用于快速检测13种高危型HPV的LAMP引物组合及应用制造技术

本发明专利技术公开了用于快速检测13种高危型HPV的LAMP引物组合及应用。LAMP引物组合由序列1至序列68所示的68种DNA分子组成。引物组合可应用于检测待测样本中是否含有高危型HPV，高危型HPV为HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59和HPV68中的至少一种。采用该引物组合检测高危型HPV具有高特异性和高灵敏度，可以实现简便、快速、准确检测。本发明专利技术具有重大的推广价值。

LAMP Primer Combination for Rapid Detection of 13 High Risk HPV Types and Its Application

【技术实现步骤摘要】
用于快速检测13种高危型HPV的LAMP引物组合及应用
本专利技术属于生物医学领域，具体涉及用于快速检测13种高危型HPV的LAMP引物组合及应用。
技术介绍
宫颈癌是严重影响女性健康的妇科肿瘤之一，也是目前唯一病因明确的恶性肿瘤，即持续的人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染。通过HPV的检测，宫颈癌可以真正做到早期发现和预防，还可为疫苗接种提供依据，因此高危型HPV的分型检测已经成为宫颈癌筛查的临床常规检测手段。目前已知的HPV有150多种，约20种与肿瘤相关。依据发生肿瘤的危险性分为低危型和高危型两大类。高危型HPV包括HPV16(即人乳头瘤病毒16型)、HPV18(即人乳头瘤病毒18型)、HPV31(即人乳头瘤病毒31型)、HPV33(即人乳头瘤病毒33型)、HPV35(即人乳头瘤病毒35型)、HPV39(即人乳头瘤病毒39型)、HPV45(即人乳头瘤病毒45型)、HPV51(即人乳头瘤病毒51型)、HPV52(即人乳头瘤病毒52型)、HPV56(即人乳头瘤病毒56型)、HPV58(即人乳头瘤病毒58型)、HPV59(即人乳头瘤病毒59型)、HPV68(即人乳头瘤病毒68型)等，其中HPV16和HPV18最为严重。现有的HPV检测手段包括HC2捕获法、导流杂交法和荧光定量PCR法，但均具有一定的缺点。HC2捕获法的优势在于不需要PCR扩增，因此不存在样品交叉污染的风险，但是该方法只能区分是否为高危型感染，但是无法确定病毒的具体型别，无法给患者的疫苗接种以及后续治疗提供更有价值的帮助；而且，整个检测时间需要4个多小时，检测体系为国外进口，检测成本也相对较高，在临床的实际可行性相对较差。导流杂交法的优势是通过核酸杂交芯片可以实现病毒的具体分型，不光可以区分15种高危型，还可以区分5种低危型，是目前分型最为全面的检测体系；但该方法的不足在于PCR之后的杂交操作存在气溶胶污染的风险，对检测实验室的要求较高，而且每批最多只能检测15或30例，检测时间也在4个小时左右，在样品较多时会非常费时费力。荧光定量PCR法的优势是采用闭管操作可以避免气溶胶的污染，而且通过荧光探针的设计，可以实现病毒的具体分型，检测时间约为1.5个小时，是目前应用最为广泛的HPV检测技术；该方法的主要不足在于荧光探针的成本相对较高，而且荧光定量PCR仪的技术门槛相对略高，不利于大面积人群的广泛普筛。由此可见，开发一种简捷方便、成本低廉的检测体系，对HPV的分型做出快速、准确、客观的判断，则可以在更广泛的人群之中开展HPV的筛查，真正做到早发现、早治疗，从而杜绝宫颈癌对女性健康所带来的危害。环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification，LAMP)是NotomiT.于2000年开发等温核酸扩增方法，其原理是在一种具有链置换活性的DNA聚合酶的作用下，识别6-8个区域的4-6条引物，在60-65℃的等温条件下高效、快速、特异的扩增目的基因。该方法具有简便、快速、准确、灵敏、特异等优势，目前已广泛应用于大规模病原微生物筛查、食品卫生检疫等领域。由于检测成本低廉，对人员和仪器设备的要求较低，非常适合现场的快速检测以及实验条件相对落后的基层单位使用。LAMP技术中，引物是决定检测结果灵敏度和特异性的关键因素。
技术实现思路
