一种利伐沙班有关物质的检验方法技术

本发明专利技术提供一种利伐沙班有关物质的检验方法，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(柱前加峰形前延抑制器，Welch‑Ultimate XB‑C18，4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱)；流动相：0.04mol/L～0.06乙酸铵为流动相A，流动相B为乙腈；柱温：25～35℃；检测波长：245nm～255nm；流速：0.8～1.2ml/min；采用梯度洗脱等色谱条件进行检测，该方法专属性好、分析速度快、重现性高，可用于准确、灵敏的检测出利伐沙班中13个工艺杂质。

A Method for Testing Relevant Substances of Rivaroxaban

【技术实现步骤摘要】
一种利伐沙班有关物质的检验方法
本专利技术属于有关物质检验领域，特别涉及一种利伐沙班有关物质的检验方法。
技术介绍
利伐沙班是一种抑制因子Xa的口服药物。通过抑制因子Xa中断凝血瀑布的内源性和外源性途径，抑制凝血酶的产生和血栓形成。利伐沙班并不抑制凝血酶(活化因子Ⅱ)，也并未证明其对血小板有影响。利伐沙班由德国拜耳公司与美国强生公司联合开发，于2008年9月首先在加拿大上市，同年在欧洲上市，2011年7月在美国上市。目前，现有技术公开的利伐沙班杂质检验方法系统适应性等性能差，因此需要提供一种对利伐沙班中13个杂质均适用的检验方法。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一种利伐沙班有关物质的检验方法。本专利技术具体技术方案如下：本专利技术提供一种利伐沙班有关物质的检验方法，该方法采用以下条件进行测定：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A：0.04-0.06mol/L的乙酸铵溶液；流动相B：乙腈；柱温：20～35℃；检测波长：245nm～255nm；流速：0.8～1.2mL/min；溶剂：乙腈：0.05mol/L乙酸铵溶液＝2：3；采用梯度洗脱。进一步的改进，流动相A为0.05mol/L乙酸铵溶液。进一步的改进，梯度洗脱的程序为：。进一步的改进，色谱柱规格为：Welch-UltimateXB-C18，4.6mm×250mm，5μm，柱子前面加月旭峰形抑制器。进一步的改进，所述流速为1mL/min。进一步的改进，所述方法还包括供试品溶液、对照品溶液和系统适用性溶液的制备。进一步的改进，所述供试品溶液的制备方法为：取利伐沙班25mg，精密称定，置25mL量瓶中，加溶剂适量，超声15min，用溶剂稀释至刻度，摇匀，取续滤液作为供试品溶液。进一步的改进，所述系统适用性溶液的制备方法为：利伐沙班中间体PM1、中间体PM2、中间体PM3、杂质对照品9421R、杂质对照品9423R、杂质对照品9424R、杂质对照品9425R、杂质对照品94212R、杂质对照品94215R、杂质对照品94218R、杂质对照品94227R、杂质对照品94231R、杂质对照品94242R和利伐沙班对照品各适量，精密称定，加溶剂使溶解并稀释成每1mL含各杂质对照品1μg、利伐沙班1μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。本专利技术提供的利伐沙班有关物质的检验方法，能够更好的控制利伐沙班的质量。附图说明图1是本专利技术一种利伐沙班系统适用性色谱图；图2是利伐沙班中间体PM1的结构图；图3是中间体PM2的结构图；图4是中间体PM3的结构图；图5是杂质对照品9421R的结构图；图6是杂质对照品9423R的结构图；图7是杂质对照品9424R的结构图；图8是杂质对照品9425R的结构图；图9是杂质对照品94212R的结构图；图10是杂质对照品94215R的结构图；图11是杂质对照品94218R的结构图；图12是杂质对照品94227R的结构图；图13是杂质对照品94231R的结构图；图14是杂质对照品94242R的结构图。具体实施方式实验例1系统适用性试验各杂质定位溶液的配制：精密称取利伐沙班中间体PM1、中间体PM2、中间体PM3、杂质对照品9421R、杂质对照品9423R、杂质对照品9424R、杂质对照品9425R、杂质对照品94212R、杂质对照品94215R、杂质对照品94218R、杂质对照品94227R、杂质对照品94231R、杂质对照品94242R和利伐沙班对照品各适量，分别加溶剂(乙腈-0.05mol/L乙酸铵溶液(2∶3)溶解并稀释制成每1mL约含20μg的溶液，作为各杂质定位溶液；供试品溶液的配制：取利伐沙班25mg，精密称定，置25mL量瓶中，加溶剂适量，超声15min使溶解，用溶剂(乙腈-0.05mol/L乙酸铵溶液(2∶3))稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；对照品溶液的配制：精密量供试品溶液2mL，置100mL量瓶中，加用溶剂(乙腈-0.05mol/L乙酸铵溶液(2∶3))稀释至刻度，摇匀，再精密量取1mL，置10mL量瓶中，加溶剂(乙腈-0.05mol/L乙酸铵溶液(2∶3))稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；系统适用性溶液的配制：利伐沙班中间体PM1、中间体PM2、中间体PM3、杂质对照品9421R、杂质对照品9423R、杂质对照品9424R、杂质对照品9425R、杂质对照品94212R、杂质对照品94215R、杂质对照品94218R、杂质对照品94227R、杂质对照品94231R、杂质对照品94242R和利伐沙班对照品各适量，精密称定，加溶剂使溶解并稀释成每1mL含各杂质对照品1μg、利伐沙班1μg的混合溶液，作为系统适用性溶液；测定：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A：0.05mol/L的乙酸铵溶液；流动相B：乙腈，采用梯度洗脱方法。