检测BAF45D蛋白表达量的系统在制备鉴定或辅助鉴定脊髓是否受损的产品中的应用技术方案

本发明专利技术提供一种检测BAF45D蛋白表达量的系统在制备鉴定或辅助鉴定脊髓是否受损的产品及其应用，涉及病理学检测领域，本发明专利技术通过检测BAF45D蛋白在脊髓室管膜细胞中的表达量，可有效地判断对应的脊髓室管膜细胞是否为受损的脊髓细胞，从而有助于实现脊髓损伤准确检测的目的。

Application of BAF45D Protein Detection System in Preparing Products for Identification or Assisted Identification of Spinal Cord Injury

【技术实现步骤摘要】
检测BAF45D蛋白表达量的系统在制备鉴定或辅助鉴定脊髓是否受损的产品中的应用
本专利技术涉及创伤脊髓损伤的病理学检测领域，特别是涉及一种检测BAF45D蛋白表达量的系统在制备鉴定或辅助鉴定脊髓是否受损的产品及其应用。
技术介绍
脊髓损伤(Spinalcordinjury，SCI)致运动、感觉和自主神经功能障碍，使病人面临多种后遗症和并发症，严重损害生活质量，目前仍缺乏有效治愈手段。LancetNeurology2019年最新文章报道：(截止2016年)世界范围内SCI患者约超过2700万，新增约93万例；我国脊髓损伤患者约超过370万，新增近10万例；随着人口增长，脊髓损伤病例数逐年增高，不仅给病人带来身体和心理严重伤害，还对整个社会造成巨大经济负担；针对脊髓损伤的预防、治疗和康复是当今医学界的一大课题。近年来，干细胞技术不断进展，有望为解决这一热点和难点问题提供新的途径。目前干细胞移植治疗脊髓损伤日益受到重视，其中神经干细胞(Neuralstemcell，NSC)是重要的细胞来源之一。脊髓室管膜细胞(Spinalcordependymalcell，SCEC)属于脊髓来源神经干细胞，是脊髓损伤后细胞修复的重要资源，也是脊髓损伤后神经再生的关键。已经有报道证实脊髓内源性神经干细胞治疗脊髓损伤的较好安全性和有效性。然而，脊髓损伤后的局部微环境主要控制着脊髓室管膜细胞形成神经胶质细胞，这不利于脊髓室管膜细胞形成新的神经元。有报道称，在脊髓室管膜细胞中表达的BMP拮抗剂Noggin可以阻止脊髓室管膜细胞向胶质细胞分化，促进其向神经元分化。因此，操纵脊髓室管膜细胞，以促进脊髓室管膜细胞向神经元分化是目前的脊髓损伤后细胞治疗的关键之一。因此，了解脊髓室管膜细胞在脊髓损伤前后的变化对利用神经再生治疗脊髓损伤具有重要意义。要实现这一目标，需要找到特征性的标记物来标记脊髓室管膜细胞和神经元，特别是该标记物在脊髓损伤后脊髓室管膜细胞和神经元中的表达是否不同于正常脊髓，而明确这些表达的不同对了解脊髓损伤的病理机制和治疗都有重要意义。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题是提供一种检测BAF45D蛋白表达量的系统在制备鉴定或辅助鉴定脊髓是否受损的产品中的应用，以为明确脊髓损伤的病理机制和治疗提供指导方法。本专利技术提供一种检测BAF45D蛋白表达量的系统在制备鉴定或辅助鉴定脊髓是否受损的产品中的应用，所述检测BAF45D蛋白表达量为检测脊髓室管膜细胞中的BAF45D蛋白表达量。进一步，所述检测BAF45D蛋白表达量为检测神经元细胞中的BAF45D蛋白表达量。进一步，所述检测BAF45D蛋白表达量的系统包括通过免疫组化和免疫荧光方法检测BAF45D蛋白表达量所需的试剂和/或仪器。本专利技术还提供一种以BAF45D蛋白为标记物的系统在制备鉴定或辅助鉴定脊髓是否受损的产品中的应用，所述BAF45D蛋白为脊髓室管膜细胞中的BAF45D蛋白。进一步，所述BAF45D蛋白为神经元细胞中的BAF45D蛋白。本专利技术相比于现有技术具有以下优点：本专利技术通过检测BAF45D蛋白在脊髓室管膜细胞中的表达量，可有效地判断对应的脊髓室管膜细胞是否为受损的脊髓细胞，从而有助于实现脊髓损伤准确检测的目的。附图说明图1.大鼠脊髓损伤后后肢运动功能评分的变化图；图2.免疫组织化学检测大鼠脊髓损伤后脊髓室管膜细胞表达BAF45D蛋白的变化图；图3.免疫荧光双标检测大鼠脊髓损伤后室管膜细胞同时表达BAF45D和GFAP蛋白的变化图；图4.是免疫荧光双标检测大鼠脊髓损伤后神经元同时表达BAF45D和NEUN蛋白的变化图；图5.是westernblot检测大鼠脊髓损伤后表达神经元和神经胶质细胞相关蛋白的变化图。