一种减轻铜绿假单胞菌性角膜炎症的药物制造技术

本发明专利技术公开了一种减轻铜绿假单胞菌性角膜炎症的药物，通过施用β2肾上腺素能受体抑制剂抑制角膜中铜绿假单胞菌的细菌增殖和毒力表达，减少角膜中浸润的中性粒细胞数量和炎性因子表达，以减轻角膜炎严重程度。本发明专利技术能抑制角膜中细菌增殖和改善角膜中炎症反应，从而减轻铜绿假单胞菌性角膜炎的炎症反应，是一种新型减轻铜绿假单胞菌性角膜炎的药物。

A drug to alleviate Pseudomonas aeruginosa keratitis

【技术实现步骤摘要】
一种减轻铜绿假单胞菌性角膜炎症的药物
本专利技术属于微生物学和眼科医学
，特别是涉及一种减轻铜绿假单胞菌性角膜炎症的药物。
技术介绍
铜绿假单胞菌(铜绿假单胞菌)是角膜炎的常见病原体，占传染性角膜炎病例的近38％。铜绿假单胞菌性角膜溃疡被认为比其他细菌性角膜溃疡更严重，并且通过化脓浸润迅速发展，可导致角膜糜烂、穿孔，导致视力丧失。这些后果是由宿主的炎症反应和细菌毒素共同引起的。由铜绿假单胞菌引起的角膜炎的发病机理包括毒力因子、细胞外产物以及铜绿假单胞菌的细胞结构，例如蛋白酶，外毒素A，生物膜和鞭毛。在这些因子中，蛋白酶，包括金属蛋白酶如碱性蛋白酶，弹性蛋白酶A和弹性蛋白酶B，激活金属蛋白酶，诱导角膜基质的破坏。铜绿假单胞菌的鞭毛呈现与角膜上皮粘附和侵袭有关的运动，以及免疫反应的激活。感染后，循环中性粒细胞通常是第一个渗入发炎组织以消除感染微生物的细胞。这些中性粒细胞引发炎性细胞因子的产生，如白细胞介素-1β(IL-1β)，巨噬细胞炎症蛋白2(MIP-2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)，同时引起杀菌机制，如活性氧(ROS)和活性氮物种。这些炎症介质促进细菌清除，但如果不加控制，会导致组织损伤和角膜穿孔。此时，即使从角膜清除细菌，常规疗法(例如抗生素治疗)也可能经常无法逆转由炎症引起的组织损伤。因此，开发新策略以平衡细菌杀灭和炎症过度反应至关重要。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种减轻铜绿假单胞菌性角膜炎症的药物，能完全解决上述现有技术的不足之处。本专利技术的目的通过下述技术方案来实现：一种减轻铜绿假单胞菌性角膜炎症的药物，包括β2肾上腺素能受体抑制剂，所述β2肾上腺素能受体抑制剂的结构是为：通过施用β2肾上腺素能受体抑制剂抑制角膜中铜绿假单胞菌的细菌增殖和毒力表达，减少角膜中浸润的中性粒细胞数量和炎性因子表达，以减轻角膜炎严重程度。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过使用β2肾上腺素能受体抑制剂，不仅能有效抑制角膜中铜绿假单胞菌的增殖和毒力，而且能抑制角膜中中性粒细胞的浸润和炎性细胞因子的表达，有效减轻铜绿假单胞菌性角膜炎的病情，是一种新型减轻铜绿假单胞菌性角膜炎的药物。附图说明图1是铜绿假单胞菌角膜感染24/48/72小时，使用不同肾上腺素能受体抑制剂在裂隙灯纤维镜下的角膜照片；图2是角膜感染后24/48/72小时，角膜炎临床评分图；图3是感染后24/72小时，对照组和ICI118551处理组角膜细菌载量图；图4是感染后24/72小时，对照组和ICI118551处理组角膜细菌毒力：外毒素、绿脓菌素、弹性蛋白酶Elisa检测结果图；图5是感染后24小时，对照组和ICI118551处理组角膜细菌毒力基因表达图(q-PCR)；图6是感染后24小时，对照组和ICI118551处理组角膜中性粒粒细胞检测结果图(髓过氧化物酶Elisa检测)；图7是感染后24小时，对照组和ICI118551处理组角膜炎性因子表达：TNF-α、IL-1β、MIP-2Elisa检测结果图。具体实施方式下面结合具体实施例和附图对本专利技术作进一步的说明。