双咖啡酰奎宁酸在制备治疗痛风药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了1,4‑双咖啡酰奎宁酸用作黄嘌呤氧化酶抑制剂和在制备治疗痛风药物中的新用途。本发明专利技术首次从藜蒿叶中分离鉴定出1种双咖啡酰奎宁酸化合物，这种化合物不仅具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性，还具有抗痛风炎症的功能，能更好地用于治疗痛风。双咖啡酰奎宁酸来源于天然植物，具有安全无毒、副作用少等优点。

Application of biscaffeoylquinic acid in the preparation of gout drugs

【技术实现步骤摘要】
双咖啡酰奎宁酸在制备治疗痛风药物中的用途
本专利技术涉及双咖啡酰奎宁酸的制药新用途，尤其是在制备治疗高尿酸血症和痛风药物的新用途，属于植物药领域。
技术介绍
痛风是由于嘌呤代谢紊乱导致血尿酸增高或肾脏排泄尿酸减少，从而引起尿酸盐在组织沉积的疾病。高尿酸血症是痛风的生化基础，痛风已成为同高血压、糖尿病、动脉粥样硬化等威胁人类健康的常见疾病。黄嘌呤氧化酶(XOD)是嘌呤代谢过程中的关键酶，可以催化黄嘌呤和次黄嘌呤产生尿酸，XOD酶活的升高会引起尿酸水平增加，导致高尿酸血症。当机体过多的尿酸以晶体形式沉积在关节滑膜、组织间液时，就会引起一系列的炎症反应，引发痛风性关节炎。因此，抑制黄嘌呤氧化酶可以预防高尿酸血症，减少尿酸的生成，进而预防痛风炎症的产生。目前临床上用于治疗高尿酸血症和痛风的西药具有很大的副作用如肠胃不适、肝肾损伤，而一些天然产物比如多酚、黄酮、三萜等在治疗痛风方面具有多靶点、低毒副作用的优势。藜蒿叶富含多种活性成分如黄酮、多酚等化合物，已有研究报道藜蒿叶中的咖啡酰奎宁酸可以抑制XOD酶活，但是多酚作为植物的次级代谢产物种类繁多，气候、地理位置等因素也会影响植物的次级代谢产物的种类。因此，有待从蔬菜加工副产物-藜蒿叶中挖掘更多的抑制黄嘌呤氧化酶和缓解痛风炎症的天然产物。
技术实现思路
由于现有的治疗高尿酸血症和痛风炎症的药物具有很多副作用，本专利技术的目的在于提供一种来源于藜蒿叶的双咖啡酰奎宁酸化合物用作黄嘌呤氧化酶抑制剂和在制备治疗痛风药物中的用途。本专利技术的目的是通过以下的技术方案来实现的：首先将藜蒿叶经50％乙醇提取，石油醚萃取，乙酸乙酯萃取，得到藜蒿叶乙酸乙酯部位。然后将乙酸乙酯部位采用高效液相色谱四极杆飞行时间质谱(HPLC-Q/TOF-MS)，鉴定出乙酸乙酯部位中的五种双咖啡酰奎宁酸化合物。最后采用酶动力学法测定上述双咖啡酰奎宁酸化合物抑制黄嘌呤氧化酶的IC50值，以及用脂多糖和尿酸钠刺激的THP-1细胞建立痛风炎症模型，测定上述五种双咖啡酰奎宁酸化合物缓解痛风炎症的效果。结果发现：从藜蒿叶中分离鉴定出的五种双咖啡酰奎宁酸化合物分别为1,4-双咖啡酰奎宁酸、3,4-双咖啡酰奎宁酸、1,5-双咖啡酰奎宁酸、3,5-双咖啡酰奎宁酸、4,5-双咖啡酰奎宁酸，这五种化合物都具有一定的抑制黄嘌呤氧化酶活性，说明有降尿酸功能和用于治疗高尿酸血症的潜力，其中1,4-双咖啡酰奎宁酸在藜蒿叶中是首次报道，且抑制黄嘌呤氧化酶的活性显著高于其它四种化合物。同时，5种双咖啡酰奎宁酸除3，5-双咖啡酰奎宁酸外均可抑制脂多糖和尿酸钠引起的THP-1细胞IL-1β分泌水平的增加，1,4-双咖啡酰奎宁酸和1,5-双咖啡酰奎宁酸抑制IL-1β分泌能力优于其它双咖啡酰奎宁酸，说明具有抗痛风炎症的功能，有缓解痛风性关节炎临床症状的潜力。1,4-双咖啡酰奎宁酸用于治疗痛风，既能从源头上减少尿酸生成，又能有效缓解炎症症状，具有更好的疗效和应用价值。本专利技术具有以下优点：本专利技术首次从藜蒿叶中分离鉴定出1种双咖啡酰奎宁酸化合物-1,4-双咖啡酰奎宁酸，该化合物具有显著抑制黄嘌呤氧化酶的活性，还具有抗痛风炎症的功能，能更好地用于治疗痛风。本专利技术采用浸提法结合液液萃取的方法，采用半制备高效液相色谱分离藜蒿叶中的化学成分，与化学合成的方法相比，具有操作简单、成本低廉，效率高等优点。本专利技术中的双咖啡酰奎宁酸来源于天然植物，具有安全无毒、副作用少等优点。附图说明图1是藜蒿叶乙酸乙酯部位和5种混合标准品的液相色谱图。A:混合标准品，B:藜蒿叶乙酸乙酯部位。