一种测定头孢类抗生素中聚合物的检测方法技术

本发明专利技术提供一种测定头孢类抗生素中聚合物的检测方法，属于检测技术领域，步骤如下：S1、将纯化水放置冰箱2‑8℃，临用前取出制得稀释剂即空白溶液；S2、取抗生素A对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg抗生素A的溶液；取抗生素B对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg抗生素B的溶液；取抗生素A:B(5:1)供试品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg抗生素A(约含0.2mg抗生素B)的溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度并摇匀；S3、溶液进样，记录色谱图，读取数值完成检测。本发明专利技术具有操作简单、专属性强、灵敏度高的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种测定头孢类抗生素中聚合物的检测方法
本专利技术属于检测
，具体涉及一种测定头孢类抗生素中聚合物的检测方法。
技术介绍
头孢类抗生素中的高分子聚合物系指其中分子量大于药物本身的杂质的总称，其分子量一般在1000～5000Da，个别可达10000Da左右。由于高分子聚合物具有高度不均一性和不确定性，无法制备出具有固定含量的对照品，现行版《美国药典》未收载相关测定方法。2015年版《中国药典》收载的以自身对照外标法定量测定β-内酰胺类抗菌药物中高分子聚合物的方法，通过两种流动相的转换，以药品自身对照品取代高分子聚合物对照品对其中的高分子聚合物进行检测，为目前常用的技术，用于检测头孢类抗生素中聚合物；但上述方法根据2015年版《中国药典》头孢噻肟钠项下规定，采用以葡聚糖凝胶G-10为填充剂的凝胶色谱柱对头孢类抗生素中的高分子聚合物的含量进行测定。结果表明，该色谱柱的柱效低(柱效仅1000左右)，进样浓度高(20mg/ml)，峰形拖尾，分析时间长(一个样品需要2h左右)，分离效果差(所有高分子聚合物为一个峰，且该峰与主峰未能达到基线分离)，导致高分子聚合物的检出量非常低；
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术的目的是提供一种测定头孢类抗生素中聚合物的检测方法，具有操作简单、专属性强、灵敏度高的优点。本专利技术提供了如下的技术方案：一种测定头孢类抗生素中聚合物的检测方法，包括如下步骤：S1、将纯化水放置冰箱8℃，临用前取出制得稀释剂即空白溶液；S2、配制抗生素A对照品溶液：取抗生素A对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg抗生素A的溶液；配制抗生素B对照品溶液：取抗生素B对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg抗生素B的溶液；配制供试品溶液：取抗生素A:B(5:1)供试品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg抗生素A(约含0.2mg抗生素B)的溶液；配制对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度并摇匀；S3、分别取空白溶液、抗生素A对照品溶液、抗生素B对照品溶液、供试品溶液适量进样，记录色谱图，读取数值完成检测。优选的，色谱条件如下，色谱柱：TSK-GELG2000SWXL凝胶色谱柱(30cm×7.8mm，5μm)；流动相：0.01mol/L磷酸盐缓冲液；流速：1.0ml/min；检测波长：254nm；进样量：10μl；柱温：25℃；进样盘温度：4℃。优选的，流动相由以下方法制得：0.01mol/L磷酸二氢钠；0.01mol/L磷酸氢二钠(61∶39，V/V)，用5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.0。本专利技术的有益效果是：由于抗生素中的高分子聚合物是产生过敏反应的主要原因，控制β－内酰胺类抗生素中的高分子聚合物含量，可以保证临床用药的安全有效。国外药典目前尚无有效控制高分子杂质的检测手段。中国药典收载的自身对照外标法定量测定β-内酰胺类抗生素中高聚物的检测方法，通过两种流动相的转换，以药品自身对照品取代高分子杂质对照品对抗生素中的高聚物进行检测，在一定程度上解决了国外无法解决的问题，但上述方式缺点较多，而本专利技术弥补了上述不足，克服了上述的诸多难点，更适用于抗生素中的高聚物测定，具有操作简单、专属性强、灵敏度高的优点。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1为空白溶液色谱图；图2为抗生素A对照品溶液色谱图；图3为抗生素B对照品溶液色谱图；图4为供试品溶液色谱图；图5为线性考察实验的线性图；具体实施方式排阻色谱法也称空间排阻色谱或凝胶渗透色谱法，是一种根据试样分子的尺寸进行分离的色谱技术。排阻色谱的色谱柱的填料是凝胶，它是一种表面惰性，含有许多不同尺寸的孔穴或立体网状物质。凝胶的孔穴仅允许直径小于孔开度的组分分子进入，这些孔对于流动相分子来说是相当大的，以致流动相分子可以自由地扩散出入。对不同大小的组分分子，可分别渗入到凝胶孔内的不同深度，大个的组分分子可以渗入到凝胶的大孔内，但进不了小孔甚至于完全被排斥。小个的组分分子，大孔小孔都可以渗入，甚至进入很深，一时不易洗脱出来。