鱼油中EPA和DHA含量的GC检测方法技术

本发明专利技术涉及一种色谱检测方法，特别涉及一种鱼油中EPA和DHA含量的GC检测方法，属于食品药品分析技术领域。一种鱼油中EPA和DHA含量的GC检测方法，该方法包括如下步骤：（1）准备BHT溶液，取50mg BHT溶于1000mL异辛烷；（2）准备内标溶液，精密称取150mg二十三酸甲酯于25mL容量瓶，用BHT溶解，并稀释至刻度；（3）对照品溶液的配制，分别精密称取16mg EPA标准品、12mg DHA标准品于10 mL容量瓶，用内标溶液溶解，并稀释至刻度线；（4）样品称量；（5）衍生化；（6）采用气相色谱仪对样品进行检测；（7）根据峰面积及计算公式计算，得到样品EPA和DHA的含量。

GC method for determination of EPA and DHA in fish oil

【技术实现步骤摘要】
鱼油中EPA和DHA含量的GC检测方法
本专利技术涉及一种色谱检测方法，特别涉及一种鱼油中EPA和DHA含量的GC检测方法，属于食品药品分析

技术介绍
鱼油是一种具有很高利用价值的天然保健食品。其富含的ω-3不饱和脂肪酸具有帮助降低胆固醇，防止血液凝固，预防血栓、动脉硬化及高血压疾病，降低血液黏度，促进血液循环，消除疲劳，缓和痛风及风湿性关节炎症的功效。鱼油中所富含的ω-3不饱和脂肪酸中，尤以二十碳五烯酸(EPA)(C20:5n-3)和二十二碳六烯酸(DHA)(C22:6n-3)最为重要。EPA对肺病、肾病、2型糖尿病、大肠溃疡和节段性回肠炎等的治疗都会起到积极作用；DHA为大脑及视网膜中含量最高的ω-3脂肪酸，占大脑中多元不饱和脂肪酸的40％，视网膜中多元不饱和脂肪酸的60％，对脑和视觉的发育和功能维持起到重要作用。同时服用EPA和DHA能阻止血小板在血管壁上的沉积，预防或减轻动脉粥样硬化和冠心病等发生。因此，准确测定鱼油中EPA、DHA及总ω-3酸的含量对鱼油产品的生产加工、功效评价等有重要意义。食品安全国家标准GB5009.168-2016食品中脂肪酸的测定规定：试样加入2％氢氧化钠甲醇溶液后，连接回流冷凝器，在80℃±1℃水浴回流至油滴消失后，再经皂化和甲酯化后用正庚烷萃取，取上层清液使用气相色谱仪进行检测。该方法操作繁琐，重现性和稳定性差，在回流的过程中会造成溶剂的挥发造成检测结果偏大。且EPA和DHA容易被空气中的氧气所氧化，在检测过程中没有加入任何的抗氧化剂会对检测结果造成一定的偏差。因此，现进行鱼油中EPA和DHA含量测定方法进行方法学研究，采用加入一定量的BHT作为抗氧化剂，以二十三酸甲酯为内标，经皂化和甲酯化后已异辛烷进行提取，使用气相色谱仪进行检测。该法在溶剂中加入了抗氧化剂和内标，能有效地降低样品在酯化过程中EPA和DHA被氧化的概率及溶剂挥发导致的结果不准确。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种鱼油中EPA和DHA含量的GC检测方法，该方法可以同时测定鱼油中EPA、DHA含量的方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种鱼油中EPA和DHA含量的GC检测方法，该方法包括如下步骤：(1)准备BHT溶液取50mgBHT溶于1000mL异辛烷；(2)准备内标溶液精密称取150mg二十三酸甲酯于25mL容量瓶，用BHT溶解，并稀释至刻度；(3)对照品溶液的配制分别精密称取16mgEPA标准品、12mgDHA标准品于10mL容量瓶，用内标溶液溶解，并稀释至刻度线；(4)样品称量(5)衍生化：移取2.0mL内标溶液于每一玻璃瓶中，氮气吹干；加入1.5mL20g/L的氢氧化钠-甲醇溶液，拧紧聚四氟乙烯瓶帽，水浴加热并搅拌7min；冷却至室温；加2mL14％三氟化硼甲醇溶液，拧紧瓶帽；水浴加热，并时时振摇30min；冷却至40～50℃，加入1mL异辛烷；转移溶液至20mL试管；加盖，并快速振摇30s；立刻加入5mL饱和氯化钠溶液于玻璃瓶中；加盖，振摇15s；转移上层液于10mL试管；用1mL异辛烷重复萃取；分两次用1mL水冲洗异辛烷层；用无水硫酸钠干燥，得到待检测样品溶液；(6)采用气相色谱仪对样品进行检测：分别吸取标准品溶液、样品溶液注入气相色谱系统中进行检测，气相色谱条件是：①色谱柱：HPINNOwax，30m×0.25mm，0.25μm；②载气：氮气；③柱温：170℃，保持5min；1.5℃/min至188℃保持2min；1.0℃/min至212℃；5.0℃/min至230℃保持10min；④进样口温度：250℃；⑤检测器温度：280℃；⑥分流比：75:1；⑦进样体积：1μL；⑧流速：1.0mL/min；⑨氢气流速：40mL/min；⑩空气流速：400mL/min。(7)根据峰面积及计算公式计算，得到样品EPA和DHA的含量。本专利技术在皂化反应完成后直接用三氟化硼甲醇溶液进行成酯反应。