基于代谢组学的维药昆仑雪菊质量评价方法技术

本发明专利技术公开了一种基于代谢组学的维药昆仑雪菊质量评价方法。该方法包括下述步骤：1)用体积比为85:15的甲醇‑水提取昆仑雪菊，得到样品溶液；2)制备标准品溶液；3)建立了昆仑雪菊的LC‑MS分析方法，并进行了方法学验证。在此基础上，对昆仑雪菊样本进行了代谢组学分析，获得了昆仑雪菊不同部位、不同地区代谢组信息，并采取多元统计分析的方法对各代谢组之间的差异进行了分析。上述研究结果表明，基于LC‑MS的代谢组学分析方法可区分不同产地，不同品种的昆仑雪菊以及昆仑雪菊的不同部位，有望为昆仑雪菊的全面质量控制提供一种新的技术和方法。此外，本研究也为昆仑雪菊的资源开发与合理利用提供了重要参考信息。

METABOLOGICAL METHOD FOR QUALITY ASSESSMENT OF KUNLUN Snow Chrysanthemum

【技术实现步骤摘要】
基于代谢组学的维药昆仑雪菊质量评价方法
本专利技术属于中药制剂质量评价
，具体涉及一种基于代谢组学的维药昆仑雪菊质量评价方法。
技术介绍
药用植物是人类赖以生存和发展的重要物质基础。随着医药科学分析技术的不断发展，通过寻找药用植物的活性成分而发现新药源是新药研发的基础，药用植物凭借种类的多样性而可以为新药的研制提供丰富的原材料。药用植物具有化学成分种类繁多含量差异大等特点，需全面、系统、有效分析药用植物所含有的小分子而阐明药用植物物质基础及其功能。基于LC-MS技术的代谢组学分析方法可以全面、快速、有效地研究药用植物内源性小分子，为药用植物质量控制进行合理评价。昆仑雪菊(Kunlunchrysanthemum),学名叫两色金鸡菊(Coreopsistinctoria),为菊科金鸡菊属(Coreopsis),一年生草本植物，具有花期短、采摘难的特点[1]。早在秦汉时期《神农百草经》便将雪菊列为百草上品。长期以来，昆仑雪菊被当地居民当花茶饮用，经世代传承。昆仑雪菊主要分布在和田地区的昆仑山区，已开始在新疆和田、喀什、达坂城地区产业化种植。昆仑雪菊作为维吾尔医药惯用药材之一，具有降血压、抗炎、抗衰老、抗肿瘤等药理功效具有良好的开发和研究价值。昆仑雪菊化学成分在种类和含量上表现出应有丰富性。截止目前20余类，300多种天然成分被分离和鉴定[张彦丽,韩艳春,阿依吐伦·斯马义.分光光度发测定维吾尔药昆仑雪菊中总皂苷的含量[J].西北药学杂志,2011,26(2):87-88]，主要有挥发性成分和非挥发性成分。其中挥发性成分以萜烯类、醛酮类、芳烃衍生化合物为主，非挥发性成分主要有多糖、氨基酸、黄酮类、总皂苷等，以上提到的这些成分中黄酮类、氨基酸类、多糖类在昆仑雪菊里占据主要含量和有效特征成分[景玉霞,兰卫.不同产地昆仑雪菊总黄酮含量测定[J].新疆中医药,2012,30(5):62-64]。昆仑雪菊日常生活中以花茶饮用，饮用过程中发现具有抑制身体血压升高的作用。对此，梁淑红等[过利敏,张平,李士明,张谦.雪菊化学成分分析、提取、鉴定及其生物活性研究进展[J].食品科学,2014,35(7):298-304]人进行了昆仑雪菊在溶剂萃取条件下得到不同提取物的研究，采用高血脂小鼠体外胸主动脉血管环为标本从而以累积性地给药观察了不同提取物作用下获得的昆仑雪菊对基础状态和氯化钾血管环张力的不同表现。最终得到不同提取物下昆仑雪菊对基础状态血管环没有任何影响而对氯化钾血管环有不同程度舒张作用的结果。以上提取物中氯仿提取物部位影响作用最强从而得出氯仿部位中有着很强舒张血管的结论。抗肿瘤研究中，帕尔哈提等[杨博,张薇.新疆雪菊化学及研究进展[J].化学工程与装备,2013,11:140-141]人按照昆仑雪菊不同提取条件分别获得总黄酮提取物、纯化物、总多糖的形式对结肠癌细胞株(HCT116细胞、CACO-2细胞)进行干预。实验利用MTT法检测细胞生长抑制率最终测定细胞凋亡率，尤其是昆仑雪菊可以加快结肠癌细胞株凋亡率。从而得到昆仑雪菊总黄酮纯化物抗肿瘤活性强于总黄酮提取物和总多糖，而且可以有效控制结肠癌细胞株增值的研究结果。近些年有关昆仑雪菊主要分析方法研究包括钱宗耀等人[钱宗耀,安冉,华震宇,等.固相微萃取气质联用分析新疆雪菊的挥发性成分[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(7):82-85]利用固相微萃取气质联用探究了昆仑雪菊挥发性成分。符继红等人[符继红,史岷山.新疆昆仑雪菊中微量元素的测定及溶出性研究[J].食品科技,2013,38(10):297-300]选用昆仑雪菊测定了微量元素及溶出性的分析研究。杜鹃[杜鹃,吴忠红.高效液相色谱法测定不同产地的昆仑雪菊中绿原酸和芦丁含量比较研究[J].