，本文提供的抗体对IL-7-IL-7R相互作用具有拮抗特性，可能呈现针对CD127阳性细胞的细胞毒活性，但不会增加由TSLP诱导的树突细胞(DC)的成熟。特别地，本文提供的抗体识别人CD127表位，该人CD127表位包含来自CD127的2b位点的序列，特别地，该表位包含CD127的结构域D1和2b位点的人CD127序列，特别地，该表位包含来自D1的至少一个序列和来自2b位点(优选来自CD127的2b位点的第三β折叠)的至少一个序列。或者，或另外地，在一个特定方面，本文提供的抗体不会诱导CD127的内化和/或抑制IL7诱导的CD127内化。在一个具体方面，本文提供的抗体是人源化的并且包含至少80％，优选至少84％，或至少85％的人残基。在一个具体方面，本文提供的抗体对效应记忆T细胞具有快速作用，对效应记忆T细胞具有长期作用，或者，优选地对效应记忆T细胞具有快速且长期的作用。在一个特定方面，本文提供的抗体能够有效地生产。在一个具体方面，可以测量CD127、IL-7和/或TSLP的表达水平，以使用特别是本文提供的抗CD127抗体评估反应的可能性。除了抗体之外，本文还提供特别是作为用于产生抗体和/或用于类似于所述抗体的用途的工具的多肽，特别是抗体轻链可变结构域或抗体轻链、抗原结合片段和来自此类抗体的抗体模拟分子和多核苷酸。当与WO2015/189302中公开的N13B2-h1、N13B2-h2和N13B2-h3抗体相比时，本专利技术人寻求获得了改进的人源化抗体。虽然已知可变结构域框架序列中的一些残基(包括游标区(Vernierzone)残基、规范残基、VH/VL界面的残基等)在抗体结构中是关键的并且不应突变以保持抗体的生物化学和生物学活性，但专利技术人惊奇地发现，N13B2的轻链可变结构域框架序列中(包括一些这样的关键残基)的一些突变允许增加人残基含量(高于N13B2-h3并且高达86.3％)和改善的生产(比N13B2-h3高4倍)，同时保留所有功能特性。这些突变由N13B2的轻链可变结构域框架序列内的16个氨基酸取代组成，特别是另外用亮氨酸残基取代48位的缬氨酸残基(V48L)和/或用酪氨酸残基取代87位的苯丙氨酸残基(F87Y)。除非另有说明，使用Kabat编号提供这些位置和本文提供的抗体链的任何氨基酸位置。本文提供了改善的抗体轻链可变结构域，其由以下序列组成：-SEQIDNo：9(包括所述16个氨基酸取代-所述抗体轻链可变结构域在下文中称为N13B2-hVL3)；-SEQIDNo：10(包括所述16个氨基酸取代且另外具有突变V48L-所述抗体轻链可变结构域在下文中称为N13B2-hVL4)；-SEQIDNo：11(包括所述16个氨基酸取代且另外具有突变F87Y-所述抗体轻链可变结构域在下文中称为N13B2-hVL5)；和-SEQIDNo：12(包括所述16个氨基酸取代且另外具有两个突变V48L和F87Y-所述抗体轻链可变结构域在下文中称为N13B2-hVL6)。因此，本文中称为N13B2-hVL3的抗体轻链可变结构域包含N13B2-h3的CDR、所述16个氨基酸取代和人框架序列内关键位置48和87处的N13B2的原始残基(即，分别为V和F)，并具有SEQIDNo：9的序列。本文提供的优选的改善的抗体的轻链可变结构域被称为N13B2-hVL6，另外包含突变V48L和F87Y，由SEQIDNo：12所示的序列组成。技术人员不会预期到，所述突变，特别是在轻链可变结构域框架中的这些位置的突变会使抗体与CD127的亲和力不受影响：V48是规范残基，F87位于VH/VL界面；如本领域技术人员已知的并且如Clark，2014中所讨论的，这些残基的突变预期会影响抗体的亲和力和/或稳定性。如本文所用，术语“规范(canonical)”残基是指限定特定规范CDR结构的CDR或框架中的残基，如Chothia等，J.Mol.Biol.196：901-907(1987)；Chothia等，J.Mol.Biol.227：799(1992)限定的。根据Chothia等人，许多抗体的CDR的关键部分具有几乎相同的肽骨架构象，尽管在氨基酸序列的层级上有很大差异。每个规范结构主要为形成环的氨基酸残基的连续区段指定一组肽骨架扭转角。未能预见的是，在两个位置引入所公开的突变会导致改善的生产，同时仍然保留抗体的结合特性和有利的其他功能特性。因此，本文提供了特别用于产生如下文所定义的此类抗体(特别是抗体轻链可变结构域或抗体轻链)或其抗原结合片段或抗体模拟分子的多肽，该抗体(特别是抗体轻链可变结构域或抗体轻链)由序列、特别是多达250个氨基酸的序列组成，包含以下序列或由以下序列组成：SEQIDNO：9；SEQIDNO：10；或SEQIDNO：11；或SEQIDNO：12。在一个具体方面，本专利技术涉及本文提供的抗体或其抗原结合片段，特别是特异性结合CD127，特别是人CD127的人源化单克隆抗体，并包含：抗体轻链或抗体轻链可变结构域，该抗体轻链包含选自下组的序列或该抗体轻链可变结构域由选自下组的序列组成：SEQIDNo：9；SEQIDNo：10；SEQIDNo：11；SEQIDNo：12；特别是SEQIDNo：12；和抗体重链可变结构域，其包含由SEQIDNo：1、SEQIDNo：2和SEQIDNo：3所示序列组成的三个CDR，特别是由SEQIDNo：7所示的序列组成的抗体重链可变结构域。