猪塞内卡病毒新型基因工程疫苗，其制备方法与应用技术

本发明专利技术揭示了一种免疫组合物，其包含：猪塞内卡病毒结构蛋白VP3和VP1蛋白，以及，猪塞内卡病毒结构蛋白VP2和/或VP4蛋白。进一步的，所述免疫组合物还可包括猪塞内卡病毒结构蛋白VP0。所述免疫组合物可用于制备猪塞内卡病毒新型基因工程亚单位疫苗，该疫苗的抗原性、免疫原性和功能与天然蛋白质相似，表达水平较高，免疫原性强，对动物没有致病性，并且该疫苗可以通过生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，大大降低了疫苗生产成本。

New Genetically Engineered Vaccine of Porcine Seneca Virus, Its Preparation Method and Application

【技术实现步骤摘要】
猪塞内卡病毒新型基因工程疫苗，其制备方法与应用
本专利技术涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种猪塞内卡病毒新型基因工程疫苗，其制备方法与应用，属于动物免疫药物

技术介绍
塞内卡病毒(SenecaValleyVirus,SVV)病是由小RNA病毒科的A型塞内卡病毒(SVVA)引起的动物传染病，主要感染猪，不同年龄阶段的猪均易感。SVV感染引起猪的鼻吻、蹄部冠状带的水泡病变，同时伴有跛行、厌食和嗜睡等临床表现，新生仔猪死亡率显著增加。SVV引起的感染与口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎等引起的临床症状无法区分，其传播特性与口蹄疫病毒类似，且与口蹄疫病毒存在混合感染，严重干扰了口蹄疫的防控。由于该病是一种新发现的动物传染病，至今全球仍无商品疫苗可用。虽然有有一些研究人员进行了相关重组病毒样颗粒(Viruslikepaticles,VLPs)疫苗研究，但其提出的方案均或多或少存在不足，难以满足实际应用的需求。例如，有一些研究人员使用大肠杆菌分别表达VP1、VP0和VP3三个蛋白，然后体外组装。但这种方式的蛋白纯化难度大，蛋白体外组装效率非常低。亦有研究人员使用几个杆状病毒分别表达VP1、VP0和VP3，然后几个病毒共感染Sf9细胞从而共表达这三个蛋白，但这种方式需要病毒感染复数很大，同一个细胞需要同时感染2个或者2个以上的病毒，存在效率低的问题。此外，还有研究人员使用昆虫细胞表达P1、P2、P3或者P1与3BC蛋白，并期望通过表达结构蛋白与蛋白酶，蛋白酶酶切结构蛋白成VP1、VP3和VP0，然而这种方式表达的蛋白酶有毒，导致结构蛋白产量低，并且蛋白酶酶切效率低，产生的酶切后的VP1、VP3和VP0蛋白少。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种猪塞内卡病毒新型基因工程疫苗，其制备方法与应用，以克服现有技术中的不足。为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：本专利技术实施例提供了一种免疫组合物，其包含：猪塞内卡病毒结构蛋白VP3蛋白，猪塞内卡病毒结构蛋白VP1蛋白，以及猪塞内卡病毒结构蛋白VP2蛋白和/或VP4蛋白；所述VP3蛋白的编码基因包括序列如SEQIDNO:1所示的核酸分子或者与SEQIDNO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子；所述VP1蛋白的编码基因包括序列如SEQIDNO:4所示的核酸分子或者与SEQIDNO:4的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子；所述VP2蛋白的编码基因包括序列如SEQIDNO:3所示的核酸分子或者与SEQIDNO:3的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子；所述VP4蛋白的编码基因包括序列如SEQIDNO:5所示的核酸分子或者与SEQIDNO:5的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子。在本专利技术的一些实施方式中，所述VP3蛋白包含SEQIDNO:23的氨基酸序列或者与SEQIDNO:23的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。在本专利技术的一些实施方式中，所述VP1蛋白包含SEQIDNO:18的氨基酸序列或者与SEQIDNO:18的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。在本专利技术的一些实施方式中，所述VP2蛋白包含SEQIDNO:17的氨基酸序列或者与SEQIDNO:17的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。在本专利技术的一些实施方式中，所述VP4蛋白包含SEQIDNO:19的氨基酸序列或者与SEQIDNO:19的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。在本专利技术的一些实施方式中，所述免疫组合物还包含猪塞内卡病毒结构蛋白VP0蛋白，所述VP0蛋白的编码基因包括序列如SEQIDNO:2所示的核酸分子或者与SEQIDNO:2的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子。在本专利技术的一些实施方式中，所述VP0蛋白包含SEQIDNO:16的氨基酸序列或者与SEQIDNO:16的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。在本专利技术的一些实施方式中，所述VP1蛋白的表达框的序列如SEQIDNO:21所示或者与SEQIDNO:21的核苷酸序列95％以上相同。在本专利技术的一些实施方式中，所述VP2蛋白的表达框的序列如SEQIDNO:20所示或者与SEQIDNO:20的核苷酸序列95％以上相同。在本专利技术的一些实施方式中，所述VP4蛋白的表达框的序列如SEQIDNO:22所示或者与SEQIDNO:22的核苷酸序列95％以上相同。在本专利技术的一些较为具体的实施方式中，所述免疫组合物为包含所述VP3、VP1、VP2蛋白的组合物。在本专利技术的一些较为具体的实施方式中，所述免疫组合物为包含所述VP3、VP1、VP4蛋白的组合物。在本专利技术的一些较为具体的实施方式中，所述免疫组合物为包含所述VP3、VP1、VP2、VP4蛋白的组合物。在本专利技术的一些较为具体的实施方式中，所述免疫组合物为包含所述VP3、VP1、VP2、VP0蛋白的组合物。在本专利技术的一些较为具体的实施方式中，所述免疫组合物为包含所述VP3、VP1、VP4、VP0蛋白的组合物。在本专利技术的一些较为具体的实施方式中，所述免疫组合物为包含所述VP3、VP1、VP2、VP4、VP0蛋白的组合物。本专利技术实施例还提供了一种制备前述任一种免疫组合物的方法，其包括以下步骤：S1、将猪塞内卡病毒结构蛋白的基因均克隆到同一穿梭载体上，得到重组穿梭载体；S2、将重组穿梭载体转化到含有杆状病毒基因组质粒的DH10Bac菌中，重组穿梭载体中目的基因表达框定向插入杆状病毒基因组质粒中，获得含有目的基因表达框的重组杆状病毒基因组质粒；S3、将重组杆状病毒基因组质粒转染昆虫细胞获得重组杆状病毒；S4、将获得的重组杆状病毒接种昆虫细胞，在反应器中大规模生产重组猪塞内卡病毒结构蛋白；S5、将S4步骤中获得的重组猪塞内卡病毒结构蛋白加入到佐剂中，即得所述免疫组合物。在本专利技术的一些实施方式中，所述步骤S1包括：将猪塞内卡病毒结构蛋白VP3的编码基因，猪塞内卡病毒结构蛋白VP1的表达框，以及选自猪塞内卡病毒结构蛋白VP2、VP4中的任意一种或两种的表达框均克隆到同一穿梭载体上，即得到所述重组穿梭载体。在本专利技术的一些实施方式中，所述步骤S1包括：将猪塞内卡病毒结构蛋白VP3的编码基因，猪塞内卡病毒结构蛋白VP1的表达框，以及选自猪塞内卡病毒结构蛋白VP2、VP4中的任意一种或两种的表达框以及猪塞内卡病毒结构蛋白VP0的编码基因均克隆到同一穿梭载体上，即得到所述重组穿梭载体。在本专利技术的一些较为优选的实施方式中，所述步骤S1包括：将猪塞内卡病毒结构蛋白VP3、VP0的编码基因以及以及猪塞内卡病毒结构蛋白VP1、VP2、VP4的表达框均克隆到同一穿梭载体上，即得到所述的重组穿梭载体。在本专利技术的一些实施方式中，所述穿梭载体包括但不限于pFastBac1，pVL1393或pFastBacDual等，其中可以优选采用pFastBacDual。在本专利技术的一些实施方式中，所述昆虫细胞包括但不限于Sf9、HighFive、S2或Sf21细胞等，其中可以优选采用Sf9。本专利技术的前述实施方式中，使用一个病毒同时共表达优化了的VP1和VP3蛋白以及选自VP2、VP4、VP0中的任意一个、二个或三个蛋白。更为优选的，通过使用一个病毒同时共表达VP1、VP3、VP2、VP4以及VP0五个蛋白。VP1、VP3和VP0蛋白能够本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫组合物，其特征在于包含：猪塞内卡病毒结构蛋白VP3蛋白，猪塞内卡病毒结构蛋白VP1蛋白，以及猪塞内卡病毒结构蛋白VP2蛋白和/或VP4蛋白；所述VP3蛋白的编码基因包括序列如SEQ ID NO:1所示的核酸分子或者与SEQ ID NO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子；所述VP1蛋白的编码基因包括序列如SEQ ID NO:4所示的核酸分子或者与SEQ ID NO:4的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子；所述VP2蛋白的编码基因包括序列如SEQ ID NO:3所示的核酸分子或者与SEQ ID NO:3的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子；所述VP4蛋白的编码基因包括序列如SEQ ID NO:5所示的核酸分子或者与SEQ ID NO:5的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子。

