一种化妆品中过敏原检测方法技术

本发明专利技术提供了一种化妆品中过敏原检测法，包括：甲醇和2g/L抗坏血酸水溶液的混合溶液配置56种过敏原物质的混合标准品溶液，其中丁香酚和异丁香酚等7组同分异构体单独配制单标溶液，在静电场轨道阱高分辨质谱的正负离子一级质谱全扫描加数据依赖的二级质谱扫描方式下进行质谱分析，采集一级母离子精确质量数、保留时间和二级碎片离子信息建立高分辨质谱数据库；将待测样品采用甲醇和2g/L抗坏血酸水溶液的混合溶液提取，进行质谱分析，利用数据库采用Tracefinder软件建立筛查和定量分析方法，对样品中的过敏原物质进行检测。本发明专利技术方法快捷、灵敏度高、特异性好。

A Method for Detecting Allergens in Cosmetics

【技术实现步骤摘要】
一种化妆品中过敏原检测方法
本专利技术属于化合物分析检测
，具体涉及化妆品中过敏原检测方法。
技术介绍
化妆品是人们生活中必不可少的日用品。但由于化妆品中含有的香料、防腐剂和染料成分等过敏原物质，以及人类自身免疫系统的多样性和特异性，经常会让消费者因为使用化妆品而引起皮肤及其附属器病变，即通常所说的化妆品皮肤病。据中国化妆品人体不良反应监测结果显示：近年来，随着化妆品种类的增加，临床化妆品皮肤病的发病率连年增长，据统计化妆品过敏中绝大部分是由于香料、防腐剂及染料成分引起。目前针对这些过敏原成分的主要检测方法有液相色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法，但是传统的检测方法在检测分析中存在一些问题：(1)对复杂基质的抗干扰能力不足，常出现假阳性；(2)由于不同种类过敏原化学性质不同，往往只针对某一类过敏原建立提取方法，尚没有针对几大类过敏原同时进行提取的方法；(3)研究者针对不同种类的过敏原物质，往往设置不同的仪器参数，建立不同的仪器检测方法，无法一次检测即完成所有组分筛查，使检测过程过于繁琐。因此急需建立快速、准确、高通量的检测方法，有效监测化妆品中过敏原物质。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术的目的在于提供化妆品中过敏原检测方法，该方法可用于香料类、防腐剂类、染发组分3大类56种过敏原检测，方法快捷、灵敏度高、特异性好。本专利技术的技术方案是：一种化妆品中过敏原检测法，包括如下步骤：(1)建立过敏原数据库；(2)待测样品的处理；(3)检测：采用超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱进行检测，所述超高效色谱条件为：色谱柱：ZORBAXEclipsePlusC18；流动相A为甲醇，流动相B为5mmol/L的乙酸铵水溶液，梯度洗脱程序；所述质谱的条件为：电喷雾离子源；正负离子扫描；离子源温度：350℃；喷雾电压：正离子模式3.5kV，负离子模式3.0kV；(4)定性筛查方法的建立；(5)定量分析方法的建立。所述过敏原为香料类过敏原、防腐剂类过敏原、染发成分类过敏原，所述香料类过敏原为苎烯、苯甲醇、芳樟醇、香茅醇、香叶醇、羟基香茅醛、丁香酚、异丁香酚、α-异甲基紫罗兰酮、铃兰醛、新铃兰醛、已基肉桂醛、苯甲酸苄酯、水杨酸苄酯、肉桂酸苄酯、戊基肉桂醛、肉桂醇柠檬醛、肉桂醛、香豆素；所述防腐剂类过敏原为甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、重氮烷基脲、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸丁酯、水杨酸、苯甲酸、山梨酸；所述染发成分类过敏原为间苯二酚、甲苯-2，5-二胺硫酸盐、对苯二胺、对氨基苯酚、间氨基苯酚、2-氨基-3羟基吡啶、4-氯间苯二酚、4-氨基-2-羟基甲苯、2，4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐、N，N-双(2-羟乙基)对苯二胺硫酸盐、2-氯对苯二胺硫酸盐、2-甲基间苯二酚、6-氨基间甲酚、苯基甲基吡唑啉酮、4-氨基-3-硝基苯酚、4-氨基间甲酚、对甲基氨基苯酚硫酸盐、4-硝基邻苯二胺、2，6-二氨基吡啶、6-羟基吲哚、2，7-萘二酚、N-苯基对苯二胺、1，5-萘二酚或1-萘酚。