因此，大的组分分子在色谱柱中停留时间较短，很快被洗脱出来，它的洗脱体积很小，小的组分分子在色谱柱中停留时间较长，洗脱体积较大，直到所有孔内的最小分子到达柱出口，完成按分子大小而分离的洗脱过程一种测定头孢类抗生素中聚合物的检测方法，步骤如下：S1、将纯化水放置冰箱2-8℃，临用前取出制得稀释剂即空白溶液S2、配制抗生素A对照品溶液：取抗生素A对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg抗生素A的溶液；配制抗生素B对照品溶液：取抗生素B对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg抗生素B的溶液；配制供试品溶液：取抗生素A:B(5:1)供试品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg抗生素A(约含0.2mg抗生素B)的溶液；配制对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度并摇匀；S3、分别取空白溶液、抗生素A对照品溶液、抗生素B对照品溶液、供试品溶液适量进样，色谱条件如下，色谱柱：TSK-GELG2000SWXL凝胶色谱柱(30cm×7.8mm，5μm)；流动相：0.01mol/L磷酸盐缓冲液；流速：1.0ml/min；检测波长：254nm；进样量：10μl；柱温：25℃；进样盘温度：4℃；其中流动相由以下方法制得：0.01mol/L磷酸二氢钠；0.01mol/L磷酸氢二钠(61∶39，V/V)，用5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.0，记录色谱图，，详见图1～图4，读取数值完成检测；。由图1～图4可知，主峰相邻高分子聚合物峰保留时间为9.19min，其与主峰分离度为3.28；空白溶剂及其他杂质均不干扰本品中高分子聚合物的测定。重复性实验：按上述实施例的供试品溶液和对照溶液配制方法，平行配制6份，分别按上述实施例的色谱条件进样，记录色谱图；并计算6份供试品溶液中聚合物的平均含量为0.71％，相对标准偏差(RSD)为2.65％(n＝6)，表明本方法重复性较好；进样精密度实验：按上述实施例的供试品溶液和对照溶液配制方法，配制1份，分别按按上述实施例的色谱条件重复进样6针，记录色谱图；计算供试品溶液6次进样的图谱中聚合物峰面积和的相对标准偏差(RSD)为0.30％(n＝6)，对照溶液6次进样的图谱中主峰峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.11％(n＝6)，表明本方法进样精密度较好。中间精密度实验：同时更换人员，日期和仪器，按上述实施例的供试品溶液和对照溶液配制方法，平行配制6份，分别按上述实施例的色谱条件进样，记录色谱图。计算6份供试品溶液中聚合物的平均含量为0.74％，相对标准偏差(RSD)为3.66％(n＝6)，与重复性结果共计相对标准偏差(RSD)为3.90％(n＝12)，表明本方法中间精密度较好。稳定性考察实验：按上述实施例的供试品溶液和对照溶液配制方法，配制1份，分别于4℃条件下放置0、2、4、8、12、24、64时按上述实施例的色谱条件进样，记录色谱图；供试品溶液在4℃条件下放置6本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定头孢类抗生素中聚合物的检测方法，其特征在于：其步骤如下，S1、将纯化水放置冰箱2‑8℃，临用前取出制得稀释剂即空白溶液S2、配制抗生素A对照品溶液：取抗生素A对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg抗生素A的溶液；配制抗生素B对照品溶液：取抗生素B对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg抗生素B的溶液；配制供试品溶液：取抗生素A:B(5:1)供试品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg抗生素A(约含0.2mg抗生素B)的溶液；配制对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度并摇匀；S3、分别取空白溶液、抗生素A对照品溶液、抗生素B对照品溶液、供试品溶液适量进样，记录色谱图，读取数值完成检测。

【技术特征摘要】
1.一种测定头孢类抗生素中聚合物的检测方法，其特征在于：其步骤如下，S1、将纯化水放置冰箱2-8℃，临用前取出制得稀释剂即空白溶液S2、配制抗生素A对照品溶液：取抗生素A对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg抗生素A的溶液；配制抗生素B对照品溶液：取抗生素B对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg抗生素B的溶液；配制供试品溶液：取抗生素A:B(5:1)供试品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg抗生素A(约含0.2mg抗生素B)的溶液；配制对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度并摇匀；S3、分别取空白溶液、抗生素A对...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗志燕，龚刚，朱子丰，顾凯，
申请(专利权)人：南京明捷生物医药检测有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32