在一个优选的实施方案中，本专利技术涉及本文提供的抗体或其抗原结合片段，特别是人源化单克隆抗体，其特异性结合CD127，特别是人CD127，并且包含：-轻链可变结构域，其由选自下组的序列组成：SEQIDNo：9、SEQIDNo：10、SEQIDNo：11和SEQIDNo：12，特别是SEQIDNo：12；和-重链可变结构域，其包含由SEQIDNo：1、SEQIDNo：2和SEQIDNo：3所示序列组成的三个CDR，特别是由SEQIDNo：7所示序列组成的重链可变结构域。在一个特定方面，本文提供的抗体包含轻链和重链，该轻链具有如上可变结构域和由选自SEQIDNo：27或28(优选SEQIDNo：27)的序列组成的恒定结构域，该重链具有如上所述的可变结构域的和由SEQIDNo：26所示序列组成的恒定结构域。本文还提供了分离的多肽，其由具有多达250个氨基酸(特别是多达217个、多达214个，多达211个氨基酸，更特别是多达200个、多达175个、多达150个、多达135个、多达120个、多达107个氨基酸，甚至更特别是多达100个、多达90个、多达80个、多达74个、多达70个、多达60个氨基酸)的序列组成，其中，所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗体或其抗原结合片段，其特异性结合CD127，特别是人CD127，所述抗体或其抗原结合片段包含：‑抗体轻链或抗体轻链可变结构域，所述抗体轻链包含选自下组的序列或所述抗体轻链可变结构域由选自下组的序列组成：SEQ ID No：9；SEQ ID No：10；SEQ ID No：11；SEQ ID No：12；特别是SEQ ID No：12；和‑抗体重链可变结构域，其包含由SEQ ID No：1、SEQ ID No：2和SEQ ID No：3所示序列组成的三个CDR，特别是由SEQ ID No：7所示的序列组成的抗体重链可变结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.12.09 EP 16306655.81.抗体或其抗原结合片段，其特异性结合CD127，特别是人CD127，所述抗体或其抗原结合片段包含：-抗体轻链或抗体轻链可变结构域，所述抗体轻链包含选自下组的序列或所述抗体轻链可变结构域由选自下组的序列组成：SEQIDNo：9；SEQIDNo：10；SEQIDNo：11；SEQIDNo：12；特别是SEQIDNo：12；和-抗体重链可变结构域，其包含由SEQIDNo：1、SEQIDNo：2和SEQIDNo：3所示序列组成的三个CDR，特别是由SEQIDNo：7所示的序列组成的抗体重链可变结构域。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体是人源化单克隆抗体，特别地其中抗体轻链恒定结构域衍生自人κ轻链恒定结构域，特别地其中轻链恒定结构域由SEQIDNo：27或28的序列组成，并且其中抗体重链恒定结构域衍生自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链恒定结构域，特别是衍生自人IgG4重链恒定结构域，特别地，其中抗体重链恒定结构域由具有SEQIDNo：26的序列组成。3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体轻链包含SEQIDNo：12或所述抗体轻链可变结构域由SEQIDNo：12组成，并且其中所述抗体重链可变结构域由SEQIDNo：7组成。4.根据权利要求1～3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段是IL-7诱导的IL-7R信号传导的拮抗剂，并且所述抗体或其抗原结合片段不诱导磷脂酰肌醇3-激酶和/或ERK信号通路的活化。5.根据权利要求1～4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段识别包含取自CD127的2b位点的序列的表位和/或破坏CD127与细胞因子受体的γc共有链的结合，特别是，所述抗体或其抗原结合片段至少识别CD127的位点2b的第三β折叠。6.根据权利要求1～5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段不诱导CD127的内化和/或抑制IL7诱导的CD127内化。7.根据权利要求1～6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段不增加由TSLP诱导的树突细胞的成熟。8.根据权利要求1～7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具有长期效果和/或快速效果，特别是具有快速局部效果。9.根据权利要求1～8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段以低于5E-9M的亲和常数KD特异性结合人CD127，所述亲和常数KD可通过生物传感器分析确定。10.编码权利要求1～9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的分离的核酸分子的组合，特别...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·普瓦里耶，C·马里，B·万霍伍，V·特普尼尔，
申请(专利权)人：OSE免疫疗法，
类型：发明
国别省市：法国,FR