检测分枝杆菌的方法及其试剂盒技术

本发明专利技术提供一种检测分枝杆菌的方法及其试剂盒。所述方法包含下列步骤：a)提供样本；b)提供引物对，选自由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、与SEQ ID NO：1具有约45％至约99％相似度的序列、与SEQ ID NO：2具有约60％至约99％相似度的序列、SEQ ID NO：1的互补链以及SEQ ID NO：2的互补链所组成的组；c)利用引物对与样本进行聚合酶链式反应以获得产物；以及d)分析产物以检测分枝杆菌的存在。本发明专利技术还提供一种检测分枝杆菌的试剂盒，包含前述所提到的引物对。

Detection of Mycobacterium and Its Kit

【技术实现步骤摘要】
检测分枝杆菌的方法及其试剂盒
本专利技术涉及一种检测方法及其试剂盒，特别是一种检测分枝杆菌的方法及其试剂盒。
技术介绍
分枝杆菌可分为结核分枝杆菌群(Mycobacteriumtuberculosiscomplex,MTBC)和非结核分枝杆菌群。结核病的一些致病原属于结核分枝杆菌群(MTBC)的细菌，例如非洲分枝杆菌(M.africanum)、牛分枝杆菌(M.bovis)、羊分枝杆菌(M.caprae)、卡式分枝杆菌(M.canettii)、田鼠分枝杆菌(M.microti)、海豹分枝杆菌(M.pinnipedii)以及结核分枝杆菌(M.tuberculosis)。这些致病原会造成人类或动物的结核病，其中又以非洲分枝杆菌(M.africanum)、牛分枝杆菌(M.bovis)以及结核分枝杆菌(M.tuberculosis)为临床上人类肺结核病的主要菌种。结核病可发生在任何器官或组织，例如肺脏、淋巴结、脑膜、胸膜、肾脏、骨骼、皮肤、消化道及泌尿生殖道等等。若在早期给予适当的抗结核药物治疗，结核病几乎可以百分之百痊愈。但若没有在早期时予以治疗，在三年内约有一半的致死率。所以目前亟需一种检测方法能够在临床上早期检测出是否受到结核分枝杆菌群的病原的感染，其对于疾病治愈率的提升有其重要性。
技术实现思路
本专利技术的一个方面为一种检测分枝杆菌的方法，包含下列步骤：a)提供样本；b)提供引物对，引物对选自由SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、与SEQIDNO：1具有约45％至约99％相似度的序列、与SEQIDNO：2具有约60％至约99％相似度的序列、SEQIDNO：1的互补链以及SEQIDNO：2的互补链所组成的组；c)利用引物对与样本进行聚合酶链式反应以获得产物；以及d)分析产物以检测分枝杆菌的存在。根据本专利技术的一些实施方式，步骤a)提供样本包含：提供样品包含结核分枝杆菌群(Mycobacteriumtuberculosiscomplex,MTBC)。根据本专利技术的一些实施方式，样品为血液、痰液、支气管肺泡冲洗液、尿液、粪便或其组合。根据本专利技术的一些实施方式，步骤c)利用引物对与样本进行聚合酶链式反应以获得产物包含进行聚合酶链式反应使得引物对扩增结核分枝杆菌群中IS6110序列的部分序列以获得产物，其中此部分序列为SEQIDNO：3。根据本专利技术的一些实施方式，进一步包含：提供寡核苷酸探针。根据本专利技术的一些实施方式，步骤c)利用引物对与样本进行聚合酶链式反应以获得产物之前，包含使用寡核苷酸探针对样本进行杂交反应。根据本专利技术的一些实施方式，聚合酶链式反应为实时定量聚合酶链式反应。本专利技术的另一方面为一种检测分枝杆菌的试剂盒，包含一引物对。上述引物对选自由SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、与SEQIDNO：1具有约45％至约99％相似度的序列、与SEQIDNO：2具有约60％至约99％相似度的序列、SEQIDNO：1的互补链以及SEQIDNO：2的互补链所组成的组。根据本专利技术的一些实施方式，引物对为SEQIDNO：1及SEQIDNO：2。根据本专利技术的一些实施方式，进一步包含样品，其中样品为血液、痰液、支气管肺泡冲洗液、尿液、粪便或其组合。根据本专利技术的一些实施方式，进一步包含目标基因，其中目标基因为结核分枝杆菌群(Mycobacteriumtuberculosiscomplex,MTBC)的IS6110序列。根据本专利技术的一些实施方式，进一步包含模板，其具有约100个碱基对至约250个碱基对的长度。根据本专利技术的一些实施方式，模板为SEQIDNO：3。附图说明当结合附图阅读以下详细描述时将更好地理解本公开的内容。但应注意依照本领域的标准做法，各种特征未按照比例绘制。事实上，各种特征的尺寸为了清楚的讨论而可被任意放大或缩小。图1是根据本专利技术一些实施方式，显示IS6110序列的部分片段及引物对设计的位置。图2是根据本专利技术一些实施方式，测试在不同模板量的情形下，以引物对SEQIDNO：1及SEQIDNO：2进行实时定量聚合酶链式反应的扩增曲线图。图3是依据图2，显示其不同模板起始量的标准曲线图。图4是根据本专利技术一些实施方式，在模板量为10拷贝数时，以引物对SEQIDNO：1及SEQIDNO：2进行实时定量聚合酶链式反应的扩增曲线图。图5是根据本专利技术一些实施方式，在SEQIDNO：1及SEQIDNO：2的基础上而衍生的相似引物对，其进行实时定量聚合酶链式反应的扩增曲线图。图6是根据本专利技术一些实施方式，以引物对SEQIDNO：1及SEQIDNO：2进行检测的电泳结果图。具体实施方式为使本公开内容的描述更加详尽与完备，下文针对本专利技术的实施方式与具体实施例提出说明性的描述，但这并非实施或运用本专利技术具体实施例的唯一形式。以下所公开的各实施例，在有益的情形下可相互组合或取代，也可在一实施例中附加其他的实施例，而无需进一步的记载或说明。在以下描述中，将详细叙述许多特定细节以使读者能够充分理解以下的实施例。然而，可在没用这些特定细节的情况下实践本专利技术的实施例。在本文中，除非内文中对于冠词有所特别限定，否则“一”与“该”可泛指单一个或多个。将进一步理解的是，本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”及相似词汇，指明其所记载的特征、区域、整数、步骤、操作、组件与/或组件，但不排除其所述或额外的其一个或多个其它特征、区域、整数、步骤、操作、组件、组件，与/或其中之组。本专利技术的实施例提供一种检测分枝杆菌的方法，包含下列步骤：a)提供样本及b)提供引物对。引物对选自由SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、与SEQIDNO：1具有约45％至约99％相似度的序列、与SEQIDNO：2具有约60％至约99％相似度的序列、SEQIDNO：1的互补链以及SEQIDNO：2的互补链所组成的组。接着，c)利用前述引物对与样本进行聚合酶链式反应以获得产物。最后，d)分析产物以检测分枝杆菌的存在。样本可包含各种不同来源的样品，例如血液、痰液、支气管肺泡冲洗液、尿液、粪便或其组合。在一些实施方式中，检测分枝杆菌的方法中所提供的样品包含结核分枝杆菌群(Mycobacteriumtuberculosiscomplex,MTBC)。引物对的选择如前文所述，并不限于本文所公开的SEQIDNO：1及SEQIDNO：2。引物对在选择上除了可包含SEQIDNO：1的互补链及SEQIDNO：2的互补链之外，SEQIDNO：1及SEQIDNO：2所示的序列还可容许某种程度的变异。也就是说，与SEQIDNO：1具有约45％至约99％相似度的序列以及与SEQIDNO：2具有约60％至约99％相似度的序列应用于本实施方式中也有相同的功效。举例而言，引物对的选择可包含SEQIDNO：1的简并序列及SEQIDNO：2的简并序列。此处所述的“简并序列”是指本文所公开的寡核苷酸序列中部分核苷酸被其他核苷酸所取代。换言之，SEQIDNO：1的简并序列意味着在SEQIDNO：1序列长度不变的情形下，可容许其寡核苷酸具有约1％至约55％的变异程度。而SEQIDNO：2的简并序列意味着在SEQIDNO：2序列长度不变的情形下，可容许其寡核苷酸具有约1％至约40％的变异程度。在另一些实施例中，引物对的选本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测分枝杆菌的方法，包含下列步骤：a)提供一个样本；b)提供一对引物对，该引物对选自由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、与SEQ ID NO：1具有约45％至约99％相似度的序列、与SEQ ID NO：2具有约60％至约99％相似度的序列、SEQ ID NO：1的互补链以及SEQ ID NO：2的互补链所组成的组；c)利用该引物对与该样本进行聚合酶链式反应以获得一个产物；以及d)分析该产物以检测分枝杆菌的存在。