所述步骤(1)用甲醇和2g/L抗坏血酸水溶液，1∶1，v/v，配置过敏原物质的混合标准品溶液，同分异构体单独配置单标溶液，采用正负离子切换FullMS/ddMS2扫描方式分析，获得多种过敏原物质的保留时间、一级母离子和二级碎片离子精确质量数，构建过敏原物质数据库。所述步骤(2)具体为准确称取待测样品0.25g至50mL离心管中，加入25mL甲醇和2g/L抗坏血酸水溶液，1∶1，v/v，涡旋1min，超声提取15min，10000r/min离心5min，移取上清液过0.22μm微孔滤膜，上机检测；蜡质含量较高、油包水类样品先加入5mL正己烷分散均匀后，再涡旋超声提取。作为优选，液相色谱流速：0.3mL/min；柱温：30℃；梯度洗脱条件：0～1min10％A，2～6min10％～50％A，6～8min50％～60％A，8～16min60％A，16～18min60％～10％A，18～20min10％～90％A，20～26min90％A，26～29min90％～10％A，29～30min10％A。所述定量筛查方法建立的具体步骤为：利用TraceFinder软件将建立的过敏原数据库导入后，设置筛查参数(包括保留时间偏差设为30s、母离子精确质量数质量偏差阈值设为5ppm、碎片离子精确质量数质量偏差阈值设为10ppm)，建立定性筛查方法，将样品通过高分辨质谱分析获得的信息与谱库相关信息匹配，实现目标物的高通量筛查确证。所述定量分析方法的建立：以过敏原一级母离子作为定量离子，建立定量分析方法，以外标法定量。本专利技术采用一步法提取香料类、防腐剂类、染发组分类56种不同种类的过敏原，大大简化了前处理步骤。采用高分辨质谱正负离子切换的方式进行检测，筛查只需要一个检测系统一针完成，方法简便快速，提高了检测通量，又涵盖更多的过敏原种类；且所建立的数据库中既有母离子的精确质量数，又有二级碎片离子信息，降低了假阳性出现的几率，采用高分辨质谱建立的定性筛查和定量分析方法准确度和灵敏度高。附图说明图1为56种过敏原的提取离子色谱图。图2为56种过敏原的二级质谱图。图3为染发剂中检出2-氨基-3-羟基吡啶和2，4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐的色谱图和二级质谱图。图4为沐浴露中检出甲基异噻唑啉酮和甲基氯异噻唑啉酮的色谱图和二级质谱图。具体实施方式实施例1仪器：obitrap高分辨质谱仪(美国ThermoFisher公司)；CR22GII高速冷冻离心机(日本日立公司)。试剂：肉桂醇、肉桂醛、甲基异噻唑啉酮、2-氨基-3羟基吡啶、4-氨基-2-羟基甲苯、2，4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐、N，N-双(2-羟乙基)对苯二胺硫酸盐、2-氯对苯二胺硫酸盐、苯基甲基吡唑啉酮、4-氨基-3-硝基苯酚、4-硝基邻苯二胺、对甲基氨基苯酚硫酸盐、6-羟基吲哚、N-苯基对苯二胺、2，7-萘二酚、1，5-萘二酚购自上海安谱，重氮烷基脲购自美国Accustandard，其余均购自德国Dr.Ehrenstorfer公司，纯度均＞95％。染发组分标准品储备液甲苯-2，5-二胺硫酸盐和2-氯对苯二胺硫酸盐采用2g/L抗坏血酸水溶液配置；2-硝基对苯二胺、甲苯-3，4-二胺用甲醇配置，其余标准品采用甲醇-2g/L抗坏血酸水溶液(50∶50，V/V)配置；香料类和防腐剂类过敏原标准品储备液采用甲醇配制。甲醇(色谱纯，美国默克公司)；正己烷、乙酸铵(色谱纯，德国CNW公司)。