具有内切葡聚糖酶活性的多肽及其用途制造技术

本文公开了纤维素酶变体或其活性片段，以及编码所述纤维素酶变体或其活性片段的多核苷酸，其中所述纤维素酶变体或其活性片段具有内切葡聚糖酶活性。本文还公开了组合物，所述组合物包含所述纤维素酶变体或其活性片段；载体和/或宿主细胞，所述载体和/或宿主细胞包含编码所述纤维素酶变体或其活性片段的多核苷酸；和方法，所述方法用于制备和/或使用所述纤维素酶变体或其活性片段和/或含有所述纤维素酶变体或其活性片段的组合物；其中所述纤维素酶变体或其活性片段具有内切葡聚糖酶活性。

Polypeptide with endoglucanase activity and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有内切葡聚糖酶活性的多肽及其用途本申请要求提交于2016年12月16日的美国申请号62/435,340和提交于2016年12月15日的孟加拉国申请号306/2106的权益，将两篇文献的全部内容通过引用以其全文并入本文。本文公开了纤维素酶变体或其活性片段，以及编码所述纤维素酶变体或其活性片段的多核苷酸，其中这些纤维素酶变体或其活性片段具有内切葡聚糖酶活性。本文还公开了组合物，所述组合物包含所述纤维素酶变体或其活性片段；载体和/或宿主细胞，所述载体和/或宿主细胞包含编码所述纤维素酶变体或其活性片段的多核苷酸；和方法，所述方法用于制备和/或使用所述纤维素酶变体或其活性片段和/或含有所述纤维素酶变体或其活性片段的组合物；其中所述纤维素酶变体或其活性片段具有内切葡聚糖酶活性。以电子方式提交的序列表的引用该序列表的内容以ASCII文本文件格式电子提交，其文件名为20171211_NB41187WOPCT_SeqLst.txt，创建于2017年12月11日，且具有181千字节大小，并与本说明书同时提交。包含在该ASCII格式的文件中的序列表是本说明书的一部分并且以其全文通过引用并入本文。纤维素酶是糖苷水解酶，所述糖苷水解酶催化纤维素中β-1,4糖苷键的水解以将其分解成单糖或更短的多糖和寡糖。通常，纤维素酶含有被称为“接头”或“接头肽”的柔性间隔子分开的纤维素结合模块(CBM)和催化结构域。纤维素酶的催化结构域以酶学委员会(EC)和糖苷水解酶(GH)家族系统两者分类。酶委员会已经鉴定了两类纤维素酶，即内切纤维素酶(其分类为EC3.2.1.4酶，并也称为内切葡聚糖酶)、和外切纤维素酶(其分类为EC3.2.1.91酶，也称为纤维二糖水解酶或外切葡聚糖酶)。内切葡聚糖酶在无定形位点处随机切割内部键，这产生新的链末端，而外切葡聚糖酶从由内切葡聚糖酶产生的暴露链的末端切割2至4个单位。另一方面，GH家族系统基于酶结构和功能对纤维素酶进行分组，产生许多GH家族，包括例如GH家族5、6、7、8、9、10、12、16、18、19、26、44、45、48、51、61和74。已知纤维素酶可用于例如：洗涤剂组合物中；处理纺织品；作为动物饲料添加剂；在加工纸和纸浆中使纤维平滑，增强排水和脱墨；在食品工业中使从水果和蔬菜中提取和净化汁并使糖化；以及将生物质还原为葡萄糖，然后将该葡萄糖发酵并蒸馏以制备低CO2纤维素乙醇。纤维素酶用于纺织工业中通过例如去除绒毛(从纱线或织物表面突出的未缠结的纤维末端)和球粒(pill)(通过一根或多根纤维固定在织物表面上的缠结的纤维束或球)来改善含棉织物的触感和/或外观，并且还有助于防止通过随后的消耗洗涤和磨损循环形成使服装看起来磨损的球粒。该方法被称为“去球(depilling)”或“生物抛光”。纤维素酶还用于赋予含棉牛仔布例如受损的或“石洗的”外观。该方法被称为“生物打磨”，并且已经在很大程度上替代了用于生成消费者所希望的柔软褪色的牛仔布的打磨。纤维素酶用于洗涤剂组合物中，例如，以增强污垢去除、去除球粒、增亮织物颜色和软化织物。添加纤维素酶的洗涤剂组合物通常还含有其他酶(例如像蛋白酶，使得纤维素酶在这些其他酶存在下稳定是重要的)和其他洗涤剂添加剂(例如像表面活性剂)。如果纤维素酶不稳定，例如蛋白酶将随时间降解纤维素酶，从而抵消与纤维素酶相关的洗涤益处。因此，本领域仍然需要在一种或多种其他酶存在下稳定的纤维素酶(例如像蛋白酶)和/或一种或多种其他洗涤剂组分(例如像表面活性剂)。附图说明图1提供了pTTT-pyr2-stce1的质粒图。图2A-图2H提供了催化核心区域的比对，该比对是通过STCE1-WT纤维素酶及其变体与实例4中描述的其他GH45纤维素酶的MUSCLE多重序列比对产生的。图3A-图3B提供了接头区域的比对，该比对是通过STCE1-WT纤维素酶及其变体与实例4中描述的其他GH45纤维素酶的MUSCLE多重序列比对产生的。图4A-4B提供了C-末端区域的比对，该比对是通过STCE1-WT纤维素酶及其变体与实例4中描述的其他GH45纤维素酶的MUSCLE多重序列比对产生的。