本发明专利技术涉及由以ICLC登录号ICLC PD n°16001保藏的杂交瘤细胞产生的靶向CD43独特唾液酸糖基化的癌症相关表位的单克隆小鼠抗体。此外，本发明专利技术涉及抗体，其包含含有互补决定区CDRH1，CDRH2和CDRH3的重链可变区，和含有互补决定区CDRL1，CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中CDRH1，CDRH2，CDRH3，CDRL1，CDRL2和CDRL3分别包含氨基酸序列GFTFSSFGMH，YISSGSGNFYYVDTVKG，STYYHGSRGAMDY，SASSSVSSMYWY，DTSKMAS和QQWSSYPPIT。另外，本发明专利技术涉及识别相同表位的抗体。
Monoclonal antibodies targeting specific sialic acid glycosylated cancer-related epitopes of CD43
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向CD43的独特唾液酸糖基化的癌症相关表位的单克隆抗体本专利技术涉及由以ICLC登录号ICLCPDn°16001保藏的杂交瘤细胞产生的单克隆小鼠抗体，相关抗体和结合分子及其用途。专利技术背景CD43是跨膜蛋白和限于造血谱系细胞的特异性白细胞标志物。然而，在这些细胞中，CD43在大多数外周和骨髓来源的细胞成分中广泛表达。CD43的前体形式迁移，表观分子量为54kD。在其成熟形式中，CD43是高度糖基化的，具有115至200kD的分子量。总体而言，CD4+胸腺细胞和单核细胞表达115kD形式，而活化的CD4+和CD8+-T细胞，B细胞，嗜中性粒细胞和血小板表达130kD形式。CD43参与多种功能，例如细胞粘附，细胞凋亡和迁移(OstbergJR等，Immunologytoday.1998；19:546–50)。糖蛋白，例如糖基化的CD43，在细胞信号传导，免疫识别和细胞-细胞相互作用中起主要作用，因为它们的聚糖分支赋予结构可变性和对凝集素配体的结合特异性(OhtsuboK.等，Cell2006；126,855–867)。粘蛋白型糖蛋白的特征在于高含量的O-连接的碳水化合物链(O-聚糖)，并且在造血细胞和上皮细胞的膜上分泌或表达。O-聚糖生物合成在高尔基体中起始，N-乙酰基-半乳糖胺(GalNAc)通过UDP-N-乙酰基-D-半乳糖胺：多肽N-乙酰半乳糖胺基转移酶(GalNAc-转移酶)与丝氨酸或苏氨酸残基连接，产生O-聚糖的Tn抗原结构。通过添加其他碳水化合物(例如半乳糖，岩藻糖和唾液酸)由组织特异性糖基转移酶催化O-连接的聚糖分支的后续延伸，这导致O-聚糖结构的复杂阵列的合成，该结构不同于O-连接的碳水化合物链的性质和长度(WopereisS.等，Clin.Chem2006；52,574–600)。另外，寡糖可以通过唾液酸化，岩藻糖基化，硫酸化，甲基化或乙酰化来修饰。O-聚糖结构的截短以及特定O-聚糖的异常表达发生在癌细胞中，表明异常糖基化可通过改变细胞信号传导，粘附和抗原性而促进癌症进展(HakomoriS.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2002；99,10231–10233,BrockhausenI.EMBORep.72006；599–604)。癌胚抗原(OA)主要是糖蛋白和一种或多种基因的产物，其通常仅在胎儿发育期间高度表达，在分化过程中逐渐被抑制，并因此不在成体组织中表达。它们在成人中的重新表达是癌症中发生的受控基因异常激活的结果。癌胚表位(OE)是抗体识别的OA的一部分。鉴定OA或特定的癌胚表位(OE)，其表达仅限于癌症组织，可能不仅用于检测早期致癌过程，而且最重要的是，在开发新的人类癌症免疫治疗方法中可能是至关重要的。本专利技术的目的是提供一种允许检测OE和开发新型免疫治疗方法的抗体。该问题由根据本专利技术的抗体解决。实施例中显示的数据表明，由于胎儿组织中限制性表达和恶性肿瘤中再表达的特定模式，由根据本专利技术保藏的杂交瘤细胞产生的抗体识别的表位可以被认为是OE。因此，后者代表了用于治疗人类癌症的创新性免疫治疗策略的潜在合适靶标。此外，开发了嵌合抗原受体(CAR)，其包含基于本专利技术抗体的结合分子的scFv，其与包含CD3ζ链，T细胞受体的信号传导区和两个共刺激结构域CD28和41BB的细胞内区域连接。表达根据本专利技术的CAR的CD3+淋巴细胞诱导针对表达由根据本专利技术保藏的杂交瘤细胞产生的抗体识别的表位的细胞的显著细胞毒性。尽管已经部分地描述了本专利技术的鼠抗体的作用(Tassone等，TissueAntigens，1994；DeLaurentiis等，MolCelProteomics2011；Cecco等，TissueAntigens，1998；DeLaurentiis等，IntJBiolMacromol，2006；Tassone等，IntJOncol，2002；Tassone等，AnticancerRes，2002)，公众从未知晓抗体本身或其序列以及其结合的表位。
技术实现思路
提供了由以ICLCPDn°16001保藏的杂交瘤细胞产生的小鼠抗体。另外，提供了一种抗体，其与由以ICLCPDn°16001保藏的杂交瘤细胞产生的抗体识别相同的表位。本专利技术进一步涉及抗体，其包含含有互补决定区CDRH1，CDRH2和CDRH3的重链可变区，和含有互补决定区CDRL1，CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中CDRH1，CDRH2，CDRH3，CDRL1，CDRL2和CDRL3分别包含氨基酸序列GFTFSSFGMH，YISSGSGNFYYVDTVKG，STYYHGSRGAMDY，SASSSVSSMYWY，DTSKMAS和QQWSSYPPIT。优选地，所述抗体是单克隆抗体。此外，提供了衍生自由以ICLCPDn°16001保藏的杂交瘤细胞产生的抗体或本专利技术的上述抗体的结合分子。此外，提供了嵌合抗原受体，其包含与包含CD3ζ链的细胞内区域，T细胞受体的信号传导区域和两个共刺激结构域CD28和41BB连接的本专利技术的scFv结合分子。