本专利技术的目的是鉴定高危型HPV的。本专利技术首先保护一种引物组合，可为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物组HPV16、引物组HPV18、引物组HPV31、引物组HPV33、引物组HPV35、引物组HPV39、引物组HPV45、引物组HPV51、引物组HPV52、引物组HPV56、引物组HPV58、引物组HPV59和引物组HPV68组成；(a2)包括引物组HPV16、引物组HPV18、引物组HPV31、引物组HPV33、引物组HPV35、引物组HPV39、引物组HPV45、引物组HPV51、引物组HPV52、引物组HPV56、引物组HPV58、引物组HPV59和引物组HPV68；(a3)引物组HPV16、引物组HPV18、引物组HPV31、引物组HPV33、引物组HPV35、引物组HPV39、引物组HPV45、引物组HPV51、引物组HPV52、引物组HPV56、引物组HPV58、引物组HPV59或引物组HPV68。引物组HPV16可由引物HPV16-F3、引物HPV16-B3、引物HPV16-FIP、引物HPV16-BIP和引物HPV16-LB组成；所述引物HPV16-F3的核苷酸序列可如序列表中序列1所示；引物HPV16-B3的核苷酸序列可如序列表中序列2所示；引物HPV16-FIP的核苷酸序列可如序列表中序列3所示；引物HPV16-BIP的核苷酸序列可如序列表中序列4所示；引物HPV16-LB的核苷酸序列可如序列表中序列5所示。引物组HPV18可由引物HPV18-F3、引物HPV18-B3、引物HPV18-FIP、引物HPV18-BIP、引物HPV18-LB和引物HPV18-LF组成；引物HPV18-F3的核苷酸序列可如序列表中序列6所示；引物HPV18-B3的核苷酸序列可如序列表中序列7所示；引物HPV18-FIP的核苷酸序列可如序列表中序列8所示；引物HPV18-BIP的核苷酸序列可如序列表中序列9所示；引物HPV18-LB的核苷酸序列可如序列表中序列10所示；引物HPV18-LF的核苷酸序列可如序列表中序列11所示。引物组HPV31可由引物HPV31-F3、引物HPV31-B3、引物HPV31-FIP、引物HPV31-BIP和引物HPV31-LF组成；引物HPV31-F3的核苷酸序列可如序列表中序列12所示；引物HPV31-B3的核苷酸序列可如序列表中序列13所示；引物HPV31-FIP的核苷酸序列可如序列表中序列14所示；引物HPV31-BIP的核苷酸序列可如序列表中序列15所示；引物HPV31-LF的核苷酸序列可如序列表中序列16所示。引物组HPV33可由引物HPV33-F3、引物HPV33-B3、引物HPV33-FIP、引物HPV33-BIP和引物HPV33-LF组成；引物HPV33-F3的核苷酸序列可如序列表中序列17所示；引物HPV33-B3的核苷酸序列可如序列表中序列18所示；引物HPV33-FIP的核苷酸序列可如序列表中序列19所示；引物HPV33-BIP的核苷酸序列可如序列表中序列20所示；引物HPV33-LF的核苷酸序列可如序列表中序列21所示。引物组HPV35可由引物HPV35-F3、引物HPV35-B3、引物HPV35-FIP、引物HPV35-BIP和引物HPV35-LF组成；引物HPV35-F3的核苷酸序列可如序列表中序列22所示；引物HPV35-B3的核苷酸序列可如序列表中序列23所示；引物HPV35-FIP的核苷酸序列可如序列表中序列24所示；引物HPV35-BIP的核苷酸序列可如序列表中序列25所示；引物HPV35-LF的核苷酸序列可如序列表中序列26所示。