六胺银染色试剂盒及其染色方法、保护蛋白剂在六胺银染色领域中的应用技术

本发明专利技术涉及六胺银染色试剂盒及其染色方法、保护蛋白剂在六胺银染色领域中的应用，属于六胺银染色技术领域。本发明专利技术中通过实验发现，BSA、PHA、大肠杆菌蛋白、明胶、奶粉能够提高六胺银染色的效率、改善染色效果，其中BSA的染色效果最好；这些保护蛋白剂可以先与混合染色液中的银离子结合，这样避免了多余的银离子在玻璃片上的非特异性结合附着；同时组织上的粘多糖，被高碘酸氧化成醛，那么醛基就会与银离子较强结合，最终形成特异性着色。因此，保护蛋白剂可以用于在六胺银染色领域，用于制备六胺银染色试剂盒。

Hexamine silver staining kit and its staining method and application of protectant in the field of hexaamine silver staining

【技术实现步骤摘要】
六胺银染色试剂盒及其染色方法、保护蛋白剂在六胺银染色领域中的应用
本专利技术涉及六胺银染色试剂盒及其染色方法、保护蛋白剂在六胺银染色领域中的应用，属于六胺银染色

技术介绍
六胺银染色是病理常规技术中常见的特殊染色，在病理诊断中把它作为显示真菌和肾小球基底膜改变的诊断依据。六胺银法对各种真菌染色都敏感，在少量真菌时，也能很容易发现，对鉴别曲霉和毛酶菌有重要的价值，可结合免疫荧光、电镜等技术全面正确诊断和研究肾小球疾病或者在观察肾小球毛细血管或球囊壁基膜在炎性损伤如断裂、增生、折叠等形态变化时可弥补HE染色法难以观察肾毛细血管球基膜改变的方法学缺陷。六胺银染色原理是组织经高碘酸氧化、使基底膜内的粘多糖暴露醛基，醛基将六胺银还原为黑色金属银，硫代硫酸钠对已显色的银盐起固定作用，并除去未反应的银离子，氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更为清晰。在染色过程中，需要将硼砂溶液、六次甲基四胺溶液和硝酸银溶液按一定比例混合后，然后在大约60-70℃水浴条件下加热，待染色液温度达到60℃时，染色液才能对组织进行染色。传统六胺银染色相关的试剂有7种，其中包括高碘酸溶液、硼砂溶液、六次甲基四胺溶液、硝酸银溶液、硫代硫酸钠溶液、氯化金溶液、复染溶液(亮绿溶液、伊红溶液或苏木素溶液等)。这其中硼砂溶液、六次甲基四胺溶液和硝酸银溶液这三个组份是银染色的核心组份，构成六胺银染色液。传统六胺银染色液需要加热30min以上时，组织开始被染色，大约需要30-60min完成染色，而且染色过程需要专业的病理技术人员进行跟踪和观察其染色强度，决定是否可以染色终止。如果时间控制不好，片子就会被染成黑色。同时溶液开始变灰，随着时间的增长，溶液会变得越来越黑，而且变黑程度越来越快。传统六胺银染色过程中从染色30min开始，整张组织切片(染色液所浸没的部位)开始被染色棕黄色，随着时间的增长，颜色越来越黑。随着时间的增长，在玻璃器皿的四周开始出现明显的银镜反应，即玻璃器皿被镀上了一层金属银，而且染色的片子上也同样被镀上一层银，组织切片看上去特别脏，通过后续的擦拭处理根本无法去除掉。染色后，切片上被染色的组织部位在镜下观察，会有非特异性着色，影响镜下观察和诊断。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种六胺银染色试剂盒，其中包含的保护蛋白剂能够提高六胺银染色效率，改善六胺银染色效果。本专利技术中还提供了一种六胺银染色方法，该染色方法具有更高的染色效率，更清晰的染色效果。本专利技术中还提供了保护蛋白剂在六胺银染色领域中的应用，保护蛋白剂能够用于六氨银染色中，也能够用于制备六胺银染色试剂盒。为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种六胺银染色试剂盒，包括保护蛋白剂、六次甲基四胺、硼砂和硝酸银；所述保护蛋白剂为牛血清白蛋白、植物凝集素、大肠杆菌蛋白、奶粉或明胶。本专利技术中通过实验发现，牛血清白蛋白、植物凝集素、大肠杆菌蛋白、明胶、奶粉等保护蛋白剂能够提高六胺银染色效率，改善六胺银染色效果。并且由保护蛋白剂、六次甲基四胺、硼砂和硝酸银配制得到的六氨银染色液不容易变黑，能够保存较长的时间。保护蛋白剂具有上述效果的原因是：保护蛋白剂可以先与混合染色液中的银离子结合，这样避免了多余的银离子在玻璃片上的非特异性附着；同时组织上的粘多糖，被高碘酸氧化成醛，那么醛基就会与银离子较强结合，最终形成特异性着色。因此，保护蛋白剂可以添加到六胺银染色试剂盒中。分析保护蛋白剂缩短六胺银染色时间的原理为：在染色过程中，六氨银染色液中如果没有保护蛋白，则有效银离子会在玻璃表面很快形成银镜反应，被固定下来，大部分银离子被消耗，所以组织周围有效银离子大大降低；而如果加入保护蛋白后，蛋白先与银离子结合，保护银离子不附着在玻璃上，无法形成银镜反应，组织周围会有大量有效银离子可以与组织上被氧化的醛基结合，因此大大缩短的染色时间。本专利技术六胺银染色试剂盒中的保护蛋白剂、六次甲基四胺、硼砂和硝酸银也可以为单独的固体或者水溶液。优选的，六次甲基四胺和硼砂可以分别与保护蛋白剂制成混合水溶液，能够节省实验人员在染色前繁琐的试剂溶解、稀释、混合工作，节省染色操作的时间。对于硼砂与保护蛋白剂混合水溶液的优选方案，所述混合水溶液中保护蛋白剂和硼砂的质量浓度比为：0.005-0.05：0.1-0.5。对于六次甲基四胺与保护蛋白剂混合水溶液的优选方案，所述混合水溶液中保护蛋白剂和六次甲基四胺的质量浓度比为：0.005-0.05：0.5-2。进一步优选的方案，所述保护蛋白剂、六次甲基四胺和硼砂三者为混合水溶液，并且六次甲基四胺和硼砂都不会与保护蛋白剂反应，因此其混合水溶液能够保存较长的时间，能够进一步节省染色操作的时间。所述保护蛋白剂、六次甲基四胺和硼砂的质量浓度比为：0.005-0.05：0.5-2：0.1-0.5。优选的，所述试剂盒中还包括高碘酸和硫代硫酸钠，在六胺银染色领域，高碘酸和硫代硫酸钠是常用的切片组织氧化剂和固银试剂，试剂盒中加入所述高碘酸和硫代硫酸钠中的一种或两种，可以在染色时与其他试剂配合使用，节省染色操作时间。所述高碘酸和硫代硫酸钠可以为固体或水溶液。进一步优选的，所述试剂盒中还可以包括氯化金和复染试剂中的一种或两种，氯化金可以用于固色前对切片组织进行调色，氯化金可以为固体或水溶液；复染试剂可以进一步对于组织切片进行染色，便于观察，复染试剂为苏木素水溶液。本专利技术的六胺银染色方法，包括如下步骤：1)将待染色的组织切片进行氧化处理；2)将步骤1)中氧化处理后的组织切片放入六胺银染色液中于60-70℃下浸染10-30min；所述六胺银染色液中包括保护蛋白剂、六次甲基四胺、硼砂和硝酸银；所述六胺银染色液中保护蛋白剂的质量浓度为0.005-0.05％，六次甲基四胺的质量浓度为0.5-2％，硼砂的质量浓度为0.1-0.5％；硝酸银的质量浓度为0.05-0.15％；所述保护蛋白剂为牛血清白蛋白、植物凝集素、大肠杆菌蛋白、奶粉或明胶；3)将步骤2)中浸染后的组织切片进行固银处理。本专利技术中的六胺银染色方法与传统六氨银染色方法相比，在六胺银染色液中加入了质量浓度为0.005-0.05％的保护蛋白剂，提高六胺银染色效率，改善六胺银染色效果；染色后背景干净，切片组织清晰可见。步骤1)的氧化处理会使得切片组织上的粘多糖被高碘酸氧化成醛，醛基会与银离子结合，形成特异性着色。在六胺银染色领域，高碘酸溶液是常用的氧化试剂，具体的使用高碘酸溶液对待染色的组织切片进行氧化处理10-20min，所述高碘酸溶液的质量浓度为0.5-1.5％。步骤3)的固银处理对已显色的银盐起固定作用，并除去未反应的银离子。在六胺银染色领域，硫代硫酸钠是常用的固银试剂，步骤3)中使用硫代硫酸钠溶液对步骤2)中浸染后的组织切片进行固银处理1-5min；所述硫代硫酸钠溶液的质量浓度为1-5％。在六胺银染色领域，氯化金用于对于切片组织进行调色，氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更为清晰；组织切片经过氯化金调色后，切片颜色由黄变黑，更容易观察。优选的，步骤2)中组织切片在六胺银染色液中浸染后，使用氯化金溶液进行调色处理，然后再进行固银处理；所述氯化金溶液的质量浓度为0.1-1％。保护蛋白剂在六胺银染色领域中的应用，所述保护蛋白剂为牛本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种六胺银染色试剂盒，其特征在于：包括保护蛋白剂、六次甲基四胺、硼砂和硝酸银；所述保护蛋白剂为牛血清白蛋白、植物凝集素、大肠杆菌蛋白、奶粉或明胶。