柱温为30℃，流速为1.0mL/min，检测波长为250nm；梯度洗脱的程序为：精密量取上述各杂质定位溶液及系统适用性溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果见表1，系统适用性色谱图见附图1。表1专属性-定位试验结果结论：溶剂不干扰供试品溶液中各已知杂质的有关物质测定，各杂质之间，杂质与主峰之间均分离良好，各拖尾因子，理论踏板数均满足有关物质测定的要求。实验例2线性与范围试验溶剂：乙腈-0.05mol/L乙酸铵溶液(2∶3)。线性样品溶液：取利伐沙班中间体PM1、中间体PM2、中间体PM3、杂质对照品9421R、杂质对照品9423R、杂质对照品9424R、杂质对照品9425R、杂质对照品94212R、杂质对照品94215R、杂质对照品94218R、杂质对照品94227R、杂质对照品94231R、杂质对照品94242R和利伐沙班对照品各约10mg，分别置50mL量瓶中，加溶剂适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各贮备溶液，精密量取各贮备溶液5mL，置100mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得各线性样品溶液。精密量取上述各溶液40μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表2。表2线性与范围试验结果结论：(1)中间体PM3在0.0075μg/mL～2.0μg/mL(相当于供试品浓度的0.00075％～0.2％)的范围内，线性回归方程为y＝26.5920x-0.0255r＝1.0000，线性回归显著。(2)杂质9425R在0.0075μg/mL～2.0μg/mL(相当于供试品浓度的0.00075％～0.2％)的范围内，线性回归方程为y＝17.8348x+0.0096r＝1.0000，线性回归显著。(3)杂质9421R在0.0047μg/mL～1.9μg/mL(相当于供试品浓度的0.0005％～0.2％)的范围内，线性回归方程为y＝27.4773+0.0439r＝1.0000，线性回归显著。(4)杂质9423R在0.005μg/mL～2.0μg/mL(相当于供试品浓度的0.0005％～0.2％)的范围内，线性回归方程为y＝35.4325x-0.0017r＝1.0000，线性回归显著。(5)杂质94218R在0.005μg/mL～1.9μg/mL(相当于供试品浓度的0.0005％～0.2％)的范围内，线性回归方程为y＝25.5680x+0.0238本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利伐沙班有关物质的检验方法，其特征在于，所述方法采用以下条件进行测定：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A：0.04～0.06mol/L的乙酸铵溶液；流动相B：乙腈；柱温：20～35℃；检测波长：245nm～255nm；流速：0.8～1.2mL/min；溶剂：乙腈：0.05mol/L乙酸铵溶液＝2：3；采用梯度洗脱。

【技术特征摘要】
1.一种利伐沙班有关物质的检验方法，其特征在于，所述方法采用以下条件进行测定：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A：0.04～0.06mol/L的乙酸铵溶液；流动相B：乙腈；柱温：20～35℃；检测波长：245nm～255nm；流速：0.8～1.2mL/min；溶剂：乙腈：0.05mol/L乙酸铵溶液＝2：3；采用梯度洗脱。2.如权利要求1所述的检验方法，其特征在于，流动相A为0.05mol/L乙酸铵溶液。3.如权利要求1所述的检验方法，其特征在于，梯度洗脱的程序为：。4.如权利要求1所述的检验方法，其特征在于，色谱柱规格为：Welch-UltimateXB-C18，4.6mm×250mm，5μm，柱子前面加月旭峰形抑制器。5.如权利要求2所述的检验方法，其特征在于，所述流速为1mL/min。6.如权利要求1所述的检验方法，其特征在于，所述方法还包括供试品溶液、对照品溶液和系统适用性溶液的制备。7.如权利要求6所述的检验方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋更申，李中伟，李军立，张婷婷，
申请(专利权)人：北京悦康科创医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11