引物组HPV39可由引物HPV39-F3、引物HPV39-B3、引物HPV39-FIP、引物HPV39-BIP、引物HPV39-LB和引物H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物组HPV16、引物组HPV18、引物组HPV31、引物组HPV33、引物组HPV35、引物组HPV39、引物组HPV45、引物组HPV51、引物组HPV52、引物组HPV56、引物组HPV58、引物组HPV59和引物组HPV68组成；(a2)包括引物组HPV16、引物组HPV18、引物组HPV31、引物组HPV33、引物组HPV35、引物组HPV39、引物组HPV45、引物组HPV51、引物组HPV52、引物组HPV56、引物组HPV58、引物组HPV59和引物组HPV68；(a3)引物组HPV16、引物组HPV18、引物组HPV31、引物组HPV33、引物组HPV35、引物组HPV39、引物组HPV45、引物组HPV51、引物组HPV52、引物组HPV56、引物组HPV58、引物组HPV59或引物组HPV68；引物组HPV16由引物HPV16‑F3、引物HPV16‑B3、引物HPV16‑FIP、引物HPV16‑BIP和引物HPV16‑LB组成；所述引物HPV16‑F3的核苷酸序列如序列表中序列1所示；引物HPV16‑B3的核苷酸序列如序列表中序列2所示；引物HPV16‑FIP的核苷酸序列如序列表中序列3所示；引物HPV16‑BIP的核苷酸序列如序列表中序列4所示；引物HPV16‑LB的核苷酸序列如序列表中序列5所示；引物组HPV18由引物HPV18‑F3、引物HPV18‑B3、引物HPV18‑FIP、引物HPV18‑BIP、引物HPV18‑LB和引物HPV18‑LF组成；引物HPV18‑F3的核苷酸序列如序列表中序列6所示；引物HPV18‑B3的核苷酸序列如序列表中序列7所示；引物HPV18‑FIP的核苷酸序列如序列表中序列8所示；引物HPV18‑BIP的核苷酸序列如序列表中序列9所示；引物HPV18‑LB的核苷酸序列如序列表中序列10所示；引物HPV18‑LF的核苷酸序列如序列表中序列11所示；引物组HPV31由引物HPV31‑F3、引物HPV31‑B3、引物HPV31‑FIP、引物HPV31‑BIP和引物HPV31‑LF组成；引物HPV31‑F3的核苷酸序列如序列表中序列12所示；引物HPV31‑B3的核苷酸序列如序列表中序列13所示；引物HPV31‑FIP的核苷酸序列如序列表中序列14所示；引物HPV31‑BIP的核苷酸序列如序列表中序列15所示；引物HPV31‑LF的核苷酸序列如序列表中序列16所示；引物组HPV33由引物HPV33‑F3、引物HPV33‑B3、引物HPV33‑FIP、引物HPV33‑BIP和引物HPV33‑LF组成；引物HPV33‑F3的核苷酸序列如序列表中序列17所示；引物HPV33‑B3的核苷酸序列如序列表中序列18所示；引物HPV33‑FIP的核苷酸序列如序列表中序列19所示；引物HPV33‑BIP的核苷酸序列如序列表中序列20所示；引物HPV33‑LF的核苷酸序列如序列表中序列21所示；引物组HPV35由引物HPV35‑F3、引物HPV35‑B3、引物HPV35‑FIP、引物HPV35‑BIP和引物HPV35‑LF组成；引物HPV35‑F3的核苷酸序列如序列表中序列22所示；引物HPV35‑B3的核苷酸序列如序列表中序列23所示；引物HPV35‑FIP的核苷酸序列如序列表中序列24所示；引物HPV35‑BIP的核苷酸序列如序列表中序列25所示；引物HPV35‑LF的核苷酸序列如序列表中序列26所示；引物组HPV39由引物HPV39‑F3、引物HPV39‑B3、引物HPV39‑FIP、引物HPV39‑BIP、引物HPV39‑LB和引物HPV39‑LF组成；引物HPV39‑F3的核苷酸序列如序列表中序列27所示；引物HPV39‑B3的核苷酸序列如序列表中序列28所示；引物HPV39‑FIP的核苷酸序列如序列表中序列29所示；引物HPV39‑BIP的核苷酸序列如序列表中序列30所示；引物HPV39‑LB的核苷酸序列如序列表中序列31所示；引物HPV39‑LF的核苷酸序列如序列表中序列32所示；引物组HPV45由引物HPV45‑F3、引物HPV45‑B3、引物HPV45‑FIP、引物HPV45‑BIP和引物HPV45‑LB组成；引物HPV45‑F3的核苷酸序列如序列表中序列33所示；引物HPV45‑B3的核苷酸序列如序列表中序列34所示；引物HPV45‑FIP的核苷酸序列如序列表中序列35所示；引物HPV45‑BIP的核苷酸序列如序列表中序列36所示；引物HPV45‑LB的核苷酸序列如序列表中序列37所示；引物组HPV51由引物HPV51‑F3、引物HPV51‑B3、引物HPV51‑FIP、引物HPV51‑BIP、引物HPV51‑LB和...