一个实施例涉及一种包含如下氨基酸序列的纤维素酶变体或其活性片段，所述氨基酸序列包含在对应于选自以下的SEQIDNO:1位置的两个或多个位置处的两个或更多个突变：(i)4、23、29、32、34、36、44、51、65、77、80、87、90、97、98、99、102、112、116、119、135、136、142、153、154、156、157、161、163、178、192、194、202、204、205、206、208、210、212、217、221、222、225、227、232、233、236、237、238、241、247、249、和258；(ii)4、29、32、36、51、77、80、87、90、102、112、116、135、136、142、153、154、161、163、192、204、210、217、221、225和227；(iii)4V、23L、29W、32D/G/Y、34D、36T、44V、51T、65G、77K/M、80S、87A、90A、97S、98G/Y、99E/H/Y、102K、112S/T/V、116V、119L、135T、136E/K/S、142E/P、153D、154E、156G、157D、161E/P、163V、178H、192V、194S、202E、204S、205D、206S、208H/K、210V、212S、217G/M、221L/M、222A、225K、227R、232T、233A/S、236A、237D、238D、241A/L/R、247T、249G/P和258K；(iv)4V、29W、32D、36T、51T、77K/M、80S、87A、90A、102K、112S/T、116V、135T、136E、142P、153D、154E、161P、163V、192V、204S、210V、217G、221L、225K和227R；(v)K4、S23、F29、S32、N34、Q36、K44、S51、D65、S77、N80、G87、E90、P97、V98、A99、T102、G112、T116、F119、S135、P136、A142、S153、Q154、D156、S157、A161、K163、N178、L192、A194、D202、G204、N205、F206、V208、T210、P212、S217、S221、S222、S225、K227、S232、T233、T236、S237、T238、T241、A247、S249和G258；(vi)K4、F29、S32、Q36、S51、S77、N80、G87、E90、T102、G112、T116、S135、P136、A142、S153、Q154、A161、K163、L192、G204、T210、S217、S221、S225和K227；(vii)K4V、S23L、F29W、S32D/G/Y、N34D、Q36T、K44V、S51T、D65G、S77K/M、N80S、G87A、E90A、P97S、V98G/Y、A99E/H/Y、T102K、G112S/T/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含如下氨基酸序列的纤维素酶变体或其活性片段，所述氨基酸序列包含在对应于选自以下的SEQ ID NO:1位置的两个或更多个位置处的两个或更多个突变：(i)4、23、29、32、34、36、44、51、65、77、80、87、90、97、98、99、102、112、116、119、135、136、142、153、154、156、157、161、163、178、192、194、202、204、205、206、208、210、212、217、221、222、225、227、232、233、236、237、238、241、247、249、和258；(ii)4、29、32、36、51、77、80、87、90、102、112、116、135、136、142、153、154、161、163、192、204、210、217、221、225和227；(iii)4V、23L、29W、32D/G/Y、34D、36T、44V、51T、65G、77K/M、80S、87A、90A、97S、98G/Y、99E/H/Y、102K、112S/T/V、116V、119L、135T、136E/K/S、142E/P、153D、154E、156G、157D、161E/P、163V、178H、192V、194S、202E、204S、205D、206S、208H/K、210V、212S、217G/M、221L/M、222A、225K、227R、232T、233A/S、236A、237D、238D、241A/L/R、247T、249G/P和258K；(iv)4V、29W、32D、36T、51T、77K/M、80S、87A、90A、102K、112S/T、116V、135T、136E、142P、153D、154E、161P、163V、192V、204S、210V、217G、221L、225K和227R；(v)K4、S23、F29、S32、N34、Q36、K44、S51、D65、S77、N80、G87、E90、P97、V98