一种促进蓝莓开花的siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种促进蓝莓开花的siRNA，包括siRNA1、siRNA2或siRNA3中的一种，将该siRNA当做肥料喷施在蓝莓花芽或叶芽上，可以促进蓝莓开花，从而使蓝莓早结果早成熟，并提早进入市场，获得较好经济效益，干扰效率极高、特异性好、灵敏度高、操作简便、实验周期短、价格低廉。

A siRNA for blueberry flowering and its application

【技术实现步骤摘要】
一种促进蓝莓开花的siRNA及其应用
本专利技术涉及一种促进蓝莓开花的siRNA及其应用。
技术介绍
蓝莓是一种小浆果，果实呈蓝色、果肉细腻、种子极小，具有“浆果之王”和“水果皇后”的美誉。蓝莓果实平均重0.5～2.5g，最大重5g，可食率为100％，甜酸适口，且具有香爽宜人的香气，为鲜食佳品。蓝莓不仅富含常规营养成分，如蛋白质、维生素、矿物质及微量元素等，而且还含有极为丰富的花青素、黄酮类和多糖类化合物，具有缓解视力疲劳，促进视网膜细胞中的视紫质再生，预防近视，改善和增进视力等功效。除缓解视力疲劳外，蓝莓还具有诸多保健功能，如预防心脑血管疾病、防癌、提高免疫力、缓解咽喉疼痛及腹泻等等，所以，对蓝莓的利用和衍生品开发越来越受到重视。花是果树极为重要的生殖器官之一，而花芽分化是果树由营养生长向生殖生长转变的重要阶段，对果树的成花过程、花数量和坐果率起着关键作用。花芽分化的早晚和质量对农林业果树生产的产量、质量有重要影响。温度是诱导植物花芽分化的关键环境因子之一，落叶果树通常要经历一个较低温度的积累量(即需冷量)才能够正常诱导花芽分化和开花，需冷量不足通常会导致果树花芽分化不完整，花器官畸形或严重败育。落叶果树花芽分化机制研究起步较晚，相关研究成果主要借鉴拟南芥等模式植物的研究。植物开花有4条不同途径，分别是依赖光周期的开花途径、自主开花途径、依赖春化的开花途径和赤霉素途径。FLC(FLOWERINGLOCUSC)基因属于MADS－box基因家族成员，在植物开花过程中具有重要作用[5]。在拟南芥中，低温通过对AtFLC基因的转录及蛋白表达水平进行负调控，从而调控拟南芥花芽分化和成花过程。鉴于蓝莓广阔的市场前景及极高的社会和经济效益，蓝莓已经成为新一代健康水果的引领者，国内的种植规模逐年提升。为了提供不同时间段的蓝莓鲜果并提高收益，可以采取冷棚，暖棚等方式。也有通过育种获得早熟，晚熟蓝莓品种的，但目前国内的蓝莓成熟期还是相对集中。本专利技术了一种促进蓝莓开花的siRNA，将该siRNA当做肥料喷施在蓝莓花芽或叶芽上，可以促进蓝莓开花，从而使蓝莓早结果早成熟，并提早进入市场，获得较好经济效益。
技术实现思路
本专利技术的目的是解决蓝莓成熟期集中的技术问题，提供了一种促进蓝莓开花的siRNA，具有促进蓝莓开花、早结果和早成熟的技术效果。本专利技术提供的技术方案为：一种促进蓝莓开花的siRNA，所述siRNA为siRNA1、siRNA2或siRNA3中的一种；所述siRNA1的序列为：正义链：5’-tctatacgcttcagttgaaccctgcc-3’，反义链：5’-ggcagggttcaactgaagcgtataga-3’；所述siRNA2的序列为：正义链：5’-tctatacgcttcagttgaaccctgcc-3’；所述siRNA3的序列为：反义链：5’-ggcagggttcaactgaagcgtataga-3’。优选的是，所述siRNA为siRNA2。优选的是，所述siRNA为siRNA3。优选的是，在促进蓝莓开花、早结果和早成熟中的应用。优选的是，将siRNA制成3-5mM的溶液喷涂在蓝莓花芽或叶芽上至开花前。优选的是，所述喷涂次数为1-3次。优选的是，所述siRNA可促进提早开花1-7天。本专利技术的有益效果体现在以下方面：本专利技术提供了一种促进蓝莓开花的siRNA，将该siRNA当做肥料喷施在蓝莓花芽或叶芽上，可以促进蓝莓开花，从而使蓝莓早结果早成熟，并提早进入市场，获得较好经济效益，干扰效率极高、特异性好、灵敏度高、操作简便、实验周期短、价格低廉。附图说明具体实施方式下面对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。FLC基因是MADS-box家族的重要成员，参与调控植物花芽分化和开花过程，在春化作用中起关键作用。本试验研究关于调控FLC基因中可提调控提前开花的siRNA序列,发现其中一个siRNA的靶基因转录及蛋白表达水平进行负调控，从而调控蓝莓花芽分化和成花过程。具体设计过程参照YiuSM,WongPW[1]涉及的siRNA设计方法。