本发明专利技术公开了一种用温度刺激提高百合鳞茎保存效果的方法，包括选取材料、增殖培养、不同温度下保存，通过在诱导增殖培养时低温刺激百合鳞茎，并且分别将继代培养的百合鳞茎于常温、低温、超低温不同的温度条件进行保存。还公开一种百合鳞茎的复苏方法，将低温、超低温条件下保存的百合鳞茎，分别转接到低温复苏培养基以及超低温复苏培养基上后，常温继续培养恢复生长。本发明专利技术的保存和复苏的方法简单，易实施，通过温度刺激以及调整继代保存培养基、复苏培养基成分种类和含量，获得适宜不同条件下保存和复苏的培养基，可以使保存时间达3‑5年，甚至更长，大大减少现有技术多次定期继代培养的弊端。
Methods of improving the effect of lily bulb preservation and recovery by temperature stimulation
【技术实现步骤摘要】
用温度刺激提高百合鳞茎保存效果的方法及复苏方法
本专利技术属于植物组织培养和种植资源保存
，具体涉及一种用温度刺激提高百合鳞茎保存效果的方法及复苏方法。
技术介绍
百合是百合科百合属多年生草本球根植物，主产于湖南、四川、河南、江苏、浙江，全国各地均有种植，少部分为野生资源。很多人都喜欢用百合煲汤、熬粥来养生，主要是由于百合的营养价值和功效多，具有安神清心、润肺止咳的功效，百合是一味重要的中药，早在秦汉时期，百合的营养价值及功效就在《神农本草经》中有所记载，说它“主治邪气腹胀，心痛，利大、小便，补中益气，除浮肿”。百合无性繁殖和有性繁殖均可，生产上主要有鳞片繁殖、籽球繁殖和珠芽繁殖3种；而秋季将成熟的种籽采下，在苗床内播种，第二年秋季可产生小鳞茎，此法时间长，种性易变，生产上少用。百合鳞茎鳞茎肉质肥厚，但是长期在常温条件下自然存放，就失去了繁殖的功能，而目前用于无性繁殖材料保存的方法，一般都是通过连续的继代培养进行保存，需要定期继代培养，以保证无性繁殖材料的保存，百合鳞茎当然也不例外，而这种定期继代的保存方法，虽然可以提供一定的无性繁殖繁殖材料，但是工作量大，并且保存时间短，继代次数多容易造成无性材料的倍性变化，不利于随时提供优质的生产上所用的良性系、单倍体、多倍体等，此外，如果不像现有技术进行定期继代培养，直接冷冻无性材料又会导致保存的无性材料失去活性，无法恢复正常的生长。因此，如何在现有技术的基础上进行改进，以延长百合鳞茎的保存期，减少继代次数及多次继代造成的影响，对于提高百合鳞茎的保存效果具有非常重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种用温度刺激提高百合鳞茎保存效果的方法，诱导增殖百合鳞茎过程中，通过冷刺激刺激鳞茎生长，便于其对外界条件反应，吸收更多的营养维持体内代谢，并且利于快速适应常温、低温或超低温不同条件保存时的环境变化。本专利技术还有一个目的是提供一种百合鳞茎的复苏方法，经低温或超低温保存的百合鳞茎，采用不同的培养基进行复苏，便于形成含有较多鳞茎或丛生叶的百合生成，恢复正常生长。为了实现本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种用温度刺激提高百合鳞茎保存效果的方法，包括选取材料、增殖培养、不同温度下保存，所述提高百合鳞茎保存效果的温度刺激方法具体包含以下步骤：(1)选取当年生百合鳞茎，进行预处理；(2)预处理后的百合鳞茎转接到诱导和增殖培养基上，培养期间间隔性的在-4℃条件下刺激所述百合鳞茎1-3次，每次3-5min，再恢复常温继续培养，培养至长出小鳞茎；(3)长出小鳞茎后，将所述百合鳞茎转移到继代保存培养基上，于常温、低温或超低温条件下进行保存；所述诱导和增殖培养基为含有0.5mg/LKT、0.5mg/L2,4-D以及30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基；所述继代保存培养基为含有0.5mg/LKT、0.5mg/L2,4-D、10-20g/L蔗糖、20-30g/L甘露醇以及30-40μmol/LABA的MS培养基，其中，常温保存和低温保存时，需要在所述继代保存培养基基础上分别按6.5-7.5g/L添加琼脂。