长裂苦苣菜生物碱初级分离物及其分离方法和应用技术

本发明专利技术属于农业生物技术领域，具体涉及长裂苦苣菜生物碱初级分离物及其分离方法和应用。本发明专利技术通过超声方法长裂苦苣菜提取其中的生物碱成分，并利用制备色谱分离得到若干具有抗氧化能力的初级分离物，对长裂苦苣菜中生物碱类化合物的开发利用具有重要的现实意义。

Primary Isolates of Alkaloids from Sonchus chinensis and Their Separation Method and Application

【技术实现步骤摘要】
长裂苦苣菜生物碱初级分离物及其分离方法和应用
本专利技术属于农业生物
，具体涉及长裂苦苣菜生物碱初级分离物及其分离方法和应用。
技术介绍
长裂苦苣菜(SonchusbrachyotusDC.)系菊科苦苣菜属一年生草本植物，又名苦菜、苦曲菜、苦曲曲、苦苣菜、苣荬菜、苦荬菜等。长裂苦苣菜药用历史悠久，据我国最早的医学专著《神农本草经》和李时珍的《本草纲目》记载，其味苦性寒，有清热解毒，消肿排脓，凉血化瘀，清肺止咳，益肝利尿，消食和胃之功效，用以治疗急性痢疾、肠炎、痔疮肿痛等症。长裂苦苣菜中的化学成分有β-谷甾醇，木犀草素，芹菜素和槲皮素，还有一些挥发油成分，研究表明，长裂苦苣菜具有抗菌、将血压、降胆固醇、抗肿瘤、治疗肝炎和抗氧化等多方面作用。但迄今为止，长裂苦苣菜中有效的抗氧化活性成分尚不清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种长裂苦苣菜生物碱初级分离物。本专利技术的再一目的在于提供上述初级分离物的分离方法。本专利技术的再一目的在于提供上述初级分离物的应用。根据本专利技术具体实施方式的长裂苦苣菜生物碱初级分离物，其由包括以下步骤的方法制备得到：(1)制备长裂苦苣菜提取物；(2)采用制备色谱法分离步骤(1)得到的长裂苦苣菜提取物，具体条件如下：采用C18色谱柱，以0.1％甲酸-水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速10mL/min，柱温27-33℃，波长为255-265nm，梯度洗脱程序为在0-5min的时间范围内，流动相A的体积由95％变为60％，流动相B的体积由5％变为40％；在5-15min的时间范围内，流动相A的体积由60％变为30％，流动相B的体积由40％变为70％；在15-30min的时间范围内，流动相A的体积由30％变为20％，流动相B的体积由70％变为80％；在30-35min的时间范围内，流动相A的体积保持为20％，流动相B的体积保持为80％；收集峰高范围在420-2000mAU的馏分即得。在反相色谱柱中，长裂苦苣菜生物碱提取物流出色谱柱的顺序是极性较强的组分先于极性弱的组分被洗脱出来，也就是说长裂苦苣菜生物碱提取物流出色谱柱的顺序受流动相极性的影响。同时，不同的流动相组成、梯度程序、流速、柱温等都会导致流动相的极性发生变化，进而导致馏分中有效成分的组成不同。本专利技术采用C18色谱柱分离生物碱，可在高pH条件下分离得到峰形良好、不拖尾的色谱峰，不但具有极高的载样量，而且可以保持高界面动力学系数，获得较好的柱效。根据本专利技术具体实施方式的长裂苦苣菜生物碱初级分离物，步骤(2)中，柱温为30℃，波长为260nm。根据本专利技术具体实施方式的长裂苦苣菜生物碱初级分离物，长裂苦苣菜提取物由包括以下步骤的方法制备得到：以75％乙醇为溶剂，将长裂苦苣菜制成液料比为30mL/g的提取溶液，进行超声提取，超声提取后，静置，取上清液即得。根据本专利技术具体实施方式的长裂苦苣菜生物碱初级分离物，超声提取的功率为700W，温度为55℃，超声时间为30min。根据本专利技术具体实施方式的长裂苦苣菜生物碱初级分离物的分离方法，所述分离方法包括以下步骤：(1)制备长裂苦苣菜提取物；(2)采用制备色谱法分离步骤(1)得到的长裂苦苣菜提取物，具体条件如下：采用C18色谱柱，以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速10mL/min，柱温27-33℃，波长为255-265nm，梯度洗脱程序为在0-5min的时间范围内，流动相A的体积由95％变为60％，流动相B的体积由5％变为40％；在5-15min的时间范围内，流动相A的体积由60％变为30％，流动相B的体积由40％变为70％；在15-30min的时间范围内，流动相A的体积由30％变为20％，流动相B的体积由70％变为80％；在30-35min的时间范围内，流动相A的体积保持为20％，流动相B的体积保持为80％；收集峰高范围在420-2000mAU的馏分即得。根据本专利技术具体实施方式的长裂苦苣菜生物碱初级分离物的分离方法，步骤(2)中，柱温为30℃，波长为260nm。根据本专利技术具体实施方式的长裂苦苣菜生物碱初级分离物的分离方法，长裂苦苣菜提取物由包括以下步骤的方法制备得到：以75％乙醇为溶剂，将长裂苦苣菜制成液料比为30mL/g的提取溶液，进行超声提取，超声提取后，静置，取上清液，进行旋转蒸发后冷却干燥，即得。根据本专利技术具体实施方式的长裂苦苣菜生物碱初级分离物的分离方法，超声提取的功率为700W，温度为55℃，超声时间为30min。本专利技术的有益效果：本专利技术确定了长裂苦苣菜生物碱的提取工艺，其对长裂苦苣菜生物碱的提取率可达到20.30％。通过制备色谱法分离得到多个初级馏分，确定长裂苦苣菜生物碱初级分离物具有较强的抗氧化性能，为开发和生产新型抗氧化食品或饲料添加剂提供了可靠的理论及技术支撑。附图说明图1显示H2O2对Caco-2细胞存活率的影响；图2显示长裂苦苣菜生物碱提取物对H2O2损伤Caco-2细胞存活率的影响；图3显示长裂苦苣菜生物碱提取物的总抗氧化能力；图4显示长裂苦苣菜生物碱提取物对ABTS自由基的清除能力；图5显示长裂苦苣菜生物碱提取物对DPPH自由基的清除能力；图6显示长裂苦苣菜生物碱提取物对羟基自由基的清除能力；图7显示长裂苦苣菜生物碱提取物对超氧阴离子的清除能力；图8显示长裂苦苣菜生物碱提取物的总还原能力；图9显示长裂苦苣菜生物碱提取物对斑马鱼肠道组织ROS的影响情况；图10显示长裂苦苣菜生物碱提取物对斑马鱼肠道组织SOD的影响情况；图11显示长裂苦苣菜生物碱提取物对斑马鱼肠道组织MDA的影响情况；图12显示长裂苦苣菜生物碱提取物对斑马鱼肠道组织CAT的影响情况；图13显示长裂苦苣菜提取物的制备型HPLC分离情况；图14显示长裂苦苣菜生物碱提取物与馏分对H2O2损伤Caco-2细胞存活率的影响情况；图15显示一级馏分的总抗氧化能力；图16显示一级馏分对ABTS自由基的清除能力；图17显示一级馏分对DPPH自由基的清除能力；图18显示一级馏分对羟基自由基的清除能力；图19显示一级馏分对超氧阴离子的清除能力；图20显示一级馏分的总还原能力。具体实施方式实施例1制备长裂苦苣菜生物碱提取物长裂苦苣菜清洗后于40℃烘箱烘至恒重，然后用微型植物粉碎机将长裂苦苣菜粉碎，过60目的分析筛。称取10g长裂苦苣菜全草粗粉置于500mL的超声杯中，加入75％乙醇，得到液料比为30mL/g的提取溶液，调节提取溶剂pH值为5，进行超声提取，超声温度为55℃，超声功率为700W，超声时间为30min。超声提取后，5000rpm，离心10min，获得上清液，40℃旋转蒸发，冷冻干燥，获得长裂苦苣菜生物碱提取物，备用。生物碱为含氮的有机化合物，且生物碱类化合物有似碱的性质。生物碱的母核结构具有多种，例如有吡咯类生物碱、吡咯类生物碱、吡咯类生物碱、莨菪烷类生物碱(茄科生物碱)、莨菪烷类生物碱(茄科生物碱)、莨菪烷类生物碱(茄科生物碱)、莨菪烷类生物碱(茄科生物碱)等。取0.1mL的提取液置于1mL比色管中，用一定浓度的乙醇定容至刻度，以相对应的乙醇浓度为空白，并在410nm处测定提取液吸光值，根据标准曲线测长裂苦苣菜中生物碱的提取率，提取率＝(样品中生物碱的重量/药材重量)×100％。本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.长裂苦苣菜生物碱初级分离物，其特征在于，所述初级分离物由包括以下步骤的方法制备得到：(1)制备长裂苦苣菜提取物；(2)采用制备色谱法分离步骤(1)得到的长裂苦苣菜提取物，具体条件如下：采用C18硅胶柱，以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速10mL/min，柱温27‑33℃，波长为255‑265nm，梯度洗脱程序为：在0‑5min的时间范围内，流动相A的体积由95％变为60％，流动相B的体积由5％变为40％；在5‑15min的时间范围内，流动相A的体积由60％变为30％，流动相B的体积由40％变为70％；在15‑30min的时间范围内，流动相A的体积由30％变为20％，流动相B的体积由70％变为80％；在30‑35min的时间范围内，流动相A的体积保持为20％，流动相B的体积保持为80％；收集峰高范围在420‑2000mAU的馏分即得。

