利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基制造技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，公开了利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基，其按照如下工艺制备而得：步骤1）对复方红衣补血口服液药渣进行发酵处理，步骤2）水解制备氮源组分，步骤3）制备链霉菌培养基。该培养基成本低廉，适合链霉菌发酵制备链霉素，降低了企业成本。

Streptomyces Culture Medium Prepared from Drug Residue of Compound Hongyi Buxue Oral Liquid

【技术实现步骤摘要】
利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基
本专利技术属于微生物
，具体涉及利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基。
技术介绍
链霉菌是生产链霉素的主要菌种。链霉素是一种从灰链霉菌的培养液中提取的抗菌素，属于氨基糖甙碱性化合物，是治疗结核杆菌的主要药物。由于链霉素肌肉注射的疼痛反应比较小，适宜临床使用，只要应用对象选择得当，剂量又比较合适，大部分病人可以长期注射。链霉菌发酵法制备链霉素过程中，需要用到培养基，而培养基一般采用酵母膏、葡萄糖等组分，成本高昂；随着近年来原料成本的提升，相关制药企业利润大幅降低，甚至面临亏损的问题。需要研究成本低廉的培养基。申请人之前的专利技术“一种处理复方红衣补血口服液药渣的环保工艺”，通过对复方红衣补血口服液药渣进行回收利用，选择粪肠球菌-产黄纤维单胞菌的组合方式对复方红衣补血口服液药渣发酵，以降解药渣制备菌体蛋白，其中，处理物中蛋白含量接近30%，纤维素降解率达到40%左右，营养价值较高，适合应用到饲料蛋白中；但是饲料蛋白的附加值较低，申请人继续对处理物进行了进一步研究，以提升应用价值。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺陷，本专利技术在中国专利“一种处理复方红衣补血口服液药渣的环保工艺”的基础上进行改进，其目的在于提供利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基，该培养基成本低廉，适合链霉菌发酵制备链霉素，降低了企业成本。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基，其按照如下工艺制备而得：步骤1）对复方红衣补血口服液药渣进行发酵处理，步骤2）水解制备氮源组分，步骤3）制备链霉菌培养基。进一步地，所述链霉菌培养基按照如下工艺制备而得：步骤1）对复方红衣补血口服液药渣进行发酵处理：将粪肠球菌种子液按照20%的接种量接种到含有复方红衣补血口服液药渣的发酵原料，发酵24-48h后，再按照20%的接种量接入产黄纤维单胞菌种子液，继续发酵72-96h，得到发酵产物；步骤2）水解制备氮源组分：将发酵产物置于高速剪切机中剪切，然后以频率为30kHz的超声波处理10-15min，再添加氨水调整pH为7.5，然后添加中性蛋白酶和碱性蛋白酶，100rpm搅拌酶解7-9h，再加热至95℃灭酶5min，然后1000rpm离心3-5min，收集上层液体，即得氮源组分；步骤3）制备链霉菌培养基：以下组分按照重量百分比计：氮源组分30%，葡萄糖3.0%，硫酸铵0.5%，磷酸二氢钾0.1%，磷酸氢二钾0.1%，七水硫酸镁0.01%，七水硫酸亚铁0.01%，其余为水。优选地，所述步骤1）中，整个发酵过程中，控制发酵温度为32℃，每隔2h进行通风搅拌，并且通过鼓热空气吹动水份雾化来增加空气湿度。优选地，所述步骤2）中，中性蛋白酶和碱性蛋白酶的添加量分别为500U/ml和300U/ml。优选地，所述剪切速度为10000rpm，剪切时间为120s。优选地，所述含有复方红衣补血口服液药渣的发酵原料的制备方法为：取药渣处理物40kg，糖蜜10kg，磷酸二氢钾0.1kg，磷酸氢二钾0.1kg，七水硫酸镁0.01kg，七水硫酸亚铁0.01kg，加水定容至100L，搅拌均匀，灭菌，即得。优选地，所述药渣处理物的制备方法为：将复方红衣补血口服液药渣在无菌条件下，进行挤压脱水至含水量为20%，然后以频率25kHz的超声波处理5min，得到药渣处理物。本专利技术还要求保护上述的链霉菌培养基在发酵生产链霉素中的应用。进一步地，所述应用为：将灰色链霉菌接入到链霉菌培养基进行发酵生产链霉素。与现有技术相比，本专利技术取得的有益效果主要包括但是并不限于以下：复方红衣补血口服液药渣中含有大量的植物纤维，按照常规的处理方式，首先采用能够高效降解纤维素的菌株进行降解纤维素，包括木霉与产黄纤维单胞菌，但是纤维素降解缓慢，大部分菌株甚至不能够生长，原因可能是，复方红衣补血口服液药渣中的某些蛋白或者脂溶性物质具备拮抗作用，从而抑制菌株的生长；本专利技术首先对药渣经过粪肠球菌的处理，以解除对产黄纤维单胞菌的抑制因素除；固体发酵中，氧的供应是好氧菌存在的问题，本专利技术选择的粪肠球菌和产黄纤维单胞菌，两种菌株对氧的依赖程度并不高，属于兼性厌氧菌或微好氧菌，厌氧条件下可以生长，但是在好氧条件下，增殖效果更好；本专利技术发酵处理过程中，采用间歇通风搅拌以及热空气补湿的方法，既能够给微生物提供氧气，有利于热量的释放，还能够为微生物提供湿润的生长环境。本专利技术在裂解发酵物过程中，首先利用高速剪切机剪切和超声波配合处理，提高了菌体破碎率；本专利技术采用复合酶解的方式，提高了酶解率，水解液中的可溶性蛋白、多肽以及氨基酸含量较高，可以提高链霉菌发酵使用的酵母浸膏组分，降低了发酵成本，节省了原料开支，工业附加值更高，实现了药渣变废为宝。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合本申请具体实施例，对本专利技术进行更加清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。实施例1复方红衣补血口服液药渣的获得参照“CN101411784A,一种复方红衣补血口服液的制备工艺”，具体如下：取木耳20g加16倍重量的水，浸泡30分钟，加热微沸2小时，滤过，药渣再加10倍重量的水，加热微沸1小时，滤过，收集截留物1，合并滤液，浓缩至密度为1.02；取花生红衣100g、枸杞子100g、大枣200g，加水煎煮两次，第一次加10倍重量的水，第二次加8倍重量的水，每次加热微沸1小时，滤过，收集截留物2，合并煎液，滤液浓缩至密度为1.07，再加乙醇使浓缩液中乙醇含量重量比达65％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇，补加等重量的水，搅匀，静置8小时，滤过；然后在滤液中加入木耳浓缩液、蜂蜜30g和蔗糖140g，煮沸20分钟，滤过，滤液放冷至室温再加入柠檬酸2g，加水调至1000ml，分装，灭菌，即得复方红衣补血口服液；合并截留物1和截留物2，得到复方红衣补血口服液药渣。实施例2利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基，其按照如下工艺制备而得：配置粪肠球菌种子培养基：酵母膏5g、葡萄糖20g、硫酸铵5g、磷酸二氢钾0.5g、七水硫酸镁0.01g，加水定容至1000ml，用氨水调pH至7.0-7.5；115-118℃，蒸汽灭菌20分钟，降温至33℃，即得；往粪肠球菌种子培养基中接入粪肠球菌，通气培养，通气量为0.2VVM，搅拌转速为100r/min，培养温度为33℃，培养至粪肠球菌的浓度为1×109CFU/mL；配置产黄纤维单胞菌种子培养基：葡萄糖30g，酵母粉10g，磷酸氢二钾1g，七水硫酸镁0.5g，氯化钠0.1g，七水硫酸亚铁0.01g，搅拌均匀，加水定容至1000ml，115～118℃，蒸汽灭菌20分钟，降温至30℃，即得；将产黄纤维单胞菌接入产黄纤维单胞菌种子培养基，通气培养，通气量为0.2VVM，搅拌转速为100r/min，培养温度为30℃，培养至产黄纤维单胞菌的浓度为1×109CFU/mL；将复方红衣补血口服液药渣在无菌条件下，进行挤压脱水至含水量为20%，然后以频率25本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基，其按照如下工艺制备而得：步骤1）对复方红衣补血口服液药渣进行发酵处理，步骤2）水解制备氮源组分，步骤3）制备链霉菌培养基。

