检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)全场灭鼠；(2)准备试验老鼠；(3)引诱老鼠进入鼠洞觅食；(4)刺激老鼠返回、捕捉老鼠；(5)提取老鼠携带的病毒；(6)病毒检测。本发明专利技术方法借助饥饿老鼠的觅食行为，使老鼠进入鼠洞，并利用母鼠哺乳崽鼠的天性或发情期母鼠的交配行为进行刺激或引诱，将老鼠活动范围内中可能存在的非洲猪瘟病原通过接触携带在体表后收集并进行检测，以便判断老鼠生活的猪场环境中是否存在猪瘟病毒，以排除猪场复产时老鼠洞中或猪场环境中可能存在的非瘟病毒对养猪生产造成的不利影响。

Detection of African swine fever virus in pig farm mice and their living environment

【技术实现步骤摘要】
检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法
本专利技术涉及一种非洲猪瘟病毒的检测方法，具体涉及一种检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法。
技术介绍
非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲猪瘟病毒感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)引起的一种急性、出血性、烈性传染病，其特征是发病过程短，最急性和急性感染死亡率高达100％，曾在非洲和欧洲国家广泛流行，并造成巨大的经济损失。目前，世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病，该病也是我国重点防范的一类动物疫情。非洲猪瘟自1921年在肯尼亚首次报道，一直存在于撒哈拉以南的非洲国家，并于上世纪60年代传入欧洲，70年代传入南美洲，2007传入高加索地区和俄罗斯。2017年以来，俄罗斯远东地区发生数起非洲猪瘟疫情。2018年我国沈阳市沈北新区沈北街道(新城子)五五社区发现国内首例病毒。截止2018年12月，我国共有22个省份发生87起家猪感染非洲猪瘟疫情、2起野猪感染非洲猪瘟疫情，当前全国非洲猪瘟疫情仍处于点状散发态势，没有出现大面积流行，疫情发生总体可控。由于在世界范围内没有研发出可以有效预防非洲猪瘟的疫苗，因此快速、准确的诊断对防止该病的传播、流行十分重要。现有技术中，已有大量专利文献公开了猪瘟病毒的检测、诊断技术。如中国专利(申请号201811202113.4)公开一种基于K196R基因的非洲猪瘟病毒检测试剂盒和检测方法。具体的，该技术方案提供了一组新的用于检测非洲猪瘟病毒的QPCR组合物，包括以下引物和与引物配合使用的探针：K196R上游引物为SEQIDNo.3所示的核苷酸序列；K196R下游引物为SEQIDNo.4所示的核苷酸序列；探针为SEQIDNo.2所示的核苷酸序列，利用该组合物可以高效快速地检测样品中是否含有非洲猪瘟病毒，且检测的灵敏度高，特异性强。又如，中国专利(申请号201811112387.4)公开了一种检测非洲猪瘟病毒抗原胶体金免疫层析试纸及制备方法和应用，该胶体金免疫层析试纸包括PVC底板，在PVC底板上按顺序依次固定有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫；其中胶体金垫内有胶体金标记的抗ASFVp30抗原的一个表位的单克隆抗体Mab1；硝酸纤维素膜表面划有检测线和质控线，检测线为针对ASFVp30抗原另一表位的单克隆抗体Mab2，质控线为羊抗小鼠IgG抗体；该技术方案的胶体金免疫层析试纸条具有方便、快速、灵敏和特异等优点，可用于感染ASFV细胞直接检测，适合ASFV感染诊断、流行病学调查和生猪国际贸易检疫检验。再如，中国专利(申请号201811181479.8)公开了一种非洲猪瘟病毒的检测试剂、试剂盒及其应用。该非洲猪瘟病毒检测试剂包括：引物对，包括序列分别如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2，所示的上游引物、下游引物，所述上游引物的5’端标记有第一核酸标记物、下游引物的5’端标记有第二核酸标记物。