Nkp46结合剂制造技术

本发明专利技术提供了能够与NKp46多肽结合的抗原结合蛋白。所述抗原结合蛋白在治疗以NKp46表达细胞，特别是肿瘤细胞为特征的病症方面具有增强的活性。

Nkp46 binder

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】Nkp46结合剂相关申请的交叉引用本申请要求2017年1月24日提交的美国临时申请第62/449,617号和2017年7月10日提交的美国临时申请第62/530,443号的权益，这两个申请均通过引用整体并入本文；包括任何附图和序列表。序列表的引用将本申请连同序列表一起以电子格式提交。序列表以2018年1月22日创建的命名为“NKp46-8PCT_ST25txt”的文件提供，其大小为27KB。电子格式的序列表中的信息通过引用整体并入本文。
本专利技术提供了能够与NKp46多肽结合的抗原结合蛋白。所述抗原结合蛋白在治疗以NKp46表达细胞，特别是肿瘤细胞为特征的病症方面具有增强的活性。技术背景NK细胞活性受涉及激活和抑制信号的复杂机制调节。已鉴定了几种不同的NK特异性受体，其在NK细胞介导的HLAI类缺陷靶细胞的识别和杀伤中起重要作用。天然细胞毒性受体(NCR)是指一类在NK细胞中特异性表达的活化受体蛋白，以及表达它们的基因。NCR的实例包括NKp30、NKp44和NKp46(参见，例如，Lanier(2001)NatImmunol2:23-27,Pende等(1999)JExpMed.190:1505-1516,Cantoni等(1999)JExpMed.189:787-796,Sivori等(1997)J.Exp.Med.186:1129-1136,Pessino等(1998)JExpMed.188(5):953-60；Mandelboim等(2001)Nature409:1055-1060，其全部公开内容通过引用并入本文)。这些受体是Ig超家族的成员，并且它们由特异性mAb诱导的交联导致强烈的NK细胞活化，这导致细胞内Ca++水平升高，从而触发细胞毒性和淋巴因子释放，并导致NK对许多类型的靶细胞的细胞毒性的活化。据报道，NCR，特别是NKp46的表达一般限于NK细胞。在西方国家，PCTL占侵袭性淋巴瘤的15％至20％，占所有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的7％至10％。它们通常在中年至老年患者中发生，68％的患者呈现出传播疾病的特征，其中他们中近半数(45％)为全身性症状，四分之一为骨髓(BM)受累(25.8％)以及三分之一为结外疾病(37％)。尽管采取了积极治疗，但仍有超过一半的患者死于他们的疾病。虽然某些独特的病种如果得到治疗可改善预后，但许多侵袭性PTCL的预后仍然不因使用第二代和第三代化疗方案而相对改变，并且例如，对于PTCL-NOS，5年总生存期(OS)仍然保持在25％与47％之间。因此，本领域需要针对患有PTCL的患者的改善的益处。
技术实现思路
尽管NKp46是健康个体中的NK细胞选择性细胞表面蛋白，但NKp46可在某些恶性肿瘤中由T细胞表达。免疫组织化学显示NKp46可以在外周T细胞淋巴瘤(PTCL)中以允许用抗-NKp46抗体靶向的表达水平表达。本专利技术尤其来自对人NKp46上的表位的发现，所述表位允许通过抗体特别是免疫缀合物的高效靶向来消除。通过对一系列候选抗-NKp46抗体的研究，本专利技术人鉴定了具有特别高的介导NKp46+肿瘤细胞耗尽的能力的抗体(抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1)。本文提供的测定使用药物缀合方法来进行，该方法允许将精确数目的细胞毒性剂与抗体缀合，使得混合物中基本上所有抗体携带有相同数目的细胞毒性部分(例如，药物:抗体比率(DAR)为2或4)。该方法允许比较抗体及其表位，而不会偏离不同抗体样品中DAR的差异分布。有趣的是，表现出最高活性的抗体都竞争着与细胞表面NKp46多肽上的单个区域/表位的结合。该抗体不与已知的抗-NKp46抗体竞争，表明NKp46上的区域特别适合被免疫缀合物靶向。此外，虽然选择用于与人NKp46结合的许多抗体不能指导NK细胞裂解被制作成表达人NKp46的RAJI肿瘤细胞系，但抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1显示出有希望诱导针对肿瘤细胞的ADCC的能力。鉴于该抗体作为免疫缀合物的高效力，该抗体作为ADCC诱导物的功效特别显著(鉴于具有经历细胞内内化的能力，高活性免疫缀合物往往是弱ADCC诱导物)。鉴于作为免疫缀合物的特别高的活性(如在不存在介导ADCC0的能力的情况下测试的)，该抗体可以有利地用作缺乏Fcγ介导的效应活性(例如，不介导ADCC)的免疫缀合物。然而，应当理解，该抗体还可用作进一步具有Fcγ介导的效应子活性(例如，介导ADCC)从而将两种作用模式组合起来的免疫缀合物。或者，该抗体可用作不与毒性部分缀合的“裸”ADCC介导抗体。在一个方面，如本文中在使用具有化学计量官能化的受体谷氨酰胺的抗-NKp46抗体免疫缀合物(其中混合物中的基本上所有抗体都具有特定的DAR(例如，DAR为2或4))的实施例中的抗体方面所举例说明的，该抗体尽管缺乏Fc介导的效应子功能，但仍能够以免疫缀合物的形式强效地诱导肿瘤细胞死亡。本公开的抗体可包含经修饰以减少或消除与一种或多种人Fcγ受体(例如，CD16A、CD16B、CD32A、CD32b、CD64)的结合的人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的Fc结构域(或其部分)。此种抗体将使由非肿瘤Fcγ受体表达细胞的摄取降至最低。因此，当与具有高效力/毒性的细胞毒性剂(例如，DNA小沟结合剂，诸如吡咯并苯并二氮杂剂，如实施例中所示的)缀合时，该抗体能够以比原本可能的剂量更高的剂量使用，因此可在癌症治疗中比ADCC介导免疫缀合物产生更大的功效。任选地，如本文实施例中所举例说明的，该抗体保留与人FcRn蛋白的结合，从而提供体内半衰期。有利地，被抗体结合的表位存在于如在细胞表面上表达的人和非灵长类动物NKp46多肽上，也存在于如由癌细胞表达的NKp46上。在一个方面提供了抗体或抗体片段，其与8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1中的任一种竞争着与NKp46结合和/或与8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1中的任一种结合NKp46上的相同表位。