优选的是，步骤(1)中所述预处理具体为：将选取百合鳞茎洗净后，去除表面干枯、腐烂的鳞片，用质量分数为75％酒精溶液浸泡30-40s，再用质量分数为0.1％-0.2％升汞溶液浸泡10-15min，之后用无菌水冲洗4-6次，置于无菌纸上吸取水分。优选的是，步骤(2)中所述间隔条件为：每两次温度刺激之间不低于8h。优选的是，超低温保存时都要以慢冻为原则，先将转移到继代保存培养基上的百合鳞茎放置在4℃条件下30min后，放入-20℃条件下2h，再放入-80℃条件下长期保存。本专利技术还提供一种百合鳞茎的复苏方法，将低温、超低温条件下保存的百合鳞茎，分别转接到低温复苏培养基以及超低温复苏培养基上后，常温继续培养恢复生长。优选的是，所述低温复苏培养基包含复苏培养基I和复苏培养基II，所述复苏培养基I为含有0.5mg/LKT、0.5mg/L2,4-D、30g/L蔗糖、0.3-0.5mg/L6-BA、0.5-1.0mg/LNAA和琼脂6.5-7.5g/L的MS培养基，经所述复苏培养基I复苏的百合鳞茎主要形成鳞茎；所述复苏培养基II为含有0.5mg/LKT、0.5mg/L2,4-D、30g/L蔗糖、0.5-1.0mg/L6-BA、0.5-0.1mg/LNAA和琼脂6.5-7.5g/L的MS培养基，经所述复苏培养基II复苏的百合鳞茎主要形成丛生叶。优选的是，超低温保存的百合鳞茎在转接到超低温复苏培养基之前，还包括快融解冻的步骤，具体为：取出超低温保存的百合鳞茎，依次放置于30℃和35℃水浴条件下各半小时，完成解冻。优选的是，解冻后的百合鳞茎转移到所述超低温复苏培养基中，所述超低温复苏培养基包含复苏培养基III和复苏培养基IV，所述复苏培养基III为含有0.5mg/LKT、0.5mg/L2,4-D、30g/L蔗糖、0.3-0.5mg/L6-BA、0.5-1.0mg/LNAA以及0.005mg/LBR的MS培养基，经所述复苏培养基III复苏的百合鳞茎主要形成鳞茎；所述复苏培养基IV为含有0.5mg/LKT、0.5mg/L2,4-D、30g/L蔗糖、0.5-1.0mg/L6-BA、0.5-0.1mg/LNAA以及0.005mg/LBR的MS培养基，经所述复苏培养基IV复苏的百合鳞茎主要形成丛生叶。本专利技术至少包括以下有益效果：本专利技术公开的用温度刺激提高百合鳞茎保存效果的方法，通过诱导增殖培养百合鳞茎，可以促进所要保存的百合鳞茎处于稳定生长的正常状态，而在诱导培养过程中通过冷刺激对百合鳞茎进行刺激生长，一方面可以使百合鳞茎对外界环境的变化做出本能反应，为了保持体内代谢的正常运行，会对冷刺激做出反应，瞬时改变能量和营养代谢，释放更多的能量以维持正常的生理状态，另一方面环境的变化也是对百合鳞茎适应不同温度条件保存提前进行驯化的过程，可以保证在进行不同温度保存后，能够适应条件的变化，不至于尤其在超低温条件下保存制备出现冻伤，导致活性丧失，而是放置于超低温保存后仅仅是将生命活动维持在一个不再继续增殖的生存状态。该方法简单，易操作，而且能够延长百合鳞茎的保存时期到3-5年，甚至更长，大大减少了现有技术定期继代的次数，防止过多次继代导致倍性变化的几率。通过低温或超低温保存的百合鳞茎，通过转接到不同的复苏培养基上，可以促使保存的百合鳞茎形成鳞茎多或丛生叶的生长，以便于根据需求的保存资源的时间合理选择复苏培养基进行复苏，随时提供最优质的植物组织培养百合的离体材料，利于百合育种工作的开展及推广。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。