一种用于细菌耐药性检测的引物组、试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于细菌耐药性检测的引物组、试剂盒和检测方法，涉及细菌耐药性检测技术领域。该引物组包括如下引物组合中的一种或多种：引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4、引物组合5、引物组合6、引物组合7、引物组合8和引物组合9。采用该引物组通过多重PCR可以检测细菌的四环素耐药基因，通过检测其四环素耐药基因来检测细菌四环素耐药性。

A Primer Set, Kit and Detection Method for Bacterial Resistance Detection

【技术实现步骤摘要】
一种用于细菌耐药性检测的引物组、试剂盒和检测方法
本专利技术涉及细菌耐药性检测
，具体而言，涉及一种用于细菌耐药性检测的引物组、试剂盒和检测方法。
技术介绍
四环素类抗生素(tetracyclines)是一类广普抗生素，在禽畜养殖场中被大量使用，导致病原菌产生耐药性。国内外的大量研究结果表明，畜禽养殖环境及相关生鲜肉产品中的多种细菌(包括沙门氏菌、单增李斯特氏菌、弯曲杆菌等致病菌，以及大量非致病菌，涵盖革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌)已对四环素类抗生素具备了很高的耐药性。细菌之所以具有耐药性，从本质上看是因为携带各类耐药基因，且耐药基因可以在不同菌种间进行水平迁移，使得耐药性问题急剧扩散。耐药基因的检测技术主要包括普通聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)、多重PCR、实时荧光定量PCR和基因芯片等技术。耐药基因的检测工作量巨大，因为一方面，大量证据表明数量庞大的细菌可以是耐药基因的供体、受体和中间体；而另一方面，耐药基因种类繁多，比如目前已发现的四环素耐药基因就多达40多种。上述耐药基因的检测技术中，实时荧光定量PCR技术和基因芯片技术都能实现耐药基因的高通量的筛查，但均依赖较为昂贵的硬件设备，试剂和耗材的成本也较高，不易推广应用。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于细菌耐药性检测的引物组，采用该引物组通过多重PCR可以检测细菌的四环素耐药基因，通过检测其四环素耐药基因来检测细菌四环素耐药性。本专利技术的另一目的在于提供一种细菌耐药性检测试剂盒，采用该试剂盒通过多重PCR可以检测细菌的四环素耐药基因，通过检测其四环素耐药基因来检测细菌四环素耐药性。本专利技术的另一目的在于提供一种细菌耐药性的检测方法，该检测方法通过多重PCR检测细菌的四环素耐药基因，通过检测其四环素耐药基因来检测细菌四环素耐药性。本专利技术是这样实现的：在整个细菌范围内进行耐药基因的筛查研究，现有试验大多基于单重或不多于三重的PCR技术展开，且涉及的四环素耐药基因种类不多，因此筛查效率较低，还易因耐药基因的漏检使得耐药菌的判定结果偏低，丢失大量耐药数据。如若能够开发多至五重的多重PCR技术，并涵盖大部分四环素耐药基因，则能大大提高细菌中四环素耐药基因的筛查效率和阳性率。基于此，一方面，本专利技术提供了一种用于细菌耐药性检测的引物组，其包括如下引物组合中的一种或多种：引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4、引物组合5、引物组合6、引物组合7、引物组合8和引物组合9；其中，引物组合1包括：SEQIDNO.1-10所示的引物；引物组合2包括：SEQIDNO.11-20所示的引物；引物组合3包括：SEQIDNO.21-30所示的引物；引物组合4包括：SEQIDNO.31-40所示的引物；引物组合5包括：SEQIDNO.41-50所示的引物；引物组合6包括：SEQIDNO.51-60所示的引物；引物组合7包括：SEQIDNO.61-70所示的引物；引物组合8包括：SEQIDNO.71-80所示的引物；引物组合9包括：SEQIDNO.81-88所示的引物。引物组合1中：SEQIDNO.1-2所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetA；SEQIDNO.3-4所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetD；SEQIDNO.5-6所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetG；SEQIDNO.7-8所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetS；SEQIDNO.9-10所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetX；引物组合2中：SEQIDNO.11-12所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetC；SEQIDNO.13-14所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetU；SEQIDNO.15-16所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetZ；SEQIDNO.17-18所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet38；SEQIDNO.19-20所示的引物对可以扩增四环素耐药基因otrB；引物组合3中：SEQIDNO.21-22所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetB(P)；SEQIDNO.23-24所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetV；SEQIDNO.25-26所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet30；SEQIDNO.27-28所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet35；SEQIDNO.29-30所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet44；引物组合4中：SEQIDNO.31-32所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetE；SEQIDNO.33-34所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetH；SEQIDNO.35-36所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetK；SEQIDNO.37-38所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet43；SEQIDNO.39-40所示的引物对可以扩增四环素耐药基因otrC；引物组合5中：SEQIDNO.41-42所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetO；SEQIDNO.43-44所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetY；SEQIDNO.45-46所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet31；SEQIDNO.47-48所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet32；SEQIDNO.49-50所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet36；引物组合6中：SEQIDNO.51-52所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetJ；SEQIDNO.53-54所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetR；SEQIDNO.55-56所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet40；EQIDNO.57-58所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet42；SEQIDNO.59-60所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet45；引物组合7中：SEQIDNO.61-62所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetA(p)；SEQIDNO.63-64所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetW；SEQIDNO.65-66所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet34；SEQIDNO.67-68所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet41；SEQIDNO.69-70所示的引物对可以扩增四环素耐药基因otrA；引物组合8中：SEQIDNO.71-72所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetQ；SEQIDNO.73-74所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet33；SEQIDNO.75-76所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet37；SEQIDNO.77-78所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tet39；SEQIDNO.79-80所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tcr；引物组合9中：SEQIDNO.81-82所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetB；SEQIDNO.83-84所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetL；SEQIDNO.85-86所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetM；SEQIDNO.87-88所示的引物对可以扩增四环素耐药基因tetT。该引物组可以对细菌44种四环素耐药基检测，包括：tetA、tetA(P)、tetB、tetB(P)、tetC、tetD、tetE、tetG、tetH、tetJ、te本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于细菌耐药性检测的引物组，其特征在于，其包括如下引物组合中的一种或多种：引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4、引物组合5、引物组合6、引物组合7、引物组合8和引物组合9；其中，引物组合1包括：SEQ ID NO.1‑10所示的引物；引物组合2包括：SEQ ID NO.11‑20所示的引物；引物组合3包括：SEQ ID NO.21‑30所示的引物；引物组合4包括：SEQ ID NO.31‑40所示的引物；引物组合5包括：SEQ ID NO.41‑50所示的引物；引物组合6包括：SEQ ID NO.51‑60所示的引物；引物组合7包括：SEQ ID NO.61‑70所示的引物；引物组合8包括：SEQ ID NO.71‑80所示的引物；引物组合9包括：SEQ ID NO.81‑88所示的引物。

