用于骨关节炎的诊断性分子标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种用于骨关节炎的诊断性分子标志物，该诊断性分子标志物是FAM167B基因及其表达产物，本发明专利技术的实验证明：与正常人相比，FAM167B基因在骨关节炎患者中表达量低。根据FAM167B基因与骨关节炎的相关性，可以研发促进FAM167B基因表达或者能够促进FAM167B基因表达产物功能的药物，从而实现临床上对骨关节炎的预防和治疗。

Diagnostic molecular markers for osteoarthritis

【技术实现步骤摘要】
用于骨关节炎的诊断性分子标志物
本专利技术涉及疾病诊断领域，具体涉及用于骨关节炎的诊断性分子标志物，更具体地涉及以检测FAM167B异常为手段的疾病诊断方法。
技术介绍
骨关节炎(osteoarthritis，OA)是一种以关节软骨退行性变和关节炎症为特征的慢性骨关节疾病，主要临床表现为慢性疼痛和关节活动障碍，严重影响患者生活质量。该病多见于中老年人，在年龄≥60岁的人群中约有80％的人出现骨关节炎，基于六大行政区域的中国40岁以上人群原发性OA总体患病率为46.3％。骨关节炎是由机械、遗传和环境因素引起的复杂多因素疾病，也是关节中最常见的疾病，许多环境因素如激素、饮食、感染、创伤、酒精摄入和接触烟草烟雾等，都会增加骨关节炎的患病风险，年龄是其独立危险因素。随着社会老龄化进程及肥胖的日益加重，OA发病率逐年增加，导致患者身体残疾及生活质量降低，给患者带来沉重的经济负担，OA已经演变成为严重的社会问题，值得广泛关注。长期以来，许多学者致力于关节软骨生理、病理及软骨细胞代谢等方面的基础研究，并在OA病因及病理机制方面达成了一定共识。目前普遍认为OA与遗传因素、年龄、体重及外伤等因素有关，病理改变主要涉及关节软骨细胞外基质降解、软骨细胞凋亡及软骨成分自身免疫反应等，软骨细胞凋亡及炎症机制在OA中扮演着重要的角色。软骨细胞是关节软骨中唯一的细胞，细胞外基质降解、软骨细胞凋亡和细胞因子的产生对骨关节炎的病理进展至关重要。因此，抑制细胞外基质降解、减轻软骨细胞凋亡和炎症反应可延缓骨关节炎的病理进展过程。近年来，随着研究的逐渐深入，OA在分子生物学方面的发病机制越来越引起学者们的关注，由机体天然免疫系统介导的慢性、低度炎症反应在OA发病机制中的作用逐渐成为研究热点，开辟了OA研究的新领域，将使我们更加全面地认识OA，为OA早期防治提供新思路。在专利方面，多件专利文献，如201510627048.X、201510725004.0、201510724747.6等均披露了一些能够诊断骨关节炎的分子标志物。但是现有的研究还远远达不到精准医疗中对检测标志物数量研究的要求，本申请旨在提供新的骨关节炎诊断性分子标志物，为临床基因检测服务。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种可用于骨关节炎早期诊断的分子标志物。本专利技术利用测序和QPCR实验证明了FAM167B基因在骨关节炎滑膜组织的表达水平显著高于正常滑膜组织，因此可将FAM167B基因作为骨关节炎的诊断性基因标志物。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测FAM167B基因及其表达产物的产品在制备诊断骨关节炎的工具中的应用。进一步，上面所提到的检测FAM167B基因及其表达产物的产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测FAM167B基因表达水平以诊断骨关节炎的产品。进一步，所述用RT-PCR诊断骨关节炎的产品至少包括一对特异扩增FAM167B基因的引物；所述用实时定量PCR诊断骨关节炎的产品至少包括一对特异扩增FAM167B基因的引物；所述用免疫检测诊断骨关节炎的产品包括：与FAM167B蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断骨关节炎的产品包括：与FAM167B基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断骨关节炎的产品包括：蛋白质芯片和基因芯片；其中，蛋白质芯片包括与FAM167B蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与FAM167B基因的核酸序列杂交的探针。根据在本专利技术中所使用的，术语“引物”指能在其3’端与互补核酸分子杂交且提供可由核酸聚合酶延伸的游离3’羟基末端的任何核酸，扩增引物是能与基因(分别为正链和负链，或反之)的5’或3’区退火且之间包含短区域的一对核酸分子。在适宜的条件下，使用适宜的试剂，这类引物允许扩增具有两侧为该引物的核苷酸序列的核酸分子。所述FAM167B蛋白的特异性结合抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。其包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如嵌合抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、Fv等)。只要所述片段能够保留与FAM167B蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体的制备是本领域技术人员公知的，并且本专利技术可以使用任何方法来制备所述抗体。