、A99、T102、G112、T116、F119、S135、P136、A142、S153、Q154、D156、S157、A161、K163、N178、L192、A194、D202、G204、N205、F206、V208、T210、P212、S217、S221、S222、S225、K227、S232、T233、T236、S237、T238、T241、A247、S249和G258；(vi)K4、F29、S32、Q36、S51、S77、N80、G87、E90、T102、G112、T116、S135、P136、A142、S153、Q154、A161、K163、L192、G204、T210、S217、S221、S225和K227；(vii)K4V、S23L、F29W、S32D/G/Y、N34D、Q36T、K44V、S51T、D65G、S77K/M、N80S、G87A、E90A、P97S、V98G/Y、A99E/H/Y、T102K、G112S/T/V、T116V、F119L、S135T、P36E/K/S、A142E/P、S153D、Q154E、D156G、S157D、A161E/P、K163V、N178H、L192V、A194S、D202E、G204S、N205D、F206S、V208H/K、T210V、P212S、S217G/M、S221L/M、S222A、S225K、K227R、S232T、T233A/S、T236A、S237D、T238D、T241A/L/R、A247T、S249G/P和G258K；或(viii)K4V、F29W、S32D、Q36T、S51T、S77K/M、N80S、G87A、E90A、T102K、G112S/T、T116V、S135T、P136E、A142P、S153D、Q154E、A161P、K163V、L192V、G204S、T210V、S217G、S221L、S225K和K227R；其中所述变体具有内切葡聚糖酶活性，并且其中该变体或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:1的氨基酸序列相对应来编号。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.12.15 BD 306/2016;2016.12.16 US 62/435,3401.一种包含如下氨基酸序列的纤维素酶变体或其活性片段，所述氨基酸序列包含在对应于选自以下的SEQIDNO:1位置的两个或更多个位置处的两个或更多个突变：(i)4、23、29、32、34、36、44、51、65、77、80、87、90、97、98、99、102、112、116、119、135、136、142、153、154、156、157、161、163、178、192、194、202、204、205、206、208、210、212、217、221、222、225、227、232、233、236、237、238、241、247、249、和258；(ii)4、29、32、36、51、77、80、87、90、102、112、116、135、136、142、153、154、161、163、192、204、210、217、221、225和227；(iii)4V、23L、29W、32D/G/Y、34D、36T、44V、51T、65G、77K/M、80S、87A、90A、97S、98G/Y、99E/H/Y、102K、112S/T/V、116V、119L、135T、136E/K/S、142E/P、153D、154E、156G、157D、161E/P、163V、178H、192V、194S、202E、204S、205D、206S、208H/K、210V、212S、217G/M、221L/M、222A、225K、227R、232T、233A/S、236A、237D、238D、241A/L/R、247T、249G/P和258K；(iv)4V、29W、32D、36T、51T、77K/M、80S、87A、90A、102K、112S/T、116V、135T、136E、142P、153D、154E、161P、163V、192V、204S、210V、217G、221L、225K和227R；(v)K4、S23、F29、S32、N34、Q36、K44、S51、D65、S77、N80、G87、E90、P97、V98、A99、T102、G112、T116、F119、S135、P136、A142、S153、Q154、D156、S157、A161、K163、N178、L192、A194、D202、G204、N205、F206、V208、T210、P212、S217、S221、S222、S225、K227、S232、T233、T236、S237、T238、T241、A247、S249和G258；(vi)K4、F29、S32、Q36、S51、S77、N80、G87、E90、T102、G112、T116、S135、P136、A142、S153、Q154