桑辛素在制备治疗脂肪肝药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种桑辛素在制备治疗脂肪肝药物中的应用。本发明专利技术通过科学实验首次发现，桑辛素可降低油酸诱导的脂肪变性HepG2细胞内的脂质蓄积，抑制细胞脂质摄取，可上调PPARa、LDLR、CYP7A1的蛋白表达，具有明显的降脂作用和改善非酒精性脂肪肝的作用，以桑辛素作为活性成分可望开发成防治非酒精性脂肪肝的药物制剂。

The Application of Sanxin in the Preparation of Drugs for the Treatment of Fatty Liver

【技术实现步骤摘要】
桑辛素在制备治疗脂肪肝药物中的应用
本专利技术涉及药物
，特别涉及一种桑辛素在制备治疗脂肪肝药物中的应用。
技术介绍
非酒精性脂肪肝(nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD)是一种常见的代谢性疾病，以无过量饮酒史、肝细胞脂肪变性和脂质沉积为主要病理特征。从脂肪肝到肝癌仅需四个阶段：脂肪肝、非酒精性脂肪肝炎及肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌。脂肪肝不仅仅是一种独立疾病，伴随着患者血糖、血脂的影响，还会引起肥胖、糖尿病等多种共病的发生。大部分肥胖患者都伴有肝脏脂肪变性。随着人民生活水平的提高，NAFLD以其高患病率、低龄化趋势和慢性进展性经过等因素，已经成为包括我国在内的全球第一大慢性肝病。由于人口老龄化进程的加剧，肝脏的疾病谱也发生着很大的变化。越来越多的研究证实，NAFLD的临床负担不仅限于肝脏，更是肝外并发症(心血管疾病、恶性肿瘤等)的独立风险因素。目前针对NAFLD的治疗尚无特效药物，因此从中药中寻求防治NAFLD的有效单体成分并研究其作用机制是当前研究领域中的热点。NAFLD始于肝脏的脂质堆积，研究脂质代谢机制成为一个重要的方向。在脂质代谢中，过氧化物酶体增殖活化受体a(peroximeproliferator-activatedreceptorsa，PPARa)发挥脂肪酸氧化作用，是一个高表达于肝脏的核受体，能够对参与脂肪酸氧化、吸收和炎症的基因发挥转录作用。7a羟化酶(CYP7A1)是初级胆汁酸合成的关键酶，对维持机体胆固醇内环境稳定至关重要。此外，人体中的大部分血浆胆固醇通过LDL受体(LDLR)介导的摄取和HDL-介导的逆向转运回肝脏中重新代谢。LDLR表达或活性的增加，可以增强吸收血浆中LDL-C，从而降低血浆中的LDL-C水平。桑辛素(Morusin，CAS号为62596-29-6)，又称桑根皮素，是从桑科植物桑白皮(MorusalbaL.)中分离出的活性单体成分，其分子式为C24H25O6，分子量420.46，分子结构式如下：研究表明，桑辛素具有抗肿瘤、改善认知障碍、抑制甘油三酯(TG)合成作用，其在体内体外水平上通过诱导细胞凋亡和抑制血管生成抑制肝癌细胞增殖；通过抑制Bax的表达诱导细胞凋亡，从而抑制人乳腺癌细胞的存活；可以显著改善ALCL3诱导的大鼠记忆损伤，可以改善认知障碍，具有潜在的保护作用。此外，桑辛素还可显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化，TG的抑制率达到56％，对GPDH(甘油三磷酸脱氢酶)的抑制率达到70％。但是到目前为止，桑辛素是否具有降脂作用及其在非酒精性脂肪肝中的作用尚未见相关报道。
技术实现思路
为了解决现有技术的问题，本专利技术实施例提供了一种桑辛素在制备治疗脂肪肝药物中的应用。所述技术方案如下：第一方面，桑辛素在制备上调PPARa蛋白表达药物中的应用。第二方面，桑辛素在制备上调LDLR蛋白表达药物中的应用。第三方面，桑辛素在制备上调CYP7A1蛋白表达药物中的应用。第四一方面，桑辛素在制备治疗脂肪肝药物中的应用。进一步的，所述脂肪肝具体为非酒精性脂肪肝。进一步的，所述治疗脂肪肝药物包括片剂、滴丸剂、胶囊剂、注射剂、缓释剂和控释剂。本专利技术实施例提供的技术方案带来的有益效果是：本专利技术通过科学实验首次发现，桑辛素可降低油酸诱导的脂肪变性HepG2细胞内的脂质蓄积，抑制细胞脂质摄取，可上调PPARa、LDLR、CYP7A1的蛋白表达，具有明显的降脂作用和改善非酒精性脂肪肝的作用，以桑辛素作为活性成分可望开发成防治非酒精性脂肪肝的药物制剂。