一种减轻铜绿假单胞菌性角膜炎症的药物，包括β2肾上腺素能受体抑制剂，所述β2肾上腺素能受体抑制剂的结构是为：通过施用β2肾上腺素能受体抑制剂ICI118551抑制角膜中铜绿假单胞菌细菌增殖和毒力表达，减少角膜中浸润的中性粒细胞数量和炎性因子表达，以减轻角膜炎严重程度。组织损伤会导致机体儿茶酚胺分泌增加，增加对机会性感染的感染率，去甲肾上腺素是儿茶酚胺的一种，研究证明，去甲肾上腺素可通过促进铜绿假单胞菌增殖和毒力，加重感染，另外，免疫细胞，包括中性粒细胞，巨噬细胞，在细胞膜上表达α/β-肾上腺素能受体，神经递质如去甲肾上腺素通过细胞表面受体调节免疫细胞的浸润，因此本专利技术使用肾上腺素能受体抑制剂，观察其对铜绿假单胞菌性角膜炎症的抑制作用。为研究本专利技术的具体效果，特实施了以下实验，实验步骤如下：1、选用雌性C57BL/6小鼠(年龄，8周；体重，20-25g)购自北京维通利华生物有限公司。将小鼠饲养在山东眼科研究所动物房的无病原体环境中，环境温度为20℃-26℃，环境湿度为40％-70％；2、动物模型：用戊巴比妥钠麻醉小鼠并置于立体显微镜下，使用无菌25号针头，在小鼠左眼角膜表面做三个1mm长的平行伤口，仅划破角膜上皮，然后将含有105CFU铜绿假单胞菌(ATCC19660)的5μl等分试样局部施用于角膜表面，这样便完成在上皮损伤的角膜中进行细菌接种；3、感染后每天使用裂隙灯照相。使用以下原则对角膜疾病进行分级：0分：部分或完全覆盖瞳孔的明显或轻微的不透明度；1分：部分或完全覆盖前段的轻微不透明度；2分：密集的不透明度部分或完全覆盖瞳孔；3分：覆盖整个前段的密集不透明度；4分：角膜穿孔或角膜瘘。4、药物使用：在接种后6小时，对局部角膜施用肾上腺素能受体抑制剂，为进行实验数据对比，实验中选用的肾上腺素能受体抑制剂有酚妥拉明(α1+α2受体拮抗剂)、阿替洛尔(β1受体拮抗剂)、ICI118551(β2受体拮抗剂)、噻吗洛尔(β1+β2受体拮抗剂)和SR58894A(β3受体拮抗剂)，并持续施用3天，在感染后1,2和3天对角膜疾病进行评分；5、活细菌载量检测角膜细菌数量；6、ELISA检测髓过氧化物酶、TNF-α、IL-1β、MIP-2、铜绿假单胞菌外毒素、弹性蛋白酶、绿脓菌素；7、q-PCR检测小鼠炎症细胞因子：铜绿假单胞菌毒力因子：figD/E/L，lasA/B/I/R，pqsR，pslR，rhiI/R。为保证数据准确性，上述实验进行三次，且每次实验选用五只眼睛，每只眼睛使用不同的肾上腺素能受体抑制剂。在附图中，与对照组相比，*表示P<0.05,**表示P<0.01,***表示P<0.001，经由图1、图2可以明显看出，使用β2肾上腺素能受体抑制剂ICI118551的小鼠，其角膜炎症与其他对照组相比，角膜炎症明显减轻，所以β2肾上腺素能受体抑制剂是所有肾上腺素能受体抑制剂中效果最好的。由图3,4,5可以看出，β2肾上腺素受体抑制剂ICI118551对角膜中细菌数量和毒力的明显抑制作用，由图6,7可以看出，经ICI118551处理的角膜，中性粒细胞和炎性因子明显减少。综上所述：β2肾上腺素能受体抑制剂ICI118551滴眼明显抑制了铜绿假单胞菌性角膜炎的严重度，其作用机制主要是抑制了角膜中细菌的数量和毒力，同时减少角膜中性粒细胞和炎性因子浸润，有效的保持了角膜的透明度。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例而已，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种减轻铜绿假单胞菌性角膜炎症的药物，其特征在于：包括β2肾上腺素能受体抑制剂，所述β2肾上腺素能受体抑制剂的结构是为：

【技术特征摘要】
2019.06.27 CN 20191056858831.一种减轻铜绿假单胞菌性角膜炎症的药物，其特征在于：包括β2肾上腺素能受体抑制...

【专利技术属性】
技术研发人员：周庆军，马修彬，谢立信，王群，
申请(专利权)人：山东省眼科研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37