、A161、K163、L192、G204、T210、S217、S221、S225和K227；(vii)K4V、S23L、F29W、S32D/G/Y、N34D、Q36T、K44V、S51T、D65G、S77K/M、N80S、G87A、E90A、P97S、V98G/Y、A99E/H/Y、T102K、G112S/T/V、T116V、F119L、S135T、P36E/K/S、A142E/P、S153D、Q154E、D156G、S157D、A161E/P、K163V、N178H、L192V、A194S、D202E、G204S、N205D、F206S、V208H/K、T210V、P212S、S217G/M、S221L/M、S222A、S225K、K227R、S232T、T233A/S、T236A、S237D、T238D、T241A/L/R、A247T、S249G/P和G258K；或(viii)K4V、F29W、S32D、Q36T、S51T、S77K/M、N80S、G87A、E90A、T102K、G112S/T、T116V、S135T、P136E、A142P、S153D、Q154E、A161P、K163V、L192V、G204S、T210V、S217G、S221L、S225K和K227R；其中所述变体具有内切葡聚糖酶活性，并且其中该变体或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQIDNO:1的氨基酸序列相对应来编号。2.如权利要求1所述的纤维素酶变体或其活性片段，其中在对应于两个或更多个SEQIDNO:1位置的所述两个或更多个位置处的两个或更多个突变选自：(i)142+161、4+142、36+142、4+77、77+142、87+142、87+161、142+204、4+161、161+204、102+161、142+192、142+227、153+161、4+102、4+210、29+153、32+142、36+161、36+221、36+225、87+204、90+142、116+161、135+142、135+154、135+161、136+161、204+221、4V+80S、4+153、4+221、32+36、32+142、77+142、77+153、77+161、77+221、80+142、87+153、87+192、87+221、102+136、102+142、102+154、112+135、112+142、142+153、142+217、142+221、153+210、154+161、161+192和161+221；(ii)142P+161P、4V+142P、36T+142P、4V+77K、77K+142P、87A+142P、87A+161P、142P+204S、4V+161P、161P+204S、102K+161P、142P+192V、142P+227R、153D+161P、4V+102K、4V+210V、29W+153D、32D+142P、36T+161P、36T+221L、36T+225K、87A+204S、90A+142P、116V+161P、135T+142P、135T+154E、135T+161P、136E+161P、204S+221L、4V+80S、4V+153D、4V+221L、32D+36T、32Y+142P、77M+142P、77K+153D、77K+161P、77K+221L、80S+142P、87A+153D、87A+192V、87A+221L、102K+136E、102K+142P、102K+154E、112T+135T、112S+142P、142P+153D、142P+217G、142P+221L、153D+210V、154E+161P、161P+192V和161P+221L；或(iii)A142P+A161P、K4V+A142P、Q36T+A142P、K4V+S77K、S77K+A142P、G87A+A142P、G87A+A161P、A142P+G204S、K4V+A161P、A161P+G204S、T102K+A161P、A142P+L192V、A142P+K227R、S153D+A161P、K4V+T102K、K4V+T210V、F29W+S153D、S32D+A142P、Q36T+A161P、Q36T+S221L、Q36T+S225K、G87A+G204S、E90A+A142P、T116V+A161P、S135T+A142P、S135T+Q154E、S135T+A161P、P136E+A161P、G204S+S221L、K4V+N80S、K4V+S153D、K4V+S221L、S32D+Q36T、S32Y+A142P、S77M+A142P、S77K+S153D、S77K+A161P、S77K+S221L、N80S+A142P、G87A+S153D、G87A+L192V、G87A+S221L、T102K+P136E、T102K+A142P、T102K+Q154E、G112T+S135T、G112S+A142P、A142P+S153D、A142P+S217G、A142P+S221L、S153D+T210V、Q154E+A161P、A161P+L192V和A161P+S221L。