棘孢木霉SC012及其应用制造技术

本发明专利技术涉及的是棘孢木霉SC012及其应用，这株棘孢木霉（Trichodema asperellum）SC012，该菌株的保藏编号为CGMCC No.17978。本发明专利技术所提供的棘孢木霉菌株具有良好的促进种子萌发、促进农作物根部生长以及防治西瓜枯萎病，这株棘孢木霉（Trichodema asperellum）SC012对西瓜枯萎病防治效果达77.82%，与多菌灵混用其防治效果达92.62%。

Trichoderma echinospora sc012 and its application

【技术实现步骤摘要】
棘孢木霉SC012及其应用一、
本专利技术首次发现了一株棘孢木霉SC012，该菌株的拉丁文分类命名为：Trichodemaasperellum，该菌株已于2019年6月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏编号：CGMCCNo.17978。本专利技术涉及的是用于农业生产的棘孢木霉菌，具体涉及的是一株棘孢木霉SC012及其应用。二、
技术介绍
木霉菌(Trichodermaspp.)是国际上生物农药和生物防治重要资源微生物之一，其能产生一系列抗生素，并具有降解纤维素、几丁质、木质素等复杂有机物的能力，是一类具有重要经济价值的丝状真菌。木霉菌在自然界的分布十分广泛，在富含有机质的土壤、植物的根际、叶围、植物残体、腐木、种子及球茎的表面都可分离得到，是根系土壤微生物的重要组成部分。其中具有代表性的棘孢木霉由于具有繁殖快、适应性强、抗菌谱广的特点，在农业生产中被广泛应用。但是，目前已有的棘孢木霉菌株对植物病害的防效仍然不是十分理想，而且多数菌株对其他化学农药，如多菌灵，不具有抗药性，阻碍了其与化学农药混用或者土壤中存留的部分化学农药影响其生防功能，限制了应用。因此，寻找新的棘孢木霉菌株，特别对一些广谱性杀菌剂不敏感的菌株，将对农业生产来讲具有重要的意义。三、
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供棘孢木霉SC012，这株棘孢木霉SC012用于促进农作物根部生长、抑制病原菌生长；本专利技术的另一个目的是提供一株棘孢木霉SC012的应用。本专利技术采用的技术方案是：这株棘孢木霉(Trichodemaasperellum)SC012，该菌株的保藏编号为CGMCCNo.17978。上述方案中棘孢木霉(Trichodemaasperellum)SC012的几丁质酶活为0.8284U/ml，β-1，3-葡聚糖酶为0.9498U/ml。上述的棘孢木霉(Trichodemaasperellum)SC012抗多菌灵，可以与多菌灵复配使用。上述棘孢木霉(Trichodemaasperellum)SC012用于促进农作物根部生长。上述方案中棘孢木霉(Trichodemaasperellum)SC012用于促进西瓜、茄子、番茄、辣椒根部生长，相比于清水对照组，使辣椒根部重量提升了139％。上述棘孢木霉(Trichodemaasperellum)SC012用于抑制植物病原菌生长。上述方案中病原菌为西瓜枯萎病菌、芒果炭疽病菌、番茄灰霉病菌、白绢病菌、苹果轮纹病菌、稻瘟病菌、芒果蒂腐病菌、小麦赤霉病菌、小麦纹枯病菌、蔓枯病菌、立枯丝核菌中的任意一种或多种。上述棘孢木霉(Trichodemaasperellum)SC012用于促进种子萌发。上述方案中棘孢木霉(Trichodemaasperellum)SC012用于促进青菜种子萌发，使青菜种子萌发率达99％。上述的棘孢木霉(Trichodemaasperellum)SC012对西瓜枯萎病防治效果达77.82％，与多菌灵混用其防治效果达92.62％。有益效果：本专利技术所提供的棘孢木霉菌株具有良好的促进种子萌发、促进农作物根部生长以及防治西瓜枯萎病。保藏说明菌种名称：棘孢木霉SC012；拉丁名：Trichodemaasperellum；保藏编号：CGMCCNo.17978；保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院；保藏日期：2019年6月19日。四、附图说明图1为本专利技术棘孢木霉菌株β-1,3-葡聚糖酶活性测定所用葡萄糖标准曲线；图2为本专利技术棘孢木霉菌株几丁质酶活性测定所用N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线。图3棘孢木霉菌株SC012抗多菌灵测定。五、具体实施方式：下面结合具体实施例详细描述本专利技术，所述实施例用于理解而不是限制本专利技术。一株新的棘孢木霉(Trichodemaasperellum)SC012，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.17978。