【技术特征摘要】
1.利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基，其按照如下工艺制备而得：步骤1）对复方红衣补血口服液药渣进行发酵处理，步骤2）水解制备氮源组分，步骤3）制备链霉菌培养基。2.根据权利要求1所述的链霉菌培养基，其特征在于，所述链霉菌培养基按照如下工艺制备而得：步骤1）对复方红衣补血口服液药渣进行发酵处理：将粪肠球菌种子液按照20%的接种量接种到含有复方红衣补血口服液药渣的发酵原料，发酵24-48h后，再按照20%的接种量接入产黄纤维单胞菌种子液，继续发酵72-96h，得到发酵产物；步骤2）水解制备氮源组分：将发酵产物置于高速剪切机中剪切，然后超声波处理10-15min，再添加氨水调整pH为7.5，然后添加中性蛋白酶和碱性蛋白酶，100rpm搅拌酶解7-9h，再加热至95℃灭酶5min，然后1000rpm离心3-5min，收集上层液体，即得氮源组分；步骤3）制备链霉菌培养基：以下组分按照重量百分比计：氮源组分30%，葡萄糖3.0%，硫酸铵0.5%，磷酸二氢钾0.1%，磷酸氢二钾0.1%，七水硫酸镁0.01%，七水硫酸亚铁0.01%，其余为...

【专利技术属性】
技术研发人员：林凡友，郭增光，胡百忠，毛传伟，
申请(专利权)人：翔宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37