该技术方案提供的检测非洲猪瘟病毒的方法是以标记的特异性引物扩增适当长度的基因片段，能够保证检测的高度特异性，提高了检测结果的准确性；并且该技术方案提供的检测方法避免了扩增产物稀释和探针杂交等流程，保持了免疫胶体金试纸条技术直观、快速、方便、成熟、廉价等优点。上述的检测方法或现有技术的检测方法的目的通常是为了可以更加快速、简单、准确的检测出猪瘟病毒，或提高检测的灵敏度等等；但这些检测方法通常以猪为检测对象，以猪的病料、鼻咽拭子、血液为样品进行检测，它们均有或需要明确的检测对象或样品。而对于猪场或猪场周围哪些环境尚存在的猪瘟病毒残留，其中这些病毒一部分可能会被老鼠可能携带病毒老鼠洞中，并经过老鼠的活动被带入鼠洞，外界环境中的病毒经消毒可以杀灭，但深藏鼠洞中的病毒仍然存在，且这些病毒可能出现在老鼠生活环境的任何位置；在此种情况下，现有技术中公开的这些检测方法却未披露或提示怎么获得待检样品或如何采样。因此，在猪瘟爆发猪场，经过一段时间的清理、清洗、消毒、空置和哨兵猪检验后，不发病的话会再度引种复产，但哨兵猪的应用有一定局限性，不能完全判断环境中的非瘟病毒是否仍存在，特别是老鼠的活动，可能会导致非瘟病毒被携带传播；目前尚没有有效的办法探明鼠洞中或猪场环境中的病毒在复产的时候是否仍存在，以排除猪场复产时老鼠、老鼠尸体或老鼠洞中的猪瘟病毒这一传染源。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供了一种检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法，本专利技术方法借助饥饿老鼠的觅食行为，使老鼠进入鼠洞，并利用母鼠哺乳崽鼠的天性或发情期母鼠的交配行为进行刺激或引诱，将老鼠活动范围内中可能存在的非洲猪瘟病原通过接触携带在体表后收集并进行检测，以便判断老鼠生活的猪场环境中是否存在猪瘟病毒，以排除猪场复产时老鼠洞中或猪场环境中可能存在的非瘟病毒对养猪生产造成的不利影响。本专利技术通过下述技术方案实现。检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)全场灭鼠对待检测的猪场进行全场灭鼠，以减少试验老鼠的生存压力以及增加试验老鼠在鼠洞中可获得食物的可能；需要指出的是，虽然猪场进行全场灭鼠后，可以通过采集老鼠尸体皮毛上的病原，来检测是否携带有非洲猪瘟病原，但灭鼠药一般为慢性，老鼠通常死亡在洞内，很少能见到尸体，因此无法顺利采集到病毒样品；并且，即便可以在鼠洞外找到老鼠尸体，但老鼠尸体的数量和老鼠在杀灭前的主要活动位置均具有不确定性，从而导致无法准确判定老鼠尸体上携带的非洲猪瘟病毒的来源位置，例如在生活区(猪舍)的鼠洞外找到的老鼠尸体，其杀灭前的主要活动位置可能是在废弃物处理区、垃圾处理区，因此即便最终检测出老鼠尸体携带了非洲猪瘟病毒，但仍然无法确认非洲猪瘟病毒存在于猪场环境中的生活区、垃圾处理区、废弃物处理区的具体哪一位置，以便于后续对污染区进行针对性的清理、杀毒；(2)准备试验老鼠选择待试验的老鼠，给试验老鼠安装定位追踪装置；之后将试验老鼠于空置后猪场的鼠洞周围饲养；其中，试验老鼠不携带非洲猪瘟病原以及猪场常见其它病原(例如猪瘟、蓝耳、伪狂犬、圆环、口蹄疫等)；(3)引诱老鼠进入鼠洞觅食减少日粮供应，使试验老鼠处于饥饿状态，并给试验老鼠喂食慢性灭鼠药；之后在猪场的鼠洞口周围投放少量食物，同时清除猪场中其它老鼠可食的食物，然后将饲养的老鼠放出，引诱试验老鼠进入鼠洞觅食；(4)刺激老鼠返回、捕捉老鼠刺激或引诱试验老鼠，使试验老鼠从鼠洞中返回，之后捕捉试验老鼠；对于未返回的试验老鼠，通过定位装置找回；(5)提取老鼠携带的病毒用沾有生理盐水的棉拭子，擦拭老鼠体表毛发，提取步骤(4)中试验老鼠体表附着的病毒；(6)病毒检测检测步骤(5)收集的病毒，确定是否存在非洲猪瘟病毒。作为优选技术方案，所述步骤(2)中，选择刚产崽的带崽母鼠作为试验老鼠；所述步骤(4)中，通过带崽母鼠的崽鼠，利用哺乳行为刺激或引诱母鼠从洞中返回来哺乳崽鼠，之后捕捉带崽母鼠。