参考文献[1]YiuSM,WongPW,LamTW,MuiYC,KungHF,LinM,CheungYT.FilteringofIneffectivesiRNAsandImprovedsiRNADesignTool.Bioinformatics.2005Jan15；21(2):144-51实施例1所述siRNA1的序列为：正义链：5’-tctatacgcttcagttgaaccctgcc-3’，反义链：5’-ggcagggttcaactgaagcgtataga-3’。(1)将上述基因片段连接而成的人工基因构建到有颈环结构的表达载体pET-SAAK上。(2)转化后的大肠杆菌进行发酵。(3)离心收集大肠杆菌菌体，以均质机破碎法破菌，得到RNA抽提物。(4)用大孔树脂进行吸附，洗脱液用酒精沉淀回收dsRNA，再以RNaseⅢ将dsRNA切成18-25bp的siRNAs，除去RNaseⅢ，获得siRNA1。(5)按照质量比为大豆磷脂：胆固醇：维生素E＝80:10:1的配比，称取以上物质溶解于CHCl3中，在30°减压旋蒸浓缩形成脂膜，以氮气除去残存CHCl3，在35℃抽气条件下，加入数颗玻璃珠，以1克脂膜加入25毫升pH为7的含0.5％吐温80,5mg维生素C和待包埋siRNA1的磷酸缓冲液对脂膜进行旋蒸15min，冰水浴条件下对水化液进行超声处理2次，每次5min，得到包埋siRNA1的脂质体。(6)取siRNA1的脂质体配成3mM的水溶液，在花芽萌发前，实施喷洒2次，做好记录。实施例2所述siRNA1的序列为：正义链：5’-tctatacgcttcagttgaaccctgcc-3’，反义链：5’-ggcagggttcaactgaagcgtataga-3’；(1)将上述基因片段连接而成的人工基因构建到有颈环结构的表达载体pET-SAAK上。(2)转化后的大肠杆菌进行发酵。(3)离心收集大肠杆菌菌体，以均质机破碎法破菌，得到RNA抽提物。(4)用大孔树脂进行吸附，洗脱液用酒精沉淀回收dsRNA，再以RNaseⅢ将dsRNA切成18-25bp的siRNAs，除去RNaseⅢ，获得siRNA1。(5)按照质量比为大豆磷脂：胆固醇：维生素E＝80:10:1的配比，称取以上物质溶解于CHCl3中，在30°减压旋蒸浓缩形成脂膜，以氮气除去残存CHCl3，在35℃抽气条件下，加入数颗玻璃珠，以1克脂膜加入25毫升pH为7的含0.5％吐温80,5mg维生素C和待包埋siRNA1的磷酸缓冲液对脂膜进行旋蒸15min，冰水浴条件下对水化液进行超声处理2次，每次5min，得到包埋siRNA1的脂质体。(6)取siRNA1的脂质体配成4mM的水溶液，在花芽萌发前，实施喷洒2次，做好记录。实施例3所述siRNA1的序列为：正义链：5’-tctatacgcttcagttgaaccctgcc-3’，反义链：5’-ggcagggttcaactgaagcgtataga-3’；(1)将上述基因片段连接而成的人工基因构建到有颈环结构的表达载体pET-SAAK上。(2)转化后的大肠杆菌进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种促进蓝莓开花的siRNA，其特征在于，所述siRNA为siRNA1、siRNA2或siRNA3中的一种；所述siRNA1的序列为：正义链：5’‑tctatacgcttcagttgaaccctgcc‑3’，反义链：5’‑ggcagggttcaactgaagcgtataga‑3’；所述siRNA2的序列为：正义链：5’‑tctatacgcttcagttgaaccctgcc‑3’；所述siRNA3的序列为：反义链：5’‑ggcagggttcaactgaagcgtataga‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种促进蓝莓开花的siRNA，其特征在于，所述siRNA为siRNA1、siRNA2或siRNA3中的一种；所述siRNA1的序列为：正义链：5’-tctatacgcttcagttgaaccctgcc-3’，反义链：5’-ggcagggttcaactgaagcgtataga-3’；所述siRNA2的序列为：正义链：5’-tctatacgcttcagttgaaccctgcc-3’；所述siRNA3的序列为：反义链：5’-ggcagggttcaactgaagcgtataga-3’。2.根据权利要求1所述的一种促进蓝莓开花的siRNA，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐振彪，吴林，徐德冰，
申请(专利权)人：吉林省普蓝高科技有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22