超高效液相色谱-高分辨质谱检测条件：(1)色谱条件：色谱柱：ZORBAXEclipsePlusC18(3.0mm×100mm，1.8μm)；流速：0.3mL/min；柱温：30℃；进样体积：5μL；流动相：A为甲醇，B为5mmol/L的乙酸铵水溶液，梯度洗脱条件：0～1min10％A，2～6min10％～50％A，6～8min50％～60％A，8～16min60％A，16～18min60％～10％A，18～20min10％～90％A，20～26min90％A，26～29min90％～10％A，29～30min10％A。(2)质谱条件：喷雾电压：正离子模式3.5kV本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种化妆品中过敏原检测法，其特征在于包括如下步骤：(1)建立过敏原数据库；(2)待测样品的处理；(3)检测：采用超高效液相色谱‑静电场轨道阱高分辨质谱进行检测，所述超高效色谱条件为：色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18；流动相A为甲醇，流动相B为5mmol/L的乙酸铵水溶液，梯度洗脱程序；所述质谱的条件为：电喷雾离子源；正负离子扫描；离子源温度：350℃；喷雾电压：正离子模式3.5kV，负离子模式3.0kV；所述过敏原为香料类过敏原、防腐剂类过敏原、染发成分类过敏原。

【技术特征摘要】
1.一种化妆品中过敏原检测法，其特征在于包括如下步骤：(1)建立过敏原数据库；(2)待测样品的处理；(3)检测：采用超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱进行检测，所述超高效色谱条件为：色谱柱：ZORBAXEclipsePlusC18；流动相A为甲醇，流动相B为5mmol/L的乙酸铵水溶液，梯度洗脱程序；所述质谱的条件为：电喷雾离子源；正负离子扫描；离子源温度：350℃；喷雾电压：正离子模式3.5kV，负离子模式3.0kV；所述过敏原为香料类过敏原、防腐剂类过敏原、染发成分类过敏原。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征是所述香料类过敏原为苎烯、苯甲醇、芳樟醇、香茅醇、香叶醇、羟基香茅醛、丁香酚、异丁香酚、α-异甲基紫罗兰酮、铃兰醛、新铃兰醛、已基肉桂醛、苯甲酸苄酯、水杨酸苄酯、肉桂酸苄酯、戊基肉桂醛、肉桂醇柠檬醛、肉桂醛、香豆素。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征是所述防腐剂类过敏原为甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、重氮烷基脲、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸丁酯、水杨酸、苯甲酸、山梨酸。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征是所述染发成分类过敏原为间苯二酚、甲苯-2，5-二胺硫酸盐、对苯二胺、对氨基苯酚、间氨基苯酚、2-氨基-3羟基吡啶、4-氯间苯二酚、4-氨基-2-羟基甲苯、2，4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐、N，N-双(2-羟乙基)对苯二胺硫酸盐、2-氯对苯二胺硫酸盐、2-甲基间苯二酚、6-氨基间甲酚、苯基甲基吡唑啉酮、4-氨基-3-硝基苯酚、4-氨基间甲酚、对甲基氨基苯酚硫酸盐、4-硝基邻苯二胺、2，6-二氨基吡啶、6-羟基吲哚、2，7-萘二酚、N-苯基对苯二胺、1，5-萘二酚或1-萘酚。5.根据权利要求1-4任一项所述的检测方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：李兆杰，鞠玲燕，高飞，徐成钢，刘玉敏，魏玮，
申请(专利权)人：青岛农业大学，中华人民共和国威海海关，
类型：发明
国别省市：山东,37