【技术特征摘要】
1.一种检测分枝杆菌的方法，包含下列步骤：a)提供一个样本；b)提供一对引物对，该引物对选自由SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、与SEQIDNO：1具有约45％至约99％相似度的序列、与SEQIDNO：2具有约60％至约99％相似度的序列、SEQIDNO：1的互补链以及SEQIDNO：2的互补链所组成的组；c)利用该引物对与该样本进行聚合酶链式反应以获得一个产物；以及d)分析该产物以检测分枝杆菌的存在。2.如权利要求1所述的检测分枝杆菌的方法，其中步骤a)提供该样本包含提供一个包含结核分枝杆菌群(Mycobacteriumtuberculosiscomplex,MTBC)的样品。3.如权利要求2所述的检测分枝杆菌的方法，其中该样品为血液、痰液、支气管肺泡冲洗液、尿液、粪便或其组合。4.如权利要求2所述的检测分枝杆菌的方法，其中利用该引物对与该样本进行该聚合酶链式反应以获得该产物，包含进行聚合酶链式反应使得该引物对扩增该结核分枝杆菌群中IS6110序列的一部分序列以获得该产物，其中该部分序列为SEQIDNO：3。5.如权利要求1所述的检测分枝杆菌的方法，进一步包含提供一条寡核苷酸探针。6.如权利要求5所述的检测分枝杆菌的方法，其中利用该引物对与该样本...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹志成，吴旻宪，周文彬，王信尧，林倩如，
申请(专利权)人：台达电子工业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71