铜-64标记DNA单链的方法技术

本发明专利技术公开了一种铜‑64标记DNA单链的方法，包括如下步骤：将ssDNA与螯合剂p‑SCN‑Bn‑NOTA进行偶联；将2mCi溶于0.1M HCl溶液的铜‑64，与100μL的醋酸钠溶液混匀，加入500μL的NOTA‑ssDNA，在37℃下反应1小时，在反应期间，放射性标记率通过薄层色谱检测，反应结束后，得到的混合物通过NAP‑5脱盐柱进行纯化，0.05M的乙二胺四乙酸钠溶液用作流动相，得到纯化的目标产物

Copper-64 labeling method for single strand DNA

【技术实现步骤摘要】
铜-64标记DNA单链的方法
本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及一种铜-64标记DNA单链的方法。
技术介绍
脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid，DNA)是所有已知生物和一些病毒的遗传信息载体。基于Watson-Crick碱基配对原则，DNA分子之间发生相互作用，构成了DNA多面体结构的可编程性及DNA纳米技术的基础。通过DNA纳米技术，DNA分子能够自组装配成人工纳米结构，即DNA多面体结构。这些DNA多面体结构具有一些独特性质：明确定义的尺寸(纳米级)，几何形状(精确、复杂的三维空间结构)，生物相容性(由DNA组成)，易于修饰(利用化学手段对组成DNA多面体结构的单链DNA进行修饰)。这些特性使得DNA成为各种应用的理想选择，其可以单独使用或与其他材料组合用于多种生物学和生物医学应用。目前，一些DNA多面体结构已被用于生物传感，分子成像或药物载带等方面。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种铜-64标记DNA单链的方法。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：铜-64标记DNA单链的方法，包括如下步骤：S1、将ssDNA与螯合剂p-SCN-Bn-NOTA进行偶联首先对ssDNA的5’端进行氨基修饰；然后将一定量的氨基修饰ssDNA溶解于磷酸盐缓冲液中，配成0.1mM的ssDNA溶液；再量取0.5mgp-SCN-Bn-NOTA粉末溶解在DMSO中，将其加入ssDNA溶液中，并使用碳酸钠缓冲液调节pH至8.5-9.0；将反应溶液在室温下持续振荡2小时，反应结束后，利用NAP-5脱盐柱对反应溶液进行纯化，1xPBS作为洗脱缓冲液，得到纯化后的偶联NOTA的ssDNA，即为NOTA-ssDNA；S2、将2mCi溶于0.1MHCl中溶液的铜-64，与100μL的醋酸钠溶液混匀，加入500μL的NOTA-ssDNA后，在37℃下反应1小时，在反应期间，放射性标记率通过薄层色谱(ThinLayerChromatography，TLC)检测，反应结束后，得到的混合物通过NAP-5脱盐柱进行纯化，0.05M乙二胺四乙酸钠溶液用作流动相，得到纯化的目标产物64Cu-ssDNA。本专利技术所得的铜-64标记DNA单链可用于制备基于DNA多面体结构的PET分子探针，所得的PET分子探针使用的是正电子核素，能够同时发射两个背向光子，可实现病灶的精准定位，分辨率高，图像清楚。本专利技术具有以下有益效果：利用本专利技术所得的铜-64标记DNA单链(64Cu-ssDNA)，与不同结构的含有手臂链的DNA多面体混合杂交，可以制备出不同结构的铜-64标记DNA多面体。而所得的铜-64标记DNA多面体可用于制备基于DNA多面体的PET分子探针，所得的PET分子探针使用的是正电子核素，能够同时发射两个背向光子，可实现病灶的精准定位，分辨率高，图像清楚。附图说明图1为本专利技术实施例铜-64标记DNA单链的制备方法的路线图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本专利技术的保护范围。本专利技术实施例提供了铜-64标记DNA单链的制备方法，如图1所示，首先将氨基修饰ssDNA与双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA进行偶联，得到NOTA-ssDNA溶液；再将NOTA-ssDNA溶液与铜-64溶液混匀，反应1h后TLC检测，放化标记率为66.4±2.85％(n＝3)；利用NAP-5脱盐柱对反应溶液进行纯化，得到64Cu-ssDNA溶液，放化纯度>95％。具体的：为了对DNA单链(ssDNA)进行铜-64标记，需要先将ssDNA与螯合剂p-SCN-Bn-NOTA进行偶联。首先对ssDNA的5’端进行氨基修饰；然后将一定量的氨基修饰ssDNA溶解于磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferedSaline，PBS)中，配成0.1mM的ssDNA溶液；再量取0.5mgp-SCN-Bn-NOTA粉末溶解在DMSO中，将其加入ssDNA溶液中，并使用碳酸钠缓冲液调节pH至8.5-9.0。反应溶液在室温下持续振荡2小时。反应结束后，利用NAP-5脱盐柱对反应溶液进行纯化，1xPBS作为洗脱缓冲液，得到纯化后的偶联NOTA的ssDNA(NOTA-ssDNA)。DNA的浓度由UV-VIS光谱仪(AgilentCary60，AgilentTechnologies，SantaClara，CA，USA)测量，用于后续标记实验。将2mCi铜-64溶液(溶于0.1MHCl)与100μL的醋酸钠溶液(0.05M，pH5.5)混匀，加入500μL的NOTA-ssDNA后，在37℃下反应1小时。在反应期间，放射性标记率通过薄层色谱(ThinLayerChromatography，TLC)检测。反应结束后，得到的混合物通过NAP-5脱盐柱进行纯化，乙二胺四乙酸钠溶液(0.05M)用作流动相，得到纯化的目标产物64Cu-ssDNA。以上对本专利技术的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本专利技术并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本专利技术的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.铜‑64标记DNA单链的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、将ssDNA与螯合剂p‑SCN‑Bn‑NOTA进行偶联首先对ssDNA的5’端进行氨基修饰；然后将一定量的氨基修饰ssDNA溶解于磷酸盐缓冲液中，配成0.1mM的ssDNA溶液；再量取0.5mg p‑SCN‑Bn‑NOTA粉末溶解在DMSO中，将其加入ssDNA溶液中，并使用碳酸钠缓冲液调节pH至8.5‑9.0；将反应溶液在室温下持续振荡2小时，反应结束后，利用NAP‑5脱盐柱对反应溶液进行纯化，1xPBS作为洗脱缓冲液，得到纯化后的偶联NOTA的ssDNA，即NOTA‑ssDNA；S2、将2mCi溶于0.1M HCl溶液的铜‑64，与100μL的醋酸钠溶液混匀，加入500μL的NOTA‑ssDNA后，在37℃下反应1小时，在反应期间，放射性标记率通过薄层色谱检测，反应结束后，得到的混合物通过NAP‑5脱盐柱进行纯化，0.05M的乙二胺四乙酸钠溶液用作流动相，得到纯化的目标产物

【技术特征摘要】
1.铜-64标记DNA单链的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、将ssDNA与螯合剂p-SCN-Bn-NOTA进行偶联首先对ssDNA的5’端进行氨基修饰；然后将一定量的氨基修饰ssDNA溶解于磷酸盐缓冲液中，配成0.1mM的ssDNA溶液；再量取0.5mgp-SCN-Bn-NOTA粉末溶解在DMSO中，将其加入ssDNA溶液中，并使用碳酸钠缓冲液调节pH至8.5-9.0；将反应溶液在室温下持续振荡2小时，反应结束后，利用NAP-...

【专利技术属性】
技术研发人员：李剑波，段晓燕，都义日，翁兆平，王涛，
申请(专利权)人：李剑波，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15