一种衍生化法检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种衍生化法检测试剂盒。具体地，本发明专利技术提供一种衍生化法检测试剂盒，所述试剂盒包括内标品、稀释液、转化液、复溶液。本发明专利技术所述的试剂盒与高效液相‑质谱联用能够准确、快速、高效和高灵敏的检测出生物样品中氨基酸和酰基肉碱的含量，从而对疾病进行筛查和预防治疗，且操作简洁快速，准确率和灵敏度高。

A Kit for Derivatization Detection

【技术实现步骤摘要】
一种衍生化法检测试剂盒
本专利技术涉及化学分析检测
，具体地，本专利技术涉及一种衍生化法检测试剂盒。
技术介绍
遗传性代谢病又称先天性代谢缺陷(inbornerrorofmetabolism，IEM)，常常是由基因突变导致遗传性生化代谢功能缺陷所造成的一类遗传病，涉及氨基酸、胆碱、有机酸、脂肪酸、碳水化合物、溶酶体、类固醇等多种物质代谢的异常。其单一病种患病率较低，但由于种类繁多，总体发病率较高。该类疾病发病后常呈进行性加重，如未能早期识别诊断、干预、治疗，常导致早期夭折或终身残疾，且以神经、智力残疾为最多，会严重影响人口素质，造成家庭和社会的沉重负担。因此开展IEM的早期筛查，实现早期诊断，成为IEM防治的关键，对避免和减少残疾儿童的发生，提高人口素质，推动国民经济发展有着重要的意义。目前，IEM的诊断方法主要有枯草杆菌抑制试验、酶活性测定、气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)、单基因分析等。这些诊断方法用于IEM筛查具有局限性：(1)普遍通量低，一般一次只能检测一种至几十种，不能满足IEM可检出病种的逐年增多，并且需要对遗传性代谢病有准确的预判；(2)不同IEM的检测方法各异，且样本多样，如一些疾病检测蛋白水平、而另一些疾病则检测基因水平，有些疾病需要尿液样本、而另一些则需要血液样本。因此不太适合开展大规模的遗传性代谢病的筛查，亟需要一种能高通量检测IEM多种疾病的技术。综上，本领域亟需开发一种快速、高效、操作简洁、准确率和灵敏度高的检测方法，用来检测代谢物质，从而能够早期识别、诊断、干预、治疗遗传性代谢病。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种快速、高效、操作简洁、准确率和灵敏度高的衍生化法检测试剂盒，用来检测代谢物质，从而能够早期识别、诊断、干预、治疗遗传性代谢病。本专利技术的第一方面，提供了一种衍生化法检测试剂盒，所述试剂盒包括：(i)稀释液，所述的稀释液包括饱和一元醇；(ii)转化液，所述的转化液包括：乙酰化试剂，和丁醇；(iii)复溶液，所述复溶液包括：饱和一元醇，和水；和(iv)任选的同位素内标品。在另一优选例中，所述的内标品包括：同位素标记氨基酸内标品、同位素标记肉碱内标品、和/或同位素标记酰基肉碱内标品；在另一优选例中，所述的同位素标记选自下组：D标记、13C标记、15N标记，或其组合。在另一优选例中，所述同位素标记氨基酸包括D10-亮氨酸、D3-丙氨酸、D8-缬氨酸、D3-蛋氨酸、D8-苯基丙氨酸、D7-酪氨酸、D7-鸟氨酸、D7-瓜氨酸、15N4-精氨酸、D3-脯氨酸13C2,15N-甘氨酸、D3-天冬氨酸、D5-谷氨酸中的一种或多种。在另一优选例中，所述的同位素标记肉碱为D3-游离肉碱。在另一优选例中，所述的同位素标记酰基肉碱包括D3-乙酰基肉碱、D3-丙酰基肉碱、D3-丁酰基肉碱、D3-异戊酰基肉碱、D3-己酰肉碱、D3-辛酰基肉碱、D3-癸酰基肉碱、D3-十二烷酰基肉碱、D3-十四烷酰基肉碱、D3-十六烷酰基肉碱、D3-十八烷酰基肉碱中的一种或多种。在另一优选例中，所述的饱和一元醇选自下组：甲醇、乙醇、丙醇、丁醇，或其组合。在另一优选例中，所述的乙酰化试剂选自下组：乙酰氯、乙酸酐、冰醋酸，或其组合。在另一优选例中，所述的丁醇为正丁醇。在另一优选例中，所述的试剂盒还包括质控品，所述质控品包括：全血、氨基酸、肉碱、和/或酰基肉碱。在另一优选例中，在所述质控品中，所述的氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、鸟氨酸和脯氨酸的一种或多种。在另一优选例中，在所述质控品中，所述的酰基肉碱包括乙酰基肉碱、丙酰基肉碱、丁酰基肉碱、异戊酰基肉碱、己酰基肉碱、辛酰基肉碱、癸酰基肉碱、十二烷酰基肉碱、十四烷酰基肉碱、十六烷酰基肉碱、十八烷酰基肉碱、3-羟基丁酰基肉碱、3-羟基异戊酰基肉碱、3-羟基十六酰基肉碱、3-羟基十八酰基肉、碱丙二酰基肉碱和戊二酰基肉碱的一种或多种。在另一优选例中，所述的试剂盒还包括选自下组的一种或多种组件：流动相、反应板、蛋白过滤板、板盖垫、板密封膜。在另一优选例中，所述的流动相含有甲醇和水。本专利技术第二方面，提供一种本专利技术所述试剂盒的用途，用于检测样品中氨基酸、肉碱和/或酰基肉碱的含量。在另一优选例中，所述的样品生物样品。在另一优选例中，所述的生物样品来源于人或非人哺乳动物。在另一优选例中，所述的样品为体液，优选为血液。在另一优选例中，所述的样品为新生儿的体液或血液。