【技术特征摘要】
1.一种免疫组合物，其特征在于包含：猪塞内卡病毒结构蛋白VP3蛋白，猪塞内卡病毒结构蛋白VP1蛋白，以及猪塞内卡病毒结构蛋白VP2蛋白和/或VP4蛋白；所述VP3蛋白的编码基因包括序列如SEQIDNO:1所示的核酸分子或者与SEQIDNO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子；所述VP1蛋白的编码基因包括序列如SEQIDNO:4所示的核酸分子或者与SEQIDNO:4的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子；所述VP2蛋白的编码基因包括序列如SEQIDNO:3所示的核酸分子或者与SEQIDNO:3的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子；所述VP4蛋白的编码基因包括序列如SEQIDNO:5所示的核酸分子或者与SEQIDNO:5的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子。2.根据权利要求1所述的免疫组合物，其特征在于：所述VP3蛋白包含SEQIDNO:23的氨基酸序列或者与SEQIDNO:23的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列；和/或，所述VP1蛋白包含SEQIDNO:18的氨基酸序列或者与SEQIDNO:18的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的免疫组合物，其特征在于：所述VP2蛋白包含SEQIDNO:17的氨基酸序列或者与SEQIDNO:17的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列；和/或，所述VP4蛋白包含SEQIDNO:19的氨基酸序列或者与SEQIDNO:19的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的免疫组合物，其特征在于：所述免疫组合物还包含猪塞内卡病毒结构蛋白VP0蛋白，所述VP0蛋白的编码基因包括序列如SEQIDNO:2所示的核酸分子或者与SEQIDNO:2的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子。5.根据权利要求4所述的免疫组合物，其特征在于：所述VP0蛋白包含SEQIDNO:16的氨基酸序列或者与SEQIDNO:16的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。6.根据权利要求1所述的免疫组合物，其特征在于：所述VP1蛋白的表达框的序列如SEQIDNO:21所示或者与SEQIDNO:21的核苷酸序列95％以上相同；和/或，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹文龙，孔迪，滕小锘，易小萍，张大鹤，
申请(专利权)人：苏州世诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32