这株棘孢木霉(Trichodemaasperellum)SC012分生孢子深绿色分生，孢子簇棉絮状；分生孢子球形、近圆形和倒卵形、分生孢子梗常呈现对称分布，单个孢子梗分支，顶端具有两个以上瓶梗，瓶梗与主轴夹角约90°距顶端较远处产生至多三级分枝；瓶梗产生于分枝顶端，2-3个呈漩涡状排列，瓶梗直、中间稍有加粗，顶部、基部缢缩。实施例1：棘孢木霉SC012的分离和保藏1、棘孢木霉菌株SC012，采集自四川省成都市的麦草地中。土样采集：土壤的采集选用五点对角线取样法。即在采集地块的对角线选5等分点，然后用深度25cm的的取土器在每一个点钻取约15-20cm的土样，再将5份土混合均匀，四分法取约50g的土样装入自封袋。在实验室内分装到50ml的塑料瓶中，4℃保存待用。木霉菌分离：采用稀释平板法，从冰箱中取10g土壤样品装入盛有90ml灭菌水和5-10粒直径4mm玻璃珠的三角瓶，然后在200r/min的摇床上摇30min。取5ml倒入盛有45ml灭菌水的三角瓶中，混匀后，再吸取5ml转入盛有45ml灭菌水的三角瓶中，充分混匀后吸取0.2ml于直径9cm的平板上，用涂布器涂抹均匀，放于28℃恒温培养箱中培养。48-72h后挑取产绿色分生孢子的菌落，转接到PDA平板上，28℃恒温培养箱中继续培养，待菌落直径长到4-5cm时再次转接PDA平板28℃恒温培养。2、棘孢木霉菌株SC012菌种保藏棘孢木霉菌株SC012于2019年6月19日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)进行真空冻干保藏，保藏编号为CGMCCNo.17978，保藏期限为30年。3、通过形态学鉴定结合分子生物学(基因测序)鉴定结果为棘孢木霉。TEF序列见序列表1。实施例2：β-1,3-葡聚糖酶活性测定DNS试剂的配制：称取酒石酸钾钠91g溶于500mL蒸馏水中，向溶液中依次加入3,5-二硝基水杨酸3.15g和NaOH20g，加热搅拌，使之溶解，再加入苯酚2.5g，无水亚硫酸钠2.5g，搅拌使之溶解，冷却后定容至1000ml，贮于棕色瓶中。β-1，3-葡聚糖酶产酶培养基配制：酵母粉3g，NaNO30.3g，MgSO4·7H2O0.05g，K2HPO40.1g，FeSO4·7H2O0.001g，KCl0.05g，用蒸馏水定容至100ml，121℃高压蒸汽灭菌。葡萄糖标准曲线的制定：准确称取经105℃烘干至恒重的无水葡萄糖1000mg，溶于蒸馏水中，定容至1000ml，得到1mg/ml的葡萄糖标准溶液。取7支带刻度的试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2ml的葡萄糖溶液，后加入3mlDNS，最后定容至5ml，置于沸水中水浴5min，冷却后加蒸馏水定容至25ml，摇匀，于540nm波长下测OD值。以葡萄糖实际含量(mg/ml)为横坐标，OD值为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，结果如附图1所示。将棘孢木霉SC012接种PDA平板培养，48h后用直径5mm打孔器打取菌落边缘三块菌饼于PD培养液中。将100mlPD培养液装入250ml三角瓶，置于28℃，180rpm摇床培养。72h后用真空抽滤器抽干菌丝，取1g菌丝接本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种棘孢木霉（

【技术特征摘要】
1.一种棘孢木霉（Trichodemaasperellum），，其特征在于：它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏编号为CGMCCNo.17978的棘孢木霉SC012。2.根据权利要求1所述的棘孢木霉（Trichodemaasperellum）SC012，其特征在于：所述的棘孢木霉（Trichodemaasperellum）SC012的几丁质酶活为0.8284U/ml，β-1，3-葡聚糖酶为0.9498U/ml。3.一种权利要求1或2所述的棘孢木霉（Trichodemaasperellum）SC012的应用，其特征在于：棘孢木霉（Trichodemaasperellum）SC012抗多菌灵，与多菌灵复配使用。4.一种权利要求1或2所述的棘孢木霉（Trichodemaasperellum）SC012的应用，其特征在于：棘孢木霉（Trichodemaasperellum）SC012用于促进农作物根部生长。5.根据权利要求4所述的棘孢木霉（Trichodemaasperellum）SC012的应用，其特征在于：所述的棘孢木霉（Trichodemaasperellum）SC012用于促进西瓜、茄子、番茄、辣椒根部生长，相比于清水处理对照组，使辣椒根部重量提升了...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘铜，薛鸣，陈迪，刘震，侯巨梅，邢梦玉，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南,46