在一个方面提供了几种单克隆抗体，其结合在细胞表面上表达的SEQIDNO:1的人NKp46多肽，并且结合在细胞表面上表达的SEQIDNO:2的非人灵长类动物NKp46多肽，任选地，其中抗体包含人Fc结构域并且是耗尽抗体。在一个方面，提供了与单克隆抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1中的任一种或它们的任意组合结合相同表位和/或竞争着与NKp46多肽结合的抗原结合化合物。在一个实施方案中，提供了与选自由以下组成的组的抗体结合相同表位和/或竞争着与NKp46多肽结合的抗原结合化合物：(a)分别具有SEQIDNO:3和4的VH和VL区的抗体(8B6A)；(b)分别具有SEQIDNO:3和21的VH和VL区的抗体(8B6B)；(c)分别具有SEQIDNO:29和30的VH和VL区的抗体(9H11A)；(d)分别具有SEQIDNO:29和47的VH和VL区的抗体(9H11B)；以及(e)分别具有SEQIDNO:55和56的VH和VL区的抗体(17E1)。本专利技术人此外还鉴定了被抗体结合的人NKp46上的表位。该抗体在称为“D2”结构域的细胞外结构域中结合人NKp46。因此，在一个方面，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与选自由以下组成的组的抗体竞争着与SEQ ID NO:1的NKp46多肽结合的抗体或抗体片段：8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.01.24 US 62/449,617;2017.07.10 US 62/530,4431.一种与选自由以下组成的组的抗体竞争着与SEQIDNO:1的NKp46多肽结合的抗体或抗体片段：8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1。2.一种与选自由以下组成的组的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸结合的抗体或抗体片段：i.SEQIDNO:70的氨基酸残基101-118或101-105或100-105，或对应于SEQIDNO:70的氨基酸残基101-118或101-105或100-105的哺乳动物NKp46蛋白上的氨基酸残基；ii.SEQIDNO:70的氨基酸残基150-169，或对应于SEQIDNO:70的氨基酸残基150-169的哺乳动物NKp46蛋白上的氨基酸残基；iii.SEQIDNO:70的氨基酸残基135-151或133-151，或对应于SEQIDNO:70的氨基酸残基135-151或133-151的哺乳动物NKp46蛋白上的氨基酸残基；iv.SEQIDNO:70的氨基酸残基178-187或177-187，或对应于SEQIDNO:70的氨基酸残基178-187或177-187的哺乳动物NKp46蛋白上的氨基酸残基；v.SEQIDNO:70的氨基酸残基101-118或100-105或101-105和150-169，或对应于SEQIDNO:70的氨基酸残基101-118或100-105或101-105和150-169的哺乳动物NKp46蛋白上的氨基酸残基。3.一种包含选自由以下组成的组的高变区的抗体或抗体片段：(a)包含以下的高变区：(i)含有SEQIDNO:3的重链可变区的CDR1、2和3的重链和(ii)含有SEQIDNO:4的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链；(b)包含以下的高变区：(i)含有SEQIDNO:3的重链可变区的CDR1、2和3的重链和(ii)含有SEQIDNO:21的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链；(c)包含以下的高变区：(i)含有SEQIDNO:29的重链可变区的CDR1、2和3的重链和(ii)含有SEQIDNO:30的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链；(d)包含以下的高变区：(i)含有SEQIDNO:29的重链可变区的CDR1、2和3的重链和(ii)含有SEQIDNO:47的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链；以及(e)包含以下的高变区：(i)含有SEQIDNO:55的重链可变区的CDR1、2和3的重链和(ii)含有SEQIDNO:56的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链。4.一种单克隆抗体或抗体片段，其包含如权利要求3所述的高变区。5.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中将所述抗体与细胞毒性剂缀合。6.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含官能化的受体谷氨酰胺残基(Q)，所述官能化的受体谷氨酰胺残基包含如下结构：(Q)–L”–Y–Z或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：Q为存在于所述抗体或抗体片段的恒定区内或附接于所述恒定区的谷氨酰胺残基；L”为赖氨酸基接头，其中氮原子以仲胺形式与Q的γ碳共价键合；Y为间隔子系统；以及Z为细胞毒性剂。7.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述细胞毒性剂是DNA小沟结合剂。8.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述细胞毒性剂包含吡咯并苯并二氮杂部分。9.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含基本上不结合人FcγIIIA受体多肽的人重链恒定区。10.如权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述抗体包...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·安瑟瑞兹，马蒂厄·布莱里，劳伦特·戈捷，卡里纳·帕蒂雷尔，
申请(专利权)人：依奈特制药公司，
类型：发明
国别省市：法国,FR