附图说明为了更清楚地说明本专利技术施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1是本专利技术实施例中不同浓度桑辛素对HepG2细胞增殖活性影响图；图2是本专利技术实施例中不同浓度油酸对HepG2细胞增殖活性的影响图；图3是本专利技术实施例中300nM油酸对HepG2细胞诱导24h后的油红O细胞染色图；图4是本专利技术实施例中不同浓度桑辛素对300nM油酸诱导的HepG2细胞的油红O细胞染色图；图5是本专利技术实施例中不同浓度桑辛素对300nM油酸诱导的HepG2细胞的脂质含量测定图；图6是本专利技术实施例中不同浓度桑辛素对300nM油酸诱导的HepG2细胞的Dil-LDL摄取影响图；图7是本专利技术实施例中不同浓度桑辛素对300nM油酸诱导的HepG2细胞PPARa、LDLR、CYP7A1蛋白表达的条带图；图8本专利技术实施例中不同浓度桑辛素对300nM油酸诱导的HepG2细胞PPARa、LDLR、CYP7A1蛋白表达的影响图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术实施方式作进一步地详细描述。实施例(1)桑辛素对HepG2细胞增殖的影响将HepG2细胞悬液接种于96孔板，104/孔，每孔加入培养基100μl，第一列不加细胞只加培养液作为空白组，第二列为处于正常生理状态下的细胞作为对照组，其他各列为处于正常生理状态下的细胞，作为给药组，每组5个复孔。待细胞密度长到80-90％左右时，吸弃上清，加药组给予不同浓度桑辛素(1、2.5、5、10、20、40μM)，对照组给予含有0.08％DMSO的培养基，干预24h，吸弃培养基，按照1:10将CCK8试剂和培养基混匀，向每孔加入100μl混匀后的培养基，继续在培养箱内孵育1-4h，应用酶标仪测定各孔在450nm波长下的OD值，重复三次，取平均值，计算细胞存活率。细胞存活率＝[(加药组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)]*100％。结果如图1所示，本实验首先以一系列较为宽泛的桑辛素浓度作用于HepG2细胞，于24后测定其细胞活性，以确定后续实验中桑辛素作用的大致浓度。在浓度≥20μM时，细胞活性显著性降低，因此考虑2.5、5、10μM作为后续实验研究。图1中，与对照组相比，***P<0.001。(2)油酸(OA)诱导HepG2细胞脂肪肝变性模型的建立a、CCK-8法筛选出无细胞毒性的OA摩尔浓度将对数生长期的HepG2细胞消化后，用含10％FBS的RPM640培养基稀释后，接种于96孔板，104/孔，每孔加入培养基100μl，分为空白组、对照组和模型组，每组5个复孔。待细胞密度长到80-90％左右时，吸弃上清，模型组给予不同浓度的油酸钠溶液(0.1、0.3、0.5、0.8mM)，对照组给予含1％BSA的培养基，干预24h，吸弃培养基，按照1:10将CCK8试剂和培养基混匀，向每孔加入100μl混匀后的培养基，继续在培养箱内孵育1-4h，应用酶标仪测定各孔在450nm波长下的OD值，计算细胞存活率。结果如图2所示，随着OA浓度的升高，HepG2细胞增殖活性呈下降趋势。与0mM浓度组比较，300mM油酸作用24h后，细胞增殖活性未受到明显改变，而500mM、800mM的油酸对细胞增殖活性呈明显下降。因此，为了降低油酸对肝细胞毒性的影响，后续试验考虑300mM油酸作用24h诱导HepG2细胞。图2中与对照组相比，**P<0.01。b、采用油红O染色观察无毒OA的脂滴形成情况将对数生长期的HepG2细胞消化后，用含10％FBS的RPM640培养基稀释后，接种于6孔板，5×105/孔，每孔2ml细胞悬液。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.桑辛素在制备上调PPARa蛋白表达药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.桑辛素在制备上调PPARa蛋白表达药物中的应用。2.桑辛素在制备上调LDLR蛋白表达药物中的应用。3.桑辛素在制备上调CYP7A1蛋白表达药物中的应用。4.桑辛素在制备治疗脂肪肝药物中...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴正治，李艳，李卫民，李利民，刘展艳，刘洁人，
申请(专利权)人：深圳市老年医学研究所，吴正治，
类型：发明
国别省市：广东,44