【技术特征摘要】
1.一种用于细菌耐药性检测的引物组，其特征在于，其包括如下引物组合中的一种或多种：引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4、引物组合5、引物组合6、引物组合7、引物组合8和引物组合9；其中，引物组合1包括：SEQIDNO.1-10所示的引物；引物组合2包括：SEQIDNO.11-20所示的引物；引物组合3包括：SEQIDNO.21-30所示的引物；引物组合4包括：SEQIDNO.31-40所示的引物；引物组合5包括：SEQIDNO.41-50所示的引物；引物组合6包括：SEQIDNO.51-60所示的引物；引物组合7包括：SEQIDNO.61-70所示的引物；引物组合8包括：SEQIDNO.71-80所示的引物；引物组合9包括：SEQIDNO.81-88所示的引物。2.一种细菌耐药性检测试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1所述的引物组。3.根据权利要求2所述的细菌耐药性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：Taq酶、dNTP、MgCl2和PCR反应缓冲液。4.一种细菌耐药性的检测方法，其特征在于，其包括：使用如下引物组合中的任意一种引物组合进行PCR反应：引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4、引物组合5、引物组合6、引物组合7、引物组合8和引物组合9；其中，引物组合1包括：SEQIDNO.1-10所示的引物；引物组合2包括：SEQIDNO.11-20所示的引...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵毅，白龙，周昌艳，黄柳娟，冯博，刘海燕，白冰，林淼，金晓芬，姚春霞，司文帅，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海,31