附图说明图1为本专利技术常温下继代培养的宜兴百合的丛生鳞茎(少量叶)；图2为本专利技术低温保存后恢复培养的宜兴百合的丛生鳞茎(a)和丛生叶(含少量鳞茎)(b)；图3为本专利技术超低温保存后恢复培养的宜兴百合的丛生鳞茎(少量叶)(a)和丛生叶(b)；图4为本专利技术超低温保存复苏后生长的有根的试管苗(a)和准备移栽驯化的试管苗(b)。具体实施方式下面对本专利技术做进一本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用温度刺激提高百合鳞茎保存效果的方法，其特征在于，包括选取材料、增殖培养、不同温度下保存，所述提高百合鳞茎保存效果的温度刺激方法具体包含以下步骤：(1)选取当年生百合鳞茎，进行预处理；(2)预处理后的百合鳞茎转接到诱导和增殖培养基上，培养期间间隔性的在4℃条件下刺激所述百合鳞茎1‑3次，每次3‑5min，再恢复常温继续培养，培养至长出小鳞茎；(3)长出小鳞茎后，将所述百合鳞茎转移到继代保存培养基上，于常温、低温或超低温条件下进行保存；所述诱导和增殖培养基为含有0.5mg/L KT、0.5mg/L 2,4‑D以及30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基；所述继代保存培养基为含有0.5mg/L KT、0.5mg/L 2,4‑D、10‑20g/L蔗糖、20‑30g/L甘露醇、30‑40μmol/L ABA的MS培养基，其中，常温保存和低温保存时，需要在所述继代保存培养基基础上分别按6.5‑7.5g/L添加琼脂。
【技术特征摘要】
1.一种用温度刺激提高百合鳞茎保存效果的方法，其特征在于，包括选取材料、增殖培养、不同温度下保存，所述提高百合鳞茎保存效果的温度刺激方法具体包含以下步骤：(1)选取当年生百合鳞茎，进行预处理；(2)预处理后的百合鳞茎转接到诱导和增殖培养基上，培养期间间隔性的在4℃条件下刺激所述百合鳞茎1-3次，每次3-5min，再恢复常温继续培养，培养至长出小鳞茎；(3)长出小鳞茎后，将所述百合鳞茎转移到继代保存培养基上，于常温、低温或超低温条件下进行保存；所述诱导和增殖培养基为含有0.5mg/LKT、0.5mg/L2,4-D以及30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基；所述继代保存培养基为含有0.5mg/LKT、0.5mg/L2,4-D、10-20g/L蔗糖、20-30g/L甘露醇、30-40μmol/LABA的MS培养基，其中，常温保存和低温保存时，需要在所述继代保存培养基基础上分别按6.5-7.5g/L添加琼脂。2.如权利要求1所述的用温度刺激提高百合鳞茎保存效果的方法，其特征在于，步骤(1)中所述预处理具体为：将选取百合鳞茎洗净后，去除表面干枯、腐烂的鳞片，用质量分数为75％酒精溶液浸泡30-40s，再用质量分数为0.1％-0.2％升汞溶液浸泡10-15min，之后用无菌水冲洗4-6次，置于无菌纸上吸取水分。3.如权利要求1所述的用温度刺激提高百合鳞茎保存效果的方法，其特征在于，步骤(2)中所述间隔条件为：每两次温度刺激之间不低于8h。4.如权利要求1所述的用温度刺激提高百合鳞茎保存效果的方法，其特征在于，超低温保存时都要以慢冻为原则，先将转移到继代保存培养基上的百合鳞茎放置在4℃条件下30min后，放入-20℃条件下2h，再放入-80℃条件下长期保存。5.一种百合鳞茎的复苏方法，其特征在于，将权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹云英，朱秀茹，许锦彪，周蓉，赵华，方潇，杨建伟，王永舟，许浩，高聪，虎玲萍，李恒宇，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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