反应后直接用异辛烷溶液分开两次单独重复提取不饱和脂肪酸酯，保证了萃取的准确性。要消除样品溶液及环境中氧化剂的干扰，酯化要完全彻底，萃取要完全，还要减少萃取溶剂挥发导致的结果偏差。由于采用内标法，减少了样品处理过程中产生的误差，消除溶剂挥发导致的结果不准确，保证结果的准确。本专利技术通过新的样品处理方法和相应色谱条件的选择，实现对鱼油等保健品中EPA、DHA的含量测定。本专利技术通过直接加入2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)、内标二十三酸甲酯、盐类物质来配置标准品和样品溶液，直接进样进行测定。通过对此方法做了方法学验证，专属性好，无杂质干扰；线性关系：R2＝0.9998；精密度6针EPA含量RSD为0.49％，DHA含量RSD为0.36％；回收率EPA达到99.5％，DHA达到99.7％。各项验证指标良好，均符合法规要求。且本方法测定简便易行，适用于工业生产中不同批次鱼油样品的测定。作为优选，样品溶液的配制方法：鱼油原料：称取20mg样品于玻璃瓶中，按照衍生化部分描述进行操作；鱼油软胶囊：取20粒软胶囊的内容物于一烧杯中，充分混合，确保不分层，然后按照衍生化部分描述进行操作。与现有技术相比，本专利技术具有如下显著优点：1、本专利技术是以GC法测定鱼油中EPA和DHA的含量，而且此GC法适用于软胶囊、鱼油原料中EPA和DHA含量的测定。2、本专利技术先用20g/L氢氧化钠-甲醇溶液与样品进行皂化反应后，再用三氟化硼-甲醇溶液与样品溶液进行反应，可更彻底甲酯化样品。3、用BHT异辛烷溶液溶解样品，除易于溶解相应样品外，BHT还能起到抗氧化作用，减少样品处理过程中的损失。4、内标法的运用，保证检测结果的准确。5、色谱柱选择HPINNOwax，30m×0.25mm，0.25μm,能更好的对组分进行分离的同时，节约仪器运行时间。6、根据鱼油中各组分沸点的不同，对柱温温度进行选择，能更好分离样品，节约仪器运行时间。附图说明图1是本专利技术实施例1标准品和样品检测结果色谱图，其中，(a)EPA和DHA对照品图谱，(b)样品中EPA和DHA图谱；图2是本专利技术实施例2标准品和样品检测结果色谱图，其中，(a)EPA和DHA对照品图谱，(b)样品中EPA和DHA图谱。具体实施方式下面通过具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本专利技术的实施并不局限于下面的实施例，对本专利技术所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本专利技术保护范围。以下实施例所用供试品及试剂是：试剂：丁羟甲苯(BHT)：分析纯；二十三酸甲酯：标准品；氢氧化钠：分析纯；甲醇：色谱级；14％三氟化硼甲醇溶液：分析纯；异辛烷：色谱级；氯化钠：分析纯；无水硫酸钠：分析纯；水：超纯水。标准品：EPA甲酯批号：BCBM9475V，纯度：≥98.5％，来源：SIGMA-ALDRICHDHA甲酯批号：BCBN2286V，纯度：≥98.5％，来源：SIGMA-ALDRICH；样品：1.鱼油软胶囊，批号：DS0Q18J1001，来源：浙江艾兰得生物科技有限公司2.鱼油原料，批号：J006BN20171123P1812，来源：舟山新诺佳生物工程技有限责任公司。实施例1鱼油软胶囊中EPA、DHA含量的测定鱼油软胶囊(浙江艾兰得生物科技有限公司)EPA和DHA含量的测定：(1)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鱼油中EPA和DHA含量的GC检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：（1）准备BHT溶液取50mg BHT溶于1000mL异辛烷；（2）准备内标溶液精密称取150mg二十三酸甲酯于25mL容量瓶，用BHT溶解，并稀释至刻度；（3）对照品溶液的配制分别精密称取16mg EPA标准品、12mg DHA 标准品于10 mL容量瓶，用内标溶液溶解，并稀释至刻度线；（4）样品处理（5）衍生化：移取2.0mL内标溶液于每一玻璃瓶中，氮气吹干；加入1.5mL 20g/L的氢氧化钠‑甲醇溶液，拧紧聚四氟乙烯瓶帽，水浴加热并搅拌7min；冷却至室温；加2mL 质量百分含量14%的三氟化硼甲醇溶液，拧紧瓶帽；水浴加热，并时时振摇30min；冷却至40～50℃，加入1mL异辛烷；转移溶液至20mL试管；加盖，并快速振摇30s；立刻加入5mL饱和氯化钠溶液于玻璃瓶中；加盖，振摇15s；转移上层液于10mL试管；用1mL异辛烷重复萃取；分两次用1mL水冲洗异辛烷层；用无水硫酸钠干燥，得到待检测样品溶液；（6）采用气相色谱仪对样品进行检测：（7）根据峰面积及计算公式计算，得到样品EPA和DHA的含量。