在另一优选例中，所述的氨基酸包括亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、酪氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸、精氨酸、脯氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸中的一种或多种；在另一优选例中，所述的酰基肉碱包括乙酰基肉碱、丙酰基肉碱、丁酰基肉碱、异戊酰基肉碱、己酰肉碱、辛酰基肉碱、癸酰基肉碱、十二烷酰基肉碱、十四烷酰基肉碱、十六烷酰基肉碱、十八烷酰基肉碱、3-羟基丁酰基肉碱、3-羟基异戊酰基肉碱、3-羟基十六酰基肉碱、3-羟基十八酰基肉碱、丙二酰基肉碱和戊二酰基肉碱的一种或多种。本专利技术的第三方面提供了一种用本专利技术所述的试剂盒检测样品中氨基酸、肉碱和/或酰基肉碱的方法，包括步骤：(1)用待测样品与内标工作液进行反应，随后吹干，得到第一反应混合物；(2)用转化液与所述第一反应混合物混匀进行衍生，得到第二反应混合物；(3)在第二反应混合物中加入复溶液，得到预处理检测样本；(4)用高效液相色谱-串联质谱仪对所述的预处理检测样本进行检测。在另一优选例中，所述方法包括步骤：(a)内标工作液制备用稀释液与同位素标记氨基酸内标液、同位素标记肉碱内标液和/或同位素标记酰基肉碱内标液混合，得到含有同位素标记氨基酸内标工作液、同位素标记肉碱内标工作液，和/或同位素标记酰基肉碱内标工作液；(b)取样：将待测样品和任选的质控品置于蛋白过滤板中；(c)提取将蛋白过滤板对准深孔板中的孔位，将同位素内标品溶液加入到蛋白过滤板的反应孔中，震荡混匀，离心，吹干；(d)衍生在所述的深孔板的各个孔位中加入转化液，混匀，进行衍生。(e)复溶在所述的深孔板的各个孔位中加入复溶液。(f)样本上机检测高效液相色谱-串联质谱仪检测深孔板中样品中氨基酸、肉碱和/或酰基肉碱的含量。在另一优选例中，在所述步骤(a)中，所述氨基酸内标液：稀释液为1:30-200，优选为1:50-150(v/v)，更优选为1:80-120(v/v)；和/或所述肉碱内标液：稀释液为1:30-200，优选为1:50-150(v/v)，更优选为1:80-120(v/v)；和/或所述酰基肉碱内标液：稀释液为1:30-200，优选为1:50-150(v/v)，更优选为1:80-120(v/v)；在另一优选例中，在所述步骤(a)中，所述的同位素标记氨基酸内标液、同位素标记肉碱内标液，和/或同位素标记酰基肉碱内标液是通过用超纯水、甲醇水或甲醇作为溶剂进行溶解同位素标记氨基酸内标品、同位素标记肉碱内标品，和/或同位素标记酰基肉碱内标品所制得。在另一优选例中，在所述步骤(b)中，所述的待测样品的加入量为0.5-10μL，优选为1-5μL，优选为3.2μL。在另一优选例中，在所述步骤(b)中，所述质控品的加入量量为0.5-10μL，优选为1-5μL，优选本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种衍生化法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：(i)稀释液，所述的稀释液包括饱和一元醇；(ii)转化液，所述的转化液包括：乙酰化试剂，和丁醇；(iii)复溶液，所述复溶液包括：饱和一元醇，和水；和(iv)任选的同位素内标品。

【技术特征摘要】
1.一种衍生化法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：(i)稀释液，所述的稀释液包括饱和一元醇；(ii)转化液，所述的转化液包括：乙酰化试剂，和丁醇；(iii)复溶液，所述复溶液包括：饱和一元醇，和水；和(iv)任选的同位素内标品。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的内标品包括：同位素标记氨基酸内标品、同位素标记肉碱内标品、和/或同位素标记酰基肉碱内标品。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的饱和一元醇选自下组：甲醇、乙醇、丙醇、丁醇，或其组合。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的乙酰化试剂选自下组：乙酰氯、乙酸酐、冰醋酸，或其组合。5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的丁醇为正丁醇。6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括质控品，所述质控品包括：全血、氨基酸、肉碱，和/或酰基肉碱。7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括选自下组的一种或多种组件：流动相、反应板、蛋白过滤板、板盖垫、板密封膜。8.一种如权利要求1所述的试剂盒的用途，其特征在于，用于检测样品中氨基酸、肉碱和/或酰基肉碱的含量。...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱监宝，官培龙，
申请(专利权)人：上海可力梅塔生物医药科技有限公司，上海爱可赛默医疗器械有限公司，广州可力质谱医疗器械有限公司，江苏可力色质医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31