本专利技术中使用的术语“探针”指能结合具有互补序列的靶核酸的寡核苷酸，该结合经由一种或多种类型的化学键，通常经由互补碱基配对，通常经由氢键形成。根据杂交条件的严格性，探针可以结合与探针序列缺乏完全互补性的靶序列。可以存在任意数目的碱基对错配，其将干扰本文中描述的靶序列与单链核酸之间的杂交。然而，如果突变数目太多以至于甚至在最小严格杂交条件下也不能发生杂交，那么该序列不是互补靶序列。探针可以是单链或部分单链和部分双链的。探针的链性由靶序列的结构、组成和特性决定。探针可以直接标记或间接标记，如用生物素标记，其可之后被链霉亲合素蛋白复合物结合。进一步，在本专利技术的具体实施方案中，所述用实时定量PCR诊断骨关节炎的产品至少包括的一对特异扩增FAM167B基因的引物的序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。本专利技术方法中，采用从滑膜组织样品提取核酸的快速技术和扩增和检测指示骨关节炎，这些核酸片段定性和定量地测量由标志基因FAM167B编码的mRNA。就测量mRNA水平来确定基因表达而言，可通过本领域已知的任何手段来进行分析，并且包括诸如PCR、滚环扩增(RCA)、连接酶链反应(LCR)、链置换扩增(SDA)、基于核酸序列的扩增(NASBA)等之类的方法。所涉及的快速分子诊断学优选的实时定量PCR。典型的PCR包括多个扩增步骤或循环，其选择性扩增靶核酸种类。典型的PCR包括三个步骤：变性步骤，其中靶核酸变性；退火步骤，其中一组PCR引物(正向引物和反向引物)退火至互补DNA链；延伸步骤，其中热稳定性DNA聚合物延伸引物。通过重复该步骤多次，DNA片段被扩增而产生对应于靶DNA序列的扩增子。典型的PCR包括20个或更多个变性、退火和延伸循环。通常，退火后延伸步骤可同时进行，在这种情况中该循环仅含两个步骤。本专利技术还提供了一种诊断骨关节炎的工具，所述诊断工具包括能够检测生物样品中FAM167B基因或FAM167B蛋白的表达水平的产品，优选地，包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测FAM167B基因转录水平的针对FAM167B基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的FAM167B蛋白的特异性抗体。本专利技术的基因芯片可用于检测包括FAM167B基因在内的多个基因(例如，与骨关节炎相关的多个基因)的表达水平；蛋白质芯片可用于检测包括FAM167B蛋白在内的多个蛋白质(例如，与骨关节炎相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与骨关节炎相关的标志物同时检测，骨关节炎诊断的准确率也将大大提高。其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测FAM167B基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括FAM167B蛋白的特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测FAM167B基因及其表达产物的产品在制备诊断骨关节炎的工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测FAM167B基因及其表达产物的产品在制备诊断骨关节炎的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测FAM167B基因表达以诊断骨关节炎的产品。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用RT-PCR诊断骨关节炎的产品至少包括一对特异扩增FAM167B基因的引物；所述用实时定量PCR诊断骨关节炎的产品至少包括一对特异扩增FAM167B基因的引物；所述用免疫检测诊断骨关节炎的产品包括：与FAM167B蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断骨关节炎的产品包括：与FAM167B基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断骨关节炎的产品包括：蛋白质芯片和基因芯片；其中，蛋白质芯片包括与FAM167B蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与FAM167B基因的核酸序列杂交的探针。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述用实时定量PCR诊断骨关节炎的产品至少包括的一对特异性扩增FAM167B基因的引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。5.一种用于诊断骨关节炎的工具，其特征在于，所述工具包括能够检测生物样品中FAM167B基因或FAM167B蛋白的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，唐美兰，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11