作为优选技术方案，所述的一种检测猪场的环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法包括如下步骤：(1)全场灭鼠对待检测的猪场进行全场灭鼠，以减少试验老鼠的生存压力以及增加试验老鼠在鼠洞中可获得食物的可能；(2)准备试验老鼠选择刚产崽的带崽母鼠作为试验老鼠，给本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)全场灭鼠对待检测的猪场进行全场灭鼠；(2)准备试验老鼠选择待试验的老鼠，给试验老鼠安装定位追踪装置；之后将试验老鼠于空置后猪场的鼠洞周围饲养；其中，试验老鼠不携带非洲猪瘟病原以及猪场常见其它病原；(3)引诱老鼠进入鼠洞觅食减少日粮供应，使试验老鼠处于饥饿状态，并给试验老鼠喂食慢性灭鼠药；之后在猪场的鼠洞口周围投放少量食物，同时清除猪场中其它老鼠可食的食物，然后将饲养的老鼠放出，引诱试验老鼠进入鼠洞觅食；(4)刺激老鼠返回、捕捉老鼠刺激或引诱试验老鼠，使试验老鼠从鼠洞中返回，之后捕捉试验老鼠；对于未返回的试验老鼠，通过定位装置找回；(5)提取老鼠携带的病毒用沾有生理盐水的棉拭子，擦拭老鼠体表毛发，提取步骤(4)中试验老鼠体表附着的病毒；(6)病毒检测检测步骤(5)收集的病毒，确定是否存在非洲猪瘟病毒。

【技术特征摘要】
1.检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)全场灭鼠对待检测的猪场进行全场灭鼠；(2)准备试验老鼠选择待试验的老鼠，给试验老鼠安装定位追踪装置；之后将试验老鼠于空置后猪场的鼠洞周围饲养；其中，试验老鼠不携带非洲猪瘟病原以及猪场常见其它病原；(3)引诱老鼠进入鼠洞觅食减少日粮供应，使试验老鼠处于饥饿状态，并给试验老鼠喂食慢性灭鼠药；之后在猪场的鼠洞口周围投放少量食物，同时清除猪场中其它老鼠可食的食物，然后将饲养的老鼠放出，引诱试验老鼠进入鼠洞觅食；(4)刺激老鼠返回、捕捉老鼠刺激或引诱试验老鼠，使试验老鼠从鼠洞中返回，之后捕捉试验老鼠；对于未返回的试验老鼠，通过定位装置找回；(5)提取老鼠携带的病毒用沾有生理盐水的棉拭子，擦拭老鼠体表毛发，提取步骤(4)中试验老鼠体表附着的病毒；(6)病毒检测检测步骤(5)收集的病毒，确定是否存在非洲猪瘟病毒。2.如权利要求1所述的检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，选择刚产崽的带崽母鼠作为试验老鼠；所述步骤(4)中，通过带崽母鼠的崽鼠，利用哺乳行为刺激或引诱母鼠从洞中返回来哺乳崽鼠，之后捕捉带崽母鼠。3.如权利要求2所述的检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)全场灭鼠对待检测的猪场进行全场灭鼠；(2)准备试验老鼠选择刚产崽的带崽母鼠作为试验老鼠，给每只带崽母鼠进行编号标记，并安装定位追踪装置；之后将带崽母鼠和其崽鼠于空置后猪场的鼠洞周围饲养；其中，带崽母鼠不携带非洲猪瘟病原以及猪场常见其它病原；(3)引诱老鼠进入鼠洞觅食待崽鼠达8～12日龄后，减少带崽母鼠的日粮供应，使带崽母鼠处于饥饿状态，并给带崽母鼠喂食慢性灭鼠药；之后在猪场的鼠洞口周围放少量食物，同时清除猪场中其它老鼠可食的食物，然后将饲养的带崽母鼠放出，引诱带崽母鼠进入鼠洞觅食；(4)刺激老鼠返回、捕捉老鼠通过带崽母鼠的崽鼠，利用哺乳行为刺激或引诱母鼠从洞中返回来哺乳崽鼠，之后捕捉带崽母鼠；对于未返回的带崽母鼠，通过定位装置找回，提取带崽母鼠体表附着的病毒；(5)提取老鼠携带的病毒用沾有生理盐水的棉拭子，擦拭带崽母鼠体表毛发，提取步骤(4)中带崽母鼠体表附着的病毒；(6)病毒检测检测步骤(5)收集的病毒，确定是否为非洲猪瘟病毒。4.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：喻正军，胡巧云，何世成，王昌建，刘道新，唐小明，周小双，
申请(专利权)人：湖南新南方养殖服务有限公司，湖南省动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：湖南,43