具体实施方式实施例1双咖啡酰奎宁酸的提取鉴定将藜蒿叶于60℃烘箱干燥20h，粉碎过60目筛，得到藜蒿叶粉末。将藜蒿叶粉末用50％(体积)乙醇提取，料液比1:15，室温搅拌提取1h，重复提取2次，过滤，合并滤液，旋转蒸发除去乙醇后，得到藜蒿叶浸膏。将上述浸膏先用石油醚萃取，再用乙酸乙酯萃取得到藜蒿叶提取物，将乙酸乙酯萃取层旋转蒸发除去乙酸乙酯，冷冻干燥得到藜蒿叶乙酸乙酯部位的粉末。将上述藜蒿叶乙酸乙酯部位粉末，用甲醇配置成5mg/mL的溶液，用安捷伦HPLC-Q/TOF-MS鉴定其单体成分，并与标准品比对。流动相为A：0.1％甲酸和B：乙腈，梯度洗脱条件：0-10min，10％B；10-15min，15％B；15-17min，18％B；17-37min，18％B；37-42min，50％B；42-48min，65％B；48-52min，80％B；52-58min，80％B；58-62min，10％，B。质谱条件：ESI源，负离子模式采集信号，扫描范围100-1100m/z，毛细管电压，3.5kV；雾化器气体压力，50psi；干燥气流速，10.0L/min；脱溶剂化温度，325℃；碎裂器电压：175V。碰撞能量：10-40V。由图1可知，藜蒿叶乙酸乙酯部位5个峰的保留时间分别与混合标准品的保留时间相同，这五种化合物分别为1,4-双咖啡酰奎宁酸(1,4-diCQA),3,4-双咖啡酰奎宁酸(3,4-diCQA),1,5-双咖啡酰奎宁酸(1,5-diCQA),3,5-双咖啡酰奎宁酸(3,5-diCQA),4,5-双咖啡酰奎宁酸4,5-diCQA)。由表1可知，藜蒿叶乙酸乙酯部位五个峰的质谱碎片信息符合五种标准品的碎片信息，结合图1的保留时间相同，证明藜蒿叶含有这5种化合物，1,4-双咖啡酰奎宁酸在藜蒿叶乙酸乙酯部位含量为0.39％。其中，1,4-双咖啡酰奎宁酸以前未在藜蒿叶报道过，这是第一次报道1,4-双咖啡酰奎宁酸存在于藜蒿叶中。表1HPLC-Q/TOF-MS鉴定藜蒿叶乙酸乙酯部位的化学成分实施例2双咖啡酰奎宁酸对XOD酶活的抑制作用分别吸取20μL上述鉴定的藜蒿叶中的五种单体化合物溶液及阳性对照(别嘌醇)于酶标条中，再加100μL的XOD酶溶液(0.02U/mL)，放于37℃酶标仪中振动10s，孵育2min，用排枪加40μL的黄嘌呤溶液(1mmol/L)，每隔20s检测吸光值，测15次，检测反应体系295nm下5min内吸光值的变化为K1，PBS对照的变化为K0。样品对XOD酶活的抑制率(％)＝(1-K1/K0)×100％。由表2可知，五种化合物中，1,4-diCQA的IC50值最低，而且比别嘌醇(阳性药)低。这表明存在于藜蒿叶中的1,4-diCQA具有很好的抑制XOD酶活的能力，其可以应用于预防高尿酸血症的产品开发。表2.藜蒿叶乙酸乙酯部位5种单体化合物抑制XOD酶的IC50IC50/(μM)3,5-diCQA288.87±21.783,4-diCQA260.23±18.354,5-diCQA233.12±10.901,4-diCQA7.36±0.631,5-diCQA121.52±2.56别嘌醇(阳性药)12.15±0.32实施例3双咖啡酰奎宁酸对缓解痛风炎症的效果接种THP-1悬浮细胞于24孔板中，待其密度达到80％时，加入终浓度为100ng/mL的佛波酯(PMA)溶液，PMA作用12h后，THP-1细胞分化为贴壁的巨噬细胞，吸弃培养液，用PBS洗细胞，更换完全培养基，培养12h，然后进行加药处理，100μmol/L的上述鉴定的单体化合物预孵育12h后，加入终浓度为1μg/mL的脂多糖作用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.双咖啡酰奎宁酸用作黄嘌呤氧化酶抑制剂的用途。

【技术特征摘要】
1.双咖啡酰奎宁酸用作黄嘌呤氧化酶抑制剂的用途。2.双咖啡酰奎宁酸在制备治疗痛风药物中的用途。3.一种黄嘌呤氧化酶抑制剂，其活性成分是双咖啡酰奎宁酸。4.权利要求1或2或3中所述的双咖啡酰奎宁酸，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓云，曹伟伟，吴婷，李慧，潘思轶，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42