【技术特征摘要】
1.引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物组HPV16、引物组HPV18、引物组HPV31、引物组HPV33、引物组HPV35、引物组HPV39、引物组HPV45、引物组HPV51、引物组HPV52、引物组HPV56、引物组HPV58、引物组HPV59和引物组HPV68组成；(a2)包括引物组HPV16、引物组HPV18、引物组HPV31、引物组HPV33、引物组HPV35、引物组HPV39、引物组HPV45、引物组HPV51、引物组HPV52、引物组HPV56、引物组HPV58、引物组HPV59和引物组HPV68；(a3)引物组HPV16、引物组HPV18、引物组HPV31、引物组HPV33、引物组HPV35、引物组HPV39、引物组HPV45、引物组HPV51、引物组HPV52、引物组HPV56、引物组HPV58、引物组HPV59或引物组HPV68；引物组HPV16由引物HPV16-F3、引物HPV16-B3、引物HPV16-FIP、引物HPV16-BIP和引物HPV16-LB组成；所述引物HPV16-F3的核苷酸序列如序列表中序列1所示；引物HPV16-B3的核苷酸序列如序列表中序列2所示；引物HPV16-FIP的核苷酸序列如序列表中序列3所示；引物HPV16-BIP的核苷酸序列如序列表中序列4所示；引物HPV16-LB的核苷酸序列如序列表中序列5所示；引物组HPV18由引物HPV18-F3、引物HPV18-B3、引物HPV18-FIP、引物HPV18-BIP、引物HPV18-LB和引物HPV18-LF组成；引物HPV18-F3的核苷酸序列如序列表中序列6所示；引物HPV18-B3的核苷酸序列如序列表中序列7所示；引物HPV18-FIP的核苷酸序列如序列表中序列8所示；引物HPV18-BIP的核苷酸序列如序列表中序列9所示；引物HPV18-LB的核苷酸序列如序列表中序列10所示；引物HPV18-LF的核苷酸序列如序列表中序列11所示；引物组HPV31由引物HPV31-F3、引物HPV31-B3、引物HPV31-FIP、引物HPV31-BIP和引物HPV31-LF组成；引物HPV31-F3的核苷酸序列如序列表中序列12所示；引物HPV31-B3的核苷酸序列如序列表中序列13所示；引物HPV31-FIP的核苷酸序列如序列表中序列14所示；引物HPV31-BIP的核苷酸序列如序列表中序列15所示；引物HPV31-LF的核苷酸序列如序列表中序列16所示；引物组HPV33由引物HPV33-F3、引物HPV33-B3、引物HPV33-FIP、引物HPV33-BIP和引物HPV33-LF组成；引物HPV33-F3的核苷酸序列如序列表中序列17所示；引物HPV33-B3的核苷酸序列如序列表中序列18所示；引物HPV33-FIP的核苷酸序列如序列表中序列19所示；引物HPV33-BIP的核苷酸序列如序列表中序列20所示；引物HPV33-LF的核苷酸序列如序列表中序列21所示；引物组HPV35由引物HPV35-F3、引物HPV35-B3、引物HPV35-FIP、引物HPV35-BIP和引物HPV35-LF组成；引物HPV35-F3的核苷酸序列如序列表中序列22所示；引物HPV35-B3的核苷酸序列如序列表中序列23所示；引物HPV35-FIP的核苷酸序列如序列表中序列24所示；引物HPV35-BIP