河南工业大学,2015,36(2):71-73]等人通过高效液相色谱法测定出了不同产地栽培的昆仑雪菊中绿原酸和芦丁含量以及彼此之间含量上的差异。上述研究所用到的分析方法分别以柱色谱、分光光度计、原子吸收光谱作为分析工具对昆仑雪菊进行了质量评价。随着社会经济的快速发展，间接地影响了市场对昆仑雪菊的需求，导致野生昆仑雪菊无法全面满足市场需求量的局面。所以，新疆部分地区已开始专门建立昆仑雪菊种植生产基地以便满足市场需求量。但是，关于野生昆仑雪菊和人工种植的昆仑雪菊在有效化学成分含量上以及药效物质基础标准上有着不同的看法。人工种植昆仑雪菊是否可以代替野生昆仑雪菊使用仍存争议。因此，需要对不同产地种植的昆仑雪菊进行全面的质量评价建立全面、系统化的分析方法，从而对不同产地的昆仑雪菊在安全性、有效性和质量可控性方面进行质量评价。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种基于代谢组学的维药昆仑雪菊质量评价方法。本专利技术所提供的基于代谢组学的维药昆仑雪菊质量评价方法，包括下述步骤：1)样品溶液的制备：取昆仑雪菊不同组织器官的干粉末，分别用有机溶剂提取、超声、离心、干燥，得到干燥物，然后将所述干燥物进行复溶、超声、涡旋、离心、过滤，得到昆仑雪菊不同组织器官样品的上清液；所述提取用的有机溶剂为体积比为85:15的甲醇-水的混合溶剂；2)标准品溶液的制备：每种标准品各称取2～3mg，分别用体积比为50:50甲醇-水溶液溶解，配制成1mg/mL的不同的标准品溶液，最后稀释配制成1μg/mL混合标准溶液；所述标准品选自下述任意一种：咖啡酸、芹黄素、山柰酚、绿原酸、金丝桃苷、山柰素；所述混合标准溶液中含有下述六种标准品：咖啡酸、芹黄素、山柰酚、绿原酸、金丝桃苷、山柰素；所述混合标准溶液中每种标准品的浓度为1μg/mL；3)采用液相色谱-串联质谱法分别对所述昆仑雪菊不同组织器官样品的上清液和标准品溶液进行测定，得到昆仑雪菊不同组织器官样品和标准品的总离子流色谱图；对得到的色谱数据进行处理，获得含有质荷比(m/z)、保留时间(Retentiontime)及峰面积信息的二维数据阵，然后采用多变量统计分析得到差异变量，根据差异代谢物的高分辨质荷比及串联质谱数据，结合标准品谱图的比对分析，即得到昆仑雪菊不同组织器官的植物代谢组的差异。上述方法步骤1)中，所述昆仑雪菊不同组织器官选自下述任意一种：昆仑雪菊整体或花柄或花萼或花瓣。所述昆仑雪菊不同组织器官的干粉末与所述有机溶剂的配比为(100±1)mg：1mL。进行所述复溶之前所述超声的时间为30min；进行所述复溶之前所述离心的转速为13400r/min，所述离心的时间为10min；所述复溶的溶剂为体积比50:50的乙腈-水的混合溶剂；所述昆仑雪菊不同组织器官的干粉末与所述复溶溶剂的配比为(100±1)mg：1mL。进行所述复溶之后所述超声的时间可为5min；进行所述复溶之后所述涡旋的转速为1200rpm，涡旋的时间为5min；进行所述复溶之后所述离心的转速可为13400r/min，所述离心的时间为10min。上述方法步骤3)中，所述液相色谱条件如下：Ultimate3000系列超高效液相色谱，AcquityUPLCHSST3色谱柱，规格：100mm×2.1mm，1.8μm；流动相：A:含0.1％甲酸的水溶液，B:含0.1％甲酸的乙腈溶液；流速：0.3mL/min，进样量：10μL；每次进样前用初始流动相平衡8min，洗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于代谢组学的昆仑雪菊质量评价方法，包括下述步骤：1)取昆仑雪菊不同组织器官的干粉末，分别用有机溶剂提取、超声、离心、干燥，得到干燥物，然后将所述干燥物进行复溶、超声、涡旋、离心、过滤，得到昆仑雪菊不同组织器官样品的上清液；所述提取用的有机溶剂为体积比为85:15的甲醇‑水的混合溶剂；2)每种标准品各称取2～3mg，分别用体积比为50:50甲醇‑水溶液溶解，配制成1mg/mL的不同的标准品溶液，最后稀释配制成1μg/mL混合标准溶液；所述标准品选自下述任意一种：咖啡酸、芹黄素、山柰酚、绿原酸、金丝桃苷、山柰素；所述混合标准溶液中含有下述六种标准品：咖啡酸、芹黄素、山柰酚、绿原酸、金丝桃苷、山柰素；所述混合标准溶液中每种标准品的浓度均为1μg/mL；3)采用液相色谱‑串联质谱法分别对所述昆仑雪菊不同组织器官样品的上清液和标准品溶液进行测定，得到昆仑雪菊不同组织器官样品和标准品的总离子流色谱图；对得到的色谱数据进行处理，获得含有质荷比、保留时间及峰面积信息的二维数据阵，然后采用多变量统计分析得到差异变量，根据差异代谢物的高分辨质荷比及串联质谱数据，结合标准品谱图的比对分析，即得到昆仑雪菊不同组织器官的植物代谢组的差异。...