3.如权利要求1或2所述的纤维素酶变体或其活性片段，其中所述变体进一步包含选自以下的一个或多个突变：(i)在对应于位置213和257之间的任何SEQIDNO:1位置的一个或多个位置处的一个或多个氨基酸残基的缺失；(ii)在对应于选自以下的SEQIDNO:1位置的一个或多个位置处的一个或多个氨基酸残基的缺失：D177、S232、T233、S234、T235、T236、S237、T238、K239、A240、T241、S242和T243；(iii)在对应于选自以下的SEQIDNO:1位置的一个或多个位置处的一个或多个氨基酸残基的缺失：D177、S232、T233、S234、T235、T236、S237、T238、K239、A240、T241、S242和T243，其中所述缺失选自D177Z、T233Z、T233Z-S234Z-T235Z-T236Z-S237Z-T238Z-K239Z-A240Z-T241Z-S242Z-T243Z和S232Z-T233Z-S234Z-T235Z-T236Z-S237Z-T238Z-K239Z-A240Z-T241Z-S242Z-T243Z；(iv)在对应于SEQIDNO:1的位置233的位置之后一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个氨基酸残基的插入；(v)在对应于SEQIDNO:1的位置233的位置之后一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个氨基酸残基的插入，其中所述插入选自Z233.01T-Z233.02T-Z233.03S-Z233.04T-Z233.05S-Z233.06T、Z233.01T-Z233.02A-Z233.03S-Z233.04T-Z233.05K-Z233.06A-Z233.07T-Z233.08S-Z233.09T-Z233.10T、Z233.01S-Z233.02T-Z233.03T-Z233.04S-Z233.05D-Z233.06K-Z233.07A-Z233.08T-Z233.09S-Z233.10T-Z233.11T、Z233.01S-Z233.02T-Z233.03T-Z233.04D-Z233.05T-Z233.06K-Z233.07A-Z233.08T-Z233.09S-Z233.10T-Z233.11T和Z233.01S-Z233.02T-Z233.03T-Z233.04S-Z233.05T-Z233.06K-Z233.07A-Z233.08T-Z233.09S-Z233.10T-Z233.11T；以及(vi)(i)至(iv)的组合。4.如任一前述权利要求所述的纤维素酶变体或其活性片段，其中在对应于两个或更多个SEQIDNO:1位置的所述两个或更多个位置处的两个或更多个突变选自：K4V-Q36T-S77M-T102K-Q154E-N178H-S225K-S232Z-T233Z-S234Z-T235Z-T236Z-S237Z-T238Z-K239Z-A240Z-T241Z-S242Z-T243Z、K4V-K44V-S77K-E90A-S135T-A142P-Q154E-L192V-V208H-S221L-S232Z-T233Z-S234Z-T235Z-T236Z-S237Z-T238Z-K239Z-A240Z-T241Z-S242Z-T243Z-A247T、K4V-N80S-G87A-Q154E-A161P-G204S-S221L-T233Z-S234Z-T235Z-T236Z-S237Z-T238Z-K239Z-A240Z-T241Z-S242Z-T243Z、S32Y-T102K-A142P-G204S-V208H-T233Z-S234Z-T235Z-T236Z-S237Z-T238Z-K239Z-A240Z-T241Z-S242Z-T243Z-A247T、K4V-K44V-S77K-N80S-T102K-G112T-S135T-A142P-L192V-T233Z-S234Z-T235Z-T236Z-S237Z-T238Z-K239Z-A240Z-T241Z-S242Z-T243Z、S77M-A142P-K163V-V208H-T233Z-S234Z-T235Z-T236Z-S237Z-T238Z-K239Z-A240Z-T241Z-S242Z-T243Z-A247T、...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·R·博特，D·A·埃斯特尔，N·潘迪，S·普莱斯鲁斯，J·姚，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：美国,US