的核苷酸序列如序列表中序列25所示；引物HPV35-LF的核苷酸序列如序列表中序列26所示；引物组HPV39由引物HPV39-F3、引物HPV39-B3、引物HPV39-FIP、引物HPV39-BIP、引物HPV39-LB和引物HPV39-LF组成；引物HPV39-F3的核苷酸序列如序列表中序列27所示；引物HPV39-B3的核苷酸序列如序列表中序列28所示；引物HPV39-FIP的核苷酸序列如序列表中序列29所示；引物HPV39-BIP的核苷酸序列如序列表中序列30所示；引物HPV39-LB的核苷酸序列如序列表中序列31所示；引物HPV39-LF的核苷酸序列如序列表中序列32所示；引物组HPV45由引物HPV45-F3、引物HPV45-B3、引物HPV45-FIP、引物HPV45-BIP和引物HPV45-LB组成；引物HPV45-F3的核苷酸序列如序列表中序列33所示；引物HPV45-B3的核苷酸序列如序列表中序列34所示；引物HPV45-FIP的核苷酸序列如序列表中序列35所示；引物HPV45-BIP的核苷酸序列如序列表中序列36所示；引物HPV45-LB的核苷酸序列如序列表中序列37所示；引物组HPV51由引物HPV51-F3、引物HPV51-B3、引物HPV51-FIP、引物HPV51-BIP、引物HPV51-LB和引物HPV51-LF组成；引物HPV51-F3的核苷酸序列如序列表中序列38所示；引物HPV51-B3的核苷酸序列如序列表中序列39所示；引物HPV51-FIP的核苷酸序列如序列表中序列40所示；引物HPV51-BIP的核苷酸序列如序列表中序列41所示；引物HPV51-LB的核苷酸序列如序列表中序列42所示；引物HPV51-LF的核苷酸序列如序列表中序列43所示；引物组HPV52由引物HPV52-F3、引物HPV52-B3、引物HPV52-FIP、引物HPV52-BIP和引物HPV52-LF组成；引物HPV52-F3的核苷酸序列如序列表中序列44所示；引物HPV52-B3的核苷酸序列如序列表中序列45所示；引物HPV52-FIP的核苷酸序列如序列表中序列46所示；引物HPV52-BIP的核苷酸序列如序列表中序列47所示；引物HPV52-LF的核苷酸序列如序列表中序列48所示；引物组HPV56由引物HPV56-F3、引物HPV56-B3、引物HPV56-FIP、引物HPV56-BIP和引物HPV56-LB组成；引物HPV56-F3的核苷酸序列如序列表中序列49所示；引物HPV56-B3的核苷酸序列如序列表中序列50所示；引物HPV56-FIP的核苷酸序列如序列表中序列51所示；引物HPV56-BIP的核苷酸序列如序列表中序列52所示；引物HPV56-LB的核苷酸序列如序列表中序列53所示；引物组HPV58由引物HPV58-F3、引物HPV58-B3、引物HPV58-FIP、引物HPV58-BIP和引物HPV58-LB组成；引物HPV58-F3的核苷酸序列如序列表中序列54所示；引物HPV58-B3的核苷酸序列如序列表中序列55所示；引物HPV58-FIP的核苷酸序列如序列表中序...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘毅，吴琼，胡海旭，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第五医学中心，
类型：发明
国别省市：北京,11