【技术特征摘要】
1.一种基于代谢组学的昆仑雪菊质量评价方法，包括下述步骤：1)取昆仑雪菊不同组织器官的干粉末，分别用有机溶剂提取、超声、离心、干燥，得到干燥物，然后将所述干燥物进行复溶、超声、涡旋、离心、过滤，得到昆仑雪菊不同组织器官样品的上清液；所述提取用的有机溶剂为体积比为85:15的甲醇-水的混合溶剂；2)每种标准品各称取2～3mg，分别用体积比为50:50甲醇-水溶液溶解，配制成1mg/mL的不同的标准品溶液，最后稀释配制成1μg/mL混合标准溶液；所述标准品选自下述任意一种：咖啡酸、芹黄素、山柰酚、绿原酸、金丝桃苷、山柰素；所述混合标准溶液中含有下述六种标准品：咖啡酸、芹黄素、山柰酚、绿原酸、金丝桃苷、山柰素；所述混合标准溶液中每种标准品的浓度均为1μg/mL；3)采用液相色谱-串联质谱法分别对所述昆仑雪菊不同组织器官样品的上清液和标准品溶液进行测定，得到昆仑雪菊不同组织器官样品和标准品的总离子流色谱图；对得到的色谱数据进行处理，获得含有质荷比、保留时间及峰面积信息的二维数据阵，然后采用多变量统计分析得到差异变量，根据差异代谢物的高分辨质荷比及串联质谱数据，结合标准品谱图的比对分析，即得到昆仑雪菊不同组织器官的植物代谢组的差异。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述昆仑雪菊不同组织器官选自下述任意一种：昆仑雪菊整体或花柄或花萼或花瓣。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述昆仑雪菊不同组织器官的干粉末与所述有机溶剂的配比为(100±1)mg：1mL；进行所述复溶之前所述超声的时间为30min；进行所述复溶之前所述离心的转速为13400r/min，所述离心的时间为10min；所述复溶的溶剂为体积比50:50的乙腈-水的混合溶剂。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述昆仑雪菊不同组织器官的干粉末与所述复溶溶剂的配比为(100±1)mg：1mL；进行所述复溶之后所述超声的时间为5min；进行所述复溶之后所述涡旋的转速为1200r...

【专利技术属性】
技术研发人员：再帕尔·阿不力孜，乃比·阿不来提，王中华，何秉淑，谢冰，
申请(专利权)人：中央民族大学，
类型：发明
国别省市：北京,11