具体实施方式下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例11.方法1.1大鼠脊髓损伤模型建立取体重180g～220gSD大鼠，随机分组，称重，按照0.33ml/100g10％水合氯醛腹腔注射麻醉。以第10胸椎(T10)为中心，用推子推去大鼠背部皮肤。俯卧位固定大鼠四肢及头部。用碘伏消毒背部皮肤，以T10为中心，纵行切开4cm左右背部皮肤，分离皮下筋膜，切开脊椎两旁肌肉，暴露T10棘突及椎板。用微型咬骨钳咬去T10棘突及椎板，充分暴露脊髓。将一重10g铁锤底部以高2cm(2～2.5cm)处自由落体，撞击在大鼠硬膜囊上，观察到大鼠双下肢抽动，迅速伸直及回缩，打击局部脊髓由白色变为暗红色淤血水肿。用温生理盐水清洗手术野，依次缝合肌肉，筋膜和皮肤。用酒精擦除大鼠背部手术切口处血迹。待老鼠麻醉醒后，放入笼子继续饲养。术后行BBB评分，12h按压大鼠膀胱辅助排尿，待大鼠自主排尿功能恢复，术后连续3天注射抗生素，预防感染。1.2采用BBB评分方法检测大鼠后肢运动功能术后第二天进行旷场试验(设置直径至少2m的空间)。按照双盲原则，测试时间为单只4分钟，观察动物的臀、膝、踝关节行走、躯干运动及其协调情况，评判动物后肢各关节活动。BBB评分标准如下：0分：无可见后肢运动1分：一或两个关节轻微运动，通常为髋和/或膝关节2分：一个关节广泛活动或一个关节广泛活动且有另一关节轻微活动3分：两个关节广泛活动4分：后肢全部三个关节可轻微活动5分：两个关节轻微活动，第三个关节可广泛活动6分：两个关节广泛活动，第三个关节可轻微活动7分：后肢全部三个关节可广泛活动8分：非承重情况下可以爪掌面着地9分：间或爪掌面承重支撑或爪背面承重移动，无爪掌面支撑移动10分：偶见爪掌面承重移动；无前后肢协调动作11分：可较多的见到掌面承重移动，但无前后肢协调动作12分：可较多的见到掌面承重移动，偶见前后肢协调动作13分：常见掌面承重移动，可常见前后肢协调动作14分：有持续性掌面承重移动和前后肢协调动作；或出现常见的掌面移动，持续型前后肢协调动作，偶有爪背侧移动2.结果参考图1(图中D0，D1，D3，D7，D10，D14分别代表脊髓损伤后的不同时间。正常对照组，假手术组和脊髓损伤组的后肢功能评分的统计结果见图。和正常组和假手术组比较，脊髓损伤组的后肢功能评分(BBBscores)明显下降(**,P<0.01))，正常组与假手术组相比较，术后一天假手术组BBB评分无明显差异，损伤组BBB评分明显降低(P<0.01)，提示造模成功。实施例21.方法、1.1石蜡包埋1.1.1取材取新鲜组织(要求死后不超过6h，否则组织发生自溶)，动手取大小约3mm×5mm×2mm组织块。1.1.2固定常用固定液有10％中性甲醛、4％多聚甲醛等。固定时间视组织大小和性质确定，一般24-48小时。1.1.3冲洗首先将组织块从固定液中取出，放入脱水框。再将脱水框移置自来水龙头下，流水冲洗约10小时，目的是停止固定液对组织的作用，同时去除固定液，以免影响染色。1.1.4脱水脱水酒精的浓度必须由低浓度逐级升高浓度。在控制面板上设置脱水时间，一般从70％酒精(150min)→80％酒精(110min)→90％酒精(110min)→95％酒精I(110min)→95％酒精II(110min)→再到100％酒精I(100min)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测BAF45D蛋白表达量的系统在制备鉴定或辅助鉴定脊髓是否受损的产品中的应用，其特征在于，所述检测BAF45D蛋白表达量为检测脊髓室管膜细胞中的BAF45D蛋白表达量。

【技术特征摘要】
1.检测BAF45D蛋白表达量的系统在制备鉴定或辅助鉴定脊髓是否受损的产品中的应用，其特征在于，所述检测BAF45D蛋白表达量为检测脊髓室管膜细胞中的BAF45D蛋白表达量。2.根据权利要求1上述的应用，其特征在于，所述检测BAF45D蛋白表达量为检测神经元细胞中的BAF45D蛋白表达量。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述检测BAF...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘超，刘丽华，申才良，刘畅，王振振，
申请(专利权)人：安徽医科大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34