【技术特征摘要】
1.一种六胺银染色试剂盒，其特征在于：包括保护蛋白剂、六次甲基四胺、硼砂和硝酸银；所述保护蛋白剂为牛血清白蛋白、植物凝集素、大肠杆菌蛋白、奶粉或明胶。2.根据权利要求1所述的六胺银染色试剂盒，其特征在于：所述保护蛋白剂、六次甲基四胺和硼砂为混合水溶液；所述混合水溶液中保护蛋白剂、六次甲基四胺和硼砂的质量浓度比为：0.005-0.05：0.5-2：0.1-0.5。3.根据权利要求1所述的六胺银染色试剂盒，其特征在于：所述保护蛋白剂和硼砂为混合水溶液；所述混合水溶液中保护蛋白剂和硼砂的质量浓度比为：0.005-0.05：0.1-0.5。4.根据权利要求1所述的六胺银染色试剂盒，其特征在于：所述保护蛋白剂和六次甲基四胺为混合水溶液；所述混合水溶液中保护蛋白剂和六次甲基四胺的质量浓度比为：0.005-0.05：0.5-2。5.根据权利要求1所述的六胺银染色试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括高碘酸、硫代硫酸钠、氯化金和/或复染试剂。6.一种六胺银染色方法，其特征在于：包括如下步骤：1）将待染色的组织切片进行氧化处理；2）将步骤1）中氧化处理后的组织切片放入六胺银染色液中于60-70℃下浸染10-3...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁永波，刘玲玲，陈玲，李莉，刘文弟，齐华，张娟丽，于婷，
申请(专利权)人：河南赛诺特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41