此外，提供了表达载体，其包含核酸序列，其编码根据本专利技术的嵌合抗原受体，根据本专利技术的抗体或根据本专利技术的结合分子。本专利技术进一步提供CD3+淋巴细胞，NK淋巴细胞，细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞，γ-δ淋巴细胞或NKT细胞，其包含根据本专利技术的嵌合抗原受体或根据本专利技术的表达载体。提供药物组合物，其包含根据本专利技术的抗体或根据本专利技术的结合分子或本专利技术的CD3+淋巴细胞，NK淋巴细胞，细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞，γ-δ淋巴细胞或NKT细胞。提供核酸，其编码根据本专利技术的抗体或根据本专利技术的结合分子。提供了产生根据本专利技术的抗体的杂交瘤细胞。提供了产生根据本专利技术的抗体的方法，其包括从以ICLCPDn°16001保藏的杂交瘤细胞中分离所述抗体。提供了鉴定或分离T细胞急性淋巴细胞白血病细胞，T淋巴瘤细胞，瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症细胞或肿瘤相关巨噬细胞的方法，其包括使包含所述细胞的细胞样品与根据本专利技术的抗体或根据本专利技术的结合分子接触。本专利技术提供了产生表达本专利技术的嵌合抗原受体的CD3+淋巴细胞，NK淋巴细胞，细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞，γ-δ淋巴细胞或NKT细胞的方法，包括将本专利技术的表达载体导入所述CD3+淋巴细胞，NK淋巴细胞，细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)，γ-δ淋巴细胞或NKT细胞。具体实施方式在第一方面，本专利技术涉及由以ICLCPDn°16001保藏的杂交瘤细胞产生的单克隆小鼠抗体。杂交瘤细胞于2016年8月4日以登录号ICLCPDn°16001保藏于高级生物技术中心(ABC)(CentroBiotecnologieAvanzate)，中间细胞系收集(InterlayCellLineCollection)(ICLC)，LargoRosanna，10，16132热那亚，意大利。以下给出的实施例中测试了抗体。如实施例中所示，抗体结合CD43上的特定唾液酸糖基化表位。在该第一方面，本专利技术进一步涉及抗体，其包含含有互补决定区CDRH1，CDRH2和CDRH3的重链可变区，和含有互补决定区CDRL1，CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中CDRH1，CDRH2，CDRH3，CDRL1，C本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种由以ICLC登录号ICLC PD n°16001保藏的杂交瘤细胞产生的单克隆小鼠抗体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.12.22 DE 102016015379.21.一种由以ICLC登录号ICLCPDn°16001保藏的杂交瘤细胞产生的单克隆小鼠抗体。2.一种抗体，其包含含有互补决定区CDRH1，CDRH2和CDRH3的重链可变区，和含有互补决定区CDRL1，CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中CDRH1，CDRH2，CDRH3，CDRL1，CDRL2和CDRL3分别包含氨基酸序列GFTFSSFGMH，YISSGSGNFYYVDTVKG，STYYHGSRGAMDY，SASSSVSSMYWY，DTSKMAS和QQWSSYPPIT。3.一种抗体，其与如权利要求1或2所述的抗体识别相同的表位，优选其中所述抗体是单克隆抗体或双特异性抗体，或其中所述抗体是人、嵌合或人源化抗体，更优选是权利要求1所述的抗体的嵌合或人源化抗体。4.如权利要求3所述的抗体，其中所述抗体能够诱导针对以下细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)：T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞的EGILT3亚组，T细胞淋巴母细胞淋巴瘤细胞和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(WM)细胞。5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中所述抗体识别包含与人CD43发生O-连接的GalNAc的表位。6.一种结合分子，其衍生自如权利要求1-5所述的抗体，优选选自单链抗体，优选选自scFv，scFv的多聚体，例如双抗体，三抗体或四抗体，抗体片段，优选Fab，Tandab和柔性体。7.一种嵌合抗原受体，其包含与细胞内结构域连接的如权利要求5所述的结合分子，优选包含一个或多个信号传导结构域。8.一种表达载体，其包含编码如权利要求7所述的嵌合抗原受体，如权利要求1-5中任一项所述的抗体或如权利要求6所述的结合分子的核酸序列，优选地，其中所述载体是病毒载体或非病毒载体，更优选地是病毒载体，甚至更优选地是慢病毒载体。9.一种CD3+淋巴细胞，NK淋巴细胞，细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞，γ-δ淋巴细胞或NKT细胞，包含如权利要求6所述的嵌合抗原受体或如权利要求8所述的表达载体。10.一种药物组合物，其包含如权利要求1-5中任一项所述的抗体或如权利要求6所述的结合分子或如权利要求7所述的CD3+淋巴细胞，CD3+淋巴细胞，N...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·塔松，
申请(专利权)人：卡坦扎罗麦格纳格拉西亚大学，
类型：发明
国别省市：意大利,IT
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