羟基酪醇在制备治疗或预防牙周炎药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及羟基酪醇在制备治疗或预防牙周炎药物中的应用，本发明专利技术提供了羟基酪醇的新用途，本发明专利技术通过体外细胞实验和动物实验有效证明了羟基酪醇在治疗牙周炎方面的显著效果，为牙周炎治疗提供了一种新方向。

Application of Hydroxytyrosol in the Preparation of Drugs for the Treatment or Prevention of Periodontitis

【技术实现步骤摘要】
羟基酪醇在制备治疗或预防牙周炎药物中的应用
本专利技术涉及药物用途领域，具体涉及到羟基酪醇在制备治疗或预防牙周炎药物中的应用。
技术介绍
牙周炎是发生在牙周支持组织的慢性炎症性及破坏性疾病，发生率高，影响严重，治疗难度大。牙周炎不仅影响口腔功能，还可作为糖尿病、动脉粥样硬化和不良妊娠等全身性疾病的危险因素，危害全身健康。因而如何有效防治牙周炎的发生、延缓疾病进展已成为医学中尚未攻克的重大难题之一。氧化应激是指机体在遭遇各种有害刺激时，活性氧自由基过剩或抗氧化剂缺乏引起的氧化抗氧化系统失衡状态，导致细胞组织损伤。研究证实，当牙周组织受到局部菌斑刺激时会释放以TNF-α、IL－6、IL－1β等为主的炎性细胞因子，引起中性粒细胞和巨噬细胞应答激活，促进ROS产生。过量的ROS可引起生物大分子(DNA、脂质和蛋白质)损伤及功能改变，导致细胞功能异常甚至死亡，促使牙周软硬组织破坏。与此同时，ROS正反馈地促进破骨细胞生成并促使骨吸收，同时诱发成骨细胞的凋亡及成骨功能的损伤，最终导致牙周炎牙槽骨的吸收，牙齿松动脱落。因此，如何降低过度ROS积累、对抗氧化应激环境，抑制破骨细胞分化并预防成骨细胞损伤，保护其成骨分化能力是目前有效防治牙周炎的解决方案。羟基酪醇，一种天然多酚类化合物，主要存在于初榨的橄榄油或者红葡萄酒中。在市场上，它是唯一被欧洲食品安全局认可的多酚，具有多种有益的药理作用，即抗氧化，抗炎，改善内质网应激，保护线粒体功能和骨组织。但是羟基酪醇是否通过抗氧化，保护线粒体功能抑制氧化应激环境下的破骨细胞分化及成骨细胞凋亡，目前尚未报道。本专利技术通过探究羟基酪醇的具体作用机制提出一种羟基酪醇的新用途。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的提供羟基酪醇在制备治疗或预防牙周炎药物中的应用。本专利技术进一步还提供羟基酪醇在制备羟基酪醇在制备抑制牙槽骨吸收药物中的应用。本专利技术进一步还提供羟基酪醇在制备抑制牙周组织细胞凋亡药物中的应用。作为进一步改进，所述羟基酪醇的有效量为5-25mg/kg。作为进一步改进，所述羟基酪醇的有效量为20mg/kg。作为进一步改进，所述药物由作为活性成分的羟基酪醇和药学上可接受的载体和/或添加剂组成。作为进一步改进，所述药物的剂型是药学上可接受的口服剂型、敷料剂型或者注射剂型。作为进一步改进，所述药物的剂型是药学上可接受的口服剂型包括颗粒剂、片剂、胶囊剂、液体剂。作为进一步改进，所述药物的剂型是药学上可接受的敷料剂型为凝胶剂型。本专利技术的有益效果为，本专利技术提供了羟基酪醇的新用途，本专利技术通过体外细胞实验和动物实验有效证明了羟基酪醇在治疗牙周炎方面的显著效果，为牙周炎治疗提供了一种新方向。下面结合专利技术附图和具体实施方式对本专利技术做进一步介绍。附图说明图1为羟基酪醇对破骨细胞分化的影响，A：MTT检测RAW264.7在不同浓度羟基酪醇(1、2.5、5、10、20uM)处理72h后细胞活性；B、C：在含有50ng/mlRANKL的培养基中分别加入不同浓度羟基酪醇，诱导5天后TRAP染色结果及统计分析(细胞核≥3个为破骨细胞)，与C组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，NS：差异无统计学意义；图2为MitoQ对破骨细胞分化的影响，A、B：在含有50ng/mlRANKL的培养基中分别加入不同浓度MitoQ，诱导5天后TRAP染色结果及统计分析(细胞核≥3为破骨细胞)，与RANKL组比较，##P<0.01；图3为羟基酪醇对破骨细胞相关基因的影响，A-E：在含有50ng/mlRANKL的培养基中加入20uM羟基酪醇，诱导3天后，RT-PCR检测破骨细胞分化相关基因TRAP，CTSK，MMP9，NFATC1和DC-STAMP的mRNA表达水平，与C组比较，***P<0.001，NS