【技术特征摘要】
2019.06.13 CN 20191051032421.长裂苦苣菜生物碱初级分离物，其特征在于，所述初级分离物由包括以下步骤的方法制备得到：(1)制备长裂苦苣菜提取物；(2)采用制备色谱法分离步骤(1)得到的长裂苦苣菜提取物，具体条件如下：采用C18硅胶柱，以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速10mL/min，柱温27-33℃，波长为255-265nm，梯度洗脱程序为：在0-5min的时间范围内，流动相A的体积由95％变为60％，流动相B的体积由5％变为40％；在5-15min的时间范围内，流动相A的体积由60％变为30％，流动相B的体积由40％变为70％；在15-30min的时间范围内，流动相A的体积由30％变为20％，流动相B的体积由70％变为80％；在30-35min的时间范围内，流动相A的体积保持为20％，流动相B的体积保持为80％；收集峰高范围在420-2000mAU的馏分即得。2.根据权利要求1所述的长裂苦苣菜生物碱初级分离物，其特征在于，步骤(2)中，柱温为30℃，波长为260nm。3.根据权利要求1所述的长裂苦苣菜生物碱初级分离物，其特征在于，长裂苦苣菜提取液由包括以下步骤的方法制备得到：以75％乙醇为溶剂，将长裂苦苣菜制成液料比为30mL/g的提取溶液，调节提取溶液的pH为5，进行超声提取，超声提取后，静置，取上清液，旋转蒸发后冷却干燥，即得。4.根据权利要求3所述的长裂苦苣菜生物碱初级分离物，其特征在于，超声提取的功率为700W，温度为5...

【专利技术属性】
技术研发人员：李秀梅，杨培龙，潘方方，石冬冬，闻治国，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11