【技术特征摘要】
1.一种鱼油中EPA和DHA含量的GC检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：（1）准备BHT溶液取50mgBHT溶于1000mL异辛烷；（2）准备内标溶液精密称取150mg二十三酸甲酯于25mL容量瓶，用BHT溶解，并稀释至刻度；（3）对照品溶液的配制分别精密称取16mgEPA标准品、12mgDHA标准品于10mL容量瓶，用内标溶液溶解，并稀释至刻度线；（4）样品处理（5）衍生化：移取2.0mL内标溶液于每一玻璃瓶中，氮气吹干；加入1.5mL20g/L的氢氧化钠-甲醇溶液，拧紧聚四氟乙烯瓶帽，水浴加热并搅拌7min；冷却至室温；加2mL质量百分含量14%的三氟化硼甲醇溶液，拧紧瓶帽；水浴加热，并时时振摇30min；冷却至40～50℃，加入1mL异辛烷；转移溶液至20mL试管；加盖，并快速振摇30s；立刻加入5mL饱和氯化钠溶液于玻璃瓶中；加盖，振摇15s；转移上层液于10mL试管；用1mL异辛烷重复萃取；分两次用1mL水冲洗异辛烷层；用无水硫酸钠干燥，得到待检测样品溶液；（6）采用气相色谱仪对样品进行检测：（7）根据峰面积及计算公式计算，得到样品EPA和DHA的含量。2.根据权利要求1所述的鱼油中EPA和DHA含量的GC检测方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：于西华，张燕，吕磊，包亚君，薛春霞，刘刚，
申请(专利权)人：浙江艾兰得生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33