：差异无统计学意义；与RANKL组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001；图4为羟基酪醇对H2O2诱导前成骨细胞(MC3T3-E1)细胞损伤的保护作用，A-B：20uM羟基酪醇预培养2h对H2O2(700uM，6h)引起细胞损伤的TUNEL染色结果(x200)及统计分析，与C组比较，***P<0.001，##P<0.01；图5为羟基酪醇对H2O2抑制MC3T3-E1细胞成骨相关基因mRNA表达的保护作用，A-D：H2O2(700uM，6h)处理后诱导分化3天及20uM羟基酪醇预培养2h再加入H2O2(700uM，6h)处理后诱导分化3天的mRNA表达水平(RUNX2，ALP,COL-1和OCN)，与C组比较，***P<0.001；与H2O2组比较，###P<0.001；图6为羟基酪醇挽救H2O2诱导成骨细胞分化功能损伤的ALP，ARS染色结果，与C组比较，***P<0.001，NS：差异无统计学意义；与RANKL组比较，##P<0.01，###P<0.001；图7A-B为分别在含有50ng/mlRANKL的培养基中加入20uM羟基酪醇、1uMMitoQ，诱导3天后，线粒体ROS荧光染色及统计分析；图8A-B为H2O2(700uM，6h)处理组，羟基酪醇预培养(20uM，2h)加H2O2(700uM，6h)处理组和MitoQ预培养(1uM，2h)加H2O2(700uM，6h)处理组，线粒体ROS荧光染色及统计分析，与C组比较，***P<0.001，###P<0.001；图9各组大鼠牙槽骨吸收情况，A:C组、P组、P+HT(10mg/kg)组、P+HT(20mg/kg)组牙槽骨吸收情况颊鄂侧观；B：测量釉牙骨质界(ACJ)至牙槽嵴(AC)顶距离，定量分析牙槽骨骨丧失高度(n＝16/每组)。检测值以均数±标准差表示，与C组比较，*p<0.01；与P组比较，#p<0.05；图10为各组牙龈组织细胞凋亡情况，A:C组、P组、P+HT(10mg/kg)组、P+HT(20mg/kg)组牙龈组织细胞TUNEL染色结果；B：C组、P组、P+HT(10mg/kg)组、P+HT(20mg/kg)组牙龈组织细胞凋亡统计分析，与C组比较，*p<0.01；与P组比较，#p<0.05。具体实施方式下面将结合附图以及实施例和效果例对本专利技术做进一步的详述，而非限制本专利技术。本实施方式文本为了使得书面整洁，将部分名称用缩写代替，本文本中出现缩写指代的中文名称如下表所示实施例1羟基酪醇对破骨细胞的抑制作用1.1羟基酪醇抑制破骨细胞分化1.1.1实验分组取小鼠破骨细胞系RAW264.7作为破骨前体细胞，通过RANKL诱导破骨细胞分化，在诱导过程中通过分别添加羟基酪醇、线粒体靶向抗氧化剂MitoQ来设定实验组进行体外破骨细胞的培养，其具体实验组的设置包括：RANKL组、RANKL+羟基酪醇组、RANKL+MitoQ组，其实验组的具体设置如表一所示；表一实验组设置培养方法为：将RAW264.7细胞以2000个/孔的密度接种于96孔板，加入DMEM完全培养基，按照实验组的设置依次加入对应的添加剂，并依次置于37℃、体积分数5％CO2培养箱内培养5-6d，3天换液1次。1.1.2实验步骤(1)在实验本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.羟基酪醇在制备治疗或预防牙周炎药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.羟基酪醇在制备治疗或预防牙周炎药物中的应用。2.根据权利要求1所述的羟基酪醇在制备治疗或预防牙周炎药物中的应用，其特征在于：羟基酪醇在制备抑制牙槽骨吸收药物中的应用。3.根据权利要求1所述的羟基酪醇在制备治疗或预防牙周炎药物中的应用，其特征在于：羟基酪醇在制备抑制牙周组织细胞凋亡药物中的应用。4.根据权利要求1或2或3所述的羟基酪醇在制备治疗或预防牙周炎药物中的应用，其特征在于：所述羟基酪醇的有效量为5-25mg/kg。5.根据权利要求4所述的羟基酪醇在制备治疗或预防牙周炎药物中的应用，其特征在于：所述羟基酪醇的有效量为20mg/kg。6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄盛斌，赵树蕃，张肖榕，毛亦欣，